小學體育少年拳教案

1、 Feulgen反應 實驗目的 了解Feulgen反應的原理，掌握有關(guān)的操作方法。 實驗原理 DNA可在酸性條件下水解，嘌呤脫氧核糖之間的糖苷鍵斷開，形成醛基(CHO)，再用顯示醛基的特異性試劑Schiff試劑處理，形成光鏡下所見的細胞核內(nèi)紫紅色反應產(chǎn)物。DNA 經(jīng)稀鹽酸處理而水解。除可破壞脫氧核糖與嘌呤堿外，還可水解嘧啶堿。酸水解核酸的程度與 水解時間長短有關(guān)，隨著水解時間的延長，嘌呤堿基增多，形成的醛基也隨之增多，F(xiàn)eulgen反應加強。如果水解時間過長，DNA將完全水解，反而使Feulgen反應減弱。DNA水解時間因組織種類和固定液不同而異，需通過預實驗找到合適的水解溫度和時間。由于Sc

2、hiff試劑能與醛基結(jié)合，故不能用含醛的固定液固定組織，常用Carnoy固定液。Bouin液不適用于Feulgen反應，因為固定液中含較多的酸，可將DNA水解，影響染色反應。 Schiff試劑是顯示醛基的特異試劑，其反應原理是堿性品紅(為紅紫色)經(jīng)亞硫酸處理后變?yōu)槲迳玈chiff液，Schiff液遇到醛基時，則被還原形成原有的顏色，即紅紫色。堿性品紅結(jié)構(gòu)中的醌基是堿性品紅中具有紫紅色的核心結(jié)構(gòu)，經(jīng)亞硫酸處理后，則醌基兩端的雙鍵打開，形成五色品ii-硫酸復合物為Schiff試劑。如果加熱使SO逸出，則恢復品紅原2來的顏色而失去對DNA的染色效果，故配好的Schiff試劑應避免SO逸出。 2 Fe

3、ulgen反應原理 實驗儀器、材料及試劑 （一） 儀器、用具 顯微鏡、恒溫水浴箱、溫度計、解剖針、酒精燈、試管、燒杯、載玻片、蓋玻片、吸水紙。 （二 ）材料 （見圖21）（見圖22）或根尖 洋蔥鱗莖 （三）試劑 11MHCl的配制 取82.5ml比重1.19的濃HCl加蒸餾水至1000ml 。 2Schiff試劑的配制及保存 稱取0.5g堿性品紅加入到100ml煮沸的蒸餾水中（用三角燒瓶），時時振蕩，繼續(xù)煮 5分鐘（勿使之沸騰），使之充分溶解。然后冷卻至50時用濾紙過濾，濾液中加入10ml 1MHCl，冷卻至25時，加入0.5g Na2S2O5（偏重亞硫酸鈉或鉀），充分振蕩后，塞緊瓶塞，在室溫

4、暗處靜置至少24小時（有時需23天），使其顏色退至淡黃色，然后加入0.5g活性炭，用力振蕩1分鐘，最后用粗濾紙過濾于棕色瓶中，封嚴瓶塞，外包黑紙。濾液應為無色也無沉淀，貯于4冰箱中備用。如有白色沉淀，就不能再使用，如顏色變紅，可加入少許偏重亞硫酸鈉或鉀，使之再轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色時，仍可再用。 3亞硫酸水 取200ml自來水，加10ml 10%偏重亞硫酸鈉（或偏重亞硫酸鉀）水溶液和10ml 1M HCl，三者于使用前混勻。 實驗步驟 1將洋蔥根尖或鱗莖內(nèi)表皮放在1M HCl中，加熱到60水解810 min。 2蒸餾水水洗。 3Schiff試劑遮光染色30min。 4用新鮮配制的亞硫酸水溶液洗3次，每次1

5、min。 5水洗5min。 6將根尖放在載玻片上，鑷子搗碎，蓋上蓋玻片，壓片（洋蔥表皮可省去壓片這一步）。 7顯微鏡檢查。 （見圖23） 。的部位應呈現(xiàn)紫紅色的陽性反應DNA結(jié)果：細胞中凡有 對照片： 7抽提掉，然后按步驟1水浴15min，主要把DNA方法一先將材料放在 5%三氯醋酸中90 制片觀察。制片觀察。741N HCl水解，直接放在Schiff試劑中染色，然后按步驟 方法二材料不經(jīng)）42（見圖 結(jié)果 注意事項1. 對照切片的制做 進行Feulgen反應時, 一般要做一對照切片以便驗證反應結(jié)果。對照切片應不經(jīng)水解直接放在schiff劑內(nèi)，且應為負反應。但需要注意的是，對照切片在schif

6、f試劑中最多不要超過1 h (0.5 h即可)，時間過長，試劑本身的酸性也會使DNA水解，從而出現(xiàn)假的正反應。 2. 固定劑的選擇 以前很多人認為，選用的固定劑不應含有醛基或含有氧化劑。后來發(fā)現(xiàn)含醛基或氧化劑的固定劑對反應的專一性并沒有影響。實踐證明，一切好的組織學固定劑均適用于Feulgen反應。如Bhampy固定劑、Helly固定劑、Flemming固定劑、OsO4固定劑、Carnoy固定劑、zenker固定劑和Bouin-Aller固定劑。 但在上述固定劑中，以OsO4和Carnoy效果較好，OsO4(1%或0.5%)是Feulgen反應的理想固定劑，只是因OsO4價錢較貴，故一般多采用

