分子醫(yī)學技能-免疫：佐劑制備

1、佐劑制備 實驗目的和要求 n初次應答和再次應答抗體產(chǎn)生的規(guī)律；初次應答和再次應答抗體產(chǎn)生的規(guī)律； n影響機體免疫應答強度的因素。影響機體免疫應答強度的因素。 n制備牛血清白蛋白（制備牛血清白蛋白（BSABSA）的抗血清；）的抗血清； n熟悉熟悉佐劑佐劑的制備和動物免疫的常用方法的制備和動物免疫的常用方法； n了解抗體檢測常用方法。了解抗體檢測常用方法。 在免疫學實驗中在免疫學實驗中, ,為制備抗體通常以為制備抗體通常以 抗原性物質給動物注射抗原性物質給動物注射, ,經(jīng)一定時間經(jīng)一定時間 后后, ,動物血清中可產(chǎn)生大量特異性抗動物血清中可產(chǎn)生大量特異性抗 體，這種含有特異性抗體的血清稱體，這種含

2、有特異性抗體的血清稱免免 疫血清疫血清。 抗體的產(chǎn)生通常與抗體的產(chǎn)生通常與抗原的質和量抗原的質和量、動動 物種類物種類以及以及接種途徑接種途徑有密切關系。有密切關系。 實驗原理 l免疫佐劑制備免疫佐劑制備及動物初次免疫動物初次免疫 W1W2W3 初次免疫 再次免疫 實驗材料 n動物：昆明鼠（每組一只），約20g只。 n抗原：4mgml牛血清白蛋白（BSA) n佐劑：完全福氏佐劑。 n其它： 無菌小試管，棉簽，1ml注射器、12針頭等。 1.5mlBSA 1.5ml完全 福氏佐劑 攪拌 完全乳化 1.抗原制備 滴于水中經(jīng)久不散 2.動物免疫 n用1ml注射器12針頭吸出完全乳化的抗原1ml； n

3、換4針頭雙后足墊和背部皮下接種，每處約 10-20l。(接種處先用碘酒、酒精消毒) n免疫后的小鼠斷頸處死。 注意: 攪拌時間約為攪拌時間約為1515分鐘分鐘 老老鼠斷頸椎處死后放到樓梯口的紅桶鼠斷頸椎處死后放到樓梯口的紅桶 切勿將攪拌針弄壞切勿將攪拌針弄壞 免疫佐劑(Adjuvents) n簡稱佐劑，是一種能非特異性地改變或增 強機體對抗原的特異性免疫應答、增強相 應抗原的免疫原性或改變免疫反應類型， 而自身并無免疫原性，不能引起免疫應答 反應的物質。 佐劑具有以下幾條標準 n無致癌性 n無毒性 n純度高 n有一定的吸附力 n在動物體內(nèi)能被降解吸收 n不含與動物有交叉反應的抗原物質 n不應誘

4、發(fā)自身超敏反應 n穩(wěn)定，儲存1 年以上不分解、不變質。 佐劑的分類 nCox等將佐劑分成兩個大類:特異性與非特異 性佐劑。 nSingh等將佐劑分成 具有抗原載體功能的佐劑,例如乳劑、ISCOM (免疫刺激復合物)和脂質體等; 具有免疫激活作用的佐劑,例如脂多糖(LPS) 、 胞壁酰二肽(MDP)和CpG寡聚脫氧核苷酸等。 佐劑的分類 nAudibert和Lise依據(jù)佐劑來源,將佐劑分成四類: n來源于植物的佐劑,例如皂甙和多糖類提取物等; n來源于病原微生物的佐劑,例如MDP、單磷脂A、 霍亂毒素以及CpG寡聚脫氧核苷酸等; n 化學合成佐劑,例如鋁化合物、復合多聚物、丙 交酯、乙交酯等;

5、n細胞因子和激素類佐劑,例如IL-2、GM-CSF以 及去氫表雄酮等。 Edelman對佐劑的分類 n表面活性物質及其微粒類,例如ISCOM、Ty類病毒顆粒等; n細菌或病毒產(chǎn)物,例如肺炎克雷伯桿菌糖蛋白、海藻糖結 核環(huán)脂酸鹽等,以及具有載體功能的白喉類毒素、B型腦膜炎 球菌外膜蛋白等; n細胞因子,例如或-干擾素、GM-CSF、IL-1、IL-2等; n激素,例如1, 25-二羥維生素D3、人生長激素等; n獨特抗原架構,例如N-端軟脂?；疌TL抗原決定簇與Th細 胞抗原決定簇的結合物等; n多陰離子物質,例如右旋糖苷; n多聚丙烯酸衍生物,例如丙烯酸與烯丙基蔗糖交聯(lián)物等; n活病原微生物,

6、例如啤酒酵母、減毒傷寒桿菌、戈登氏鏈 球菌等; n佐劑制劑,例如弗氏不完全佐劑、MF-59、脂質體等; n其它,例如CGP-11637、硬脂酰酪氨酸等。 佐劑作用機理和方式 n在注射部位形成抗原儲池,可以延緩抗原釋放速率, 延長免疫反應,提高免疫記憶細胞數(shù)量。 u例如,礦物膠體、乳劑類佐劑等 n有些佐劑具有載體功能,可以改變抗原的物理狀態(tài) 以及它們與免疫系統(tǒng)的作用方式。 u例如ISCOMS、脂質體等 n具有直接或間接藥理作用的佐劑,可以改變參與免 疫反應的多種細胞的功能。 佐劑改變參與免疫反應 n激活免疫細胞,尤其是巨噬細胞等APC,刺激巨噬細胞產(chǎn)生IL- 1，提高免疫細胞的局部濃度，提高AP

7、C的抗原遞呈功能 n通過直接作用于T細胞而發(fā)揮作用 n活化B細胞，例如LPS可以調(diào)節(jié)B 細胞表面Ig受體 n很多佐劑具有(旁路)激活補體的作用，例如菊粉、左旋咪唑 和酵母多糖等，有助于抗原與APC通過補體受體相結合 n某些佐劑還可能具有潛在誘導細胞毒作用 n小分子西弗氏堿類化合物作為佐劑，能夠替代通常存在于 抗原遞呈細胞表面的羧基生理性供體，進而與T細胞表面受 體中的胺類相互作用，為T細胞提供輔助刺激信號,并激活細 胞膜表面的Na+ -K+ ATP酶，使關鍵信號傳導蛋白磷酸化。 n佐劑調(diào)控細胞因子 佐劑的作用機理-增強或調(diào)節(jié)針對疫苗抗 原的免疫應答: n提高弱抗原的免疫原性 n提高免疫應答出現(xiàn)的速度和延長免疫應答的持續(xù)期 n集中產(chǎn)生保護性免疫應答 n調(diào)節(jié)抗體親和性、特異性、同種型或亞類轉換以及