7、Carnoy固定液。在Feulgen反應中，不能單獨使用Bouin定液，因為它是Feulgen反應的最壞固定劑，但經(jīng)Aller改進后的Bouin-Aller固定液效果卻較好。 3. 水解時間 Feulgen反應通常用稀酸進行水解，但水解的時間一定要適當。如水解時間不夠, 反應就會變?nèi)?；如水解時間過長?；蛩獾剡^于劇烈，則脫氧核糖也易掉下來，反應也會減弱。適當?shù)乃鈺r間一般為812min。但是水解時間長短也要視標本的類型(如厚薄等)、固定劑的性質(zhì)以及酸的濃度而定。 4. Schiff試劑的作用 Feulgen反應成功與否的一個非常關(guān)鍵的因素，就是schiff試劑的質(zhì)量。有一大類試劑均稱為堿性品紅

8、，它們實際上是由幾種產(chǎn)品分別組成的。因此只能選用注明“DNA染色反應用”的堿性品紅才行。此外，Schiff試劑的配制方法也可影響DNA的染色反應。 實驗現(xiàn)象 現(xiàn)象分析 實驗拓展 液的配制Sohiff 將lg堿性品紅溶于200ml煮沸的蒸餾水中，使其完全溶解，然后冷卻到60過濾。加入30ml 1N HCl和3g焦亞硫酸鉀(K：S：()；)或亞硫酸鈉，塞緊瓶塞，置于暗處或外包黑紙24小時。1N HCl與焦亞硫酸鹽生成的SO：將溶液中堿性品紅脫色成為無色堿性品紅(即白亞磺酸)。如溶液尚有淺黃色，可用05g活性炭脫色，搖動幾分鐘后迅速用粗濾紙過濾濾液應為清亮五色。制成的Schiff試劑應置于棕色瓶中，

9、瓶塞需擰緊并用黑紙包裹，避光保存于4，保質(zhì)期可達半年。若暴露于空氣，或加熱則使Schiff試劑中的S0逸出，變性的2Schiff試劑則不能使用。除堿性品紅外。其他堿性染料也可制成能與醛基反應的類似Schie 反應液，但是。不能達到五色。在染色時可用l鹽酸乙醇洗去不起反應的余色。Schiff試劑在不同的pH條件下可顯示不同的物質(zhì)，如Sehiff試劑在pH 3043時，對Feulgen反應效果好，而pH 24時，對PAS(糖原)反應效果好。 注意：Schiff試劑雖無色，但氧化后為紫紅色。同時要防止污染環(huán)境，用后要回收。 生色基團-正文 也稱發(fā)色團。為有機化合物中能發(fā)生顏色的某種原子基團（見基），

10、其特征吸收（見表）較少受化合物中其他原子或基團的影響。它們常是一些硝基-NO、亞硝基-NO、偶氮基-N2N-、羰基、乙烯基-CHCH-等含鍵（見化學鍵）的不飽和基團。最早，“色”只指可見的顏色，現(xiàn)已擴大至近紫外區(qū)。 生色基團 生色基團常用于鑒定化合物的特性。例如，含有未共軛羰基的醛和酮在280290納米處呈現(xiàn)一個摩爾吸光系數(shù)較低的特征吸收。當溶液中不出現(xiàn)這個吸收峰時，則認為不太可能存在羰基。 辦公室衛(wèi)生管理制度 一、主要內(nèi)容與適用范圍 1本制度規(guī)定了辦公室衛(wèi)生管理的工作內(nèi)容和要求及檢查與考核。 2此管理制度適用于本公司所有辦公室衛(wèi)生的管理 二、定義 1公共區(qū)域：包括辦公室走道、會議室、衛(wèi)生間，

11、每天由行政文員進行清掃； 2個人區(qū)域：包括個人辦公桌及辦公區(qū)域由各部門工作人員每天自行清掃。 1. 公共區(qū)域環(huán)境衛(wèi)生應做到以下幾點： 1） 保持公共區(qū)域及個人區(qū)域地面干凈清潔、無污物、污水、浮土，無死角。 保持門窗干凈、無塵土、玻璃清潔、透明。 2） 保持掛件、畫框及其他裝飾品表面干凈整潔。 保持墻壁清潔，表面無灰塵、污跡。43） ） 保持衛(wèi)生間、洗手池內(nèi)無污垢，經(jīng)常保持清潔，毛巾放在固定（或隱蔽）的地方。）5 保持衛(wèi)生工具用后及時清潔整理，保持清潔、擺放整齊。7）6） 垃圾簍擺放緊靠衛(wèi)生間并及時清理，無溢滿現(xiàn)象。 2. 辦公用品的衛(wèi)生管理應做到以下幾點： 1） 辦公桌面：辦公桌面只能擺放必需

12、物品，其它物品應放在個人抽屜，暫不需要的物品就擺回柜子里，不用的物品要及時清理掉。 辦公文件、票據(jù)：辦公文件、票據(jù)等應分類放進文件夾、文件盒中，并整齊的擺放至辦公桌左上角上。3） ）2 辦公小用品如筆、尺、橡皮檫、訂書機、啟丁器等，應放在辦公報刊：報刊應擺放到報刊架上，要定時清理過期報刊。 桌一側(cè)，要從哪取使用完后放到原位。4）電腦：電腦鍵盤要保持干凈，下班或是離開公司前電腦要關(guān)機。5） 6） 飲食水機、燈具、打印機、傳真機、文具柜等擺放要整齊，保持表面無污垢，無灰塵，蜘蛛網(wǎng)等，辦公室內(nèi)電器線走向要美觀，規(guī)范，并用護釘固定不可亂搭接臨時線。7） 新進設備的包裝和報廢設備以及不用的雜物應按規(guī)定的程序及時予以清除。3. 個人衛(wèi)生應注意以下幾點： 1） 不隨地吐痰，不隨地亂扔垃圾。 下班后要整理辦公桌上的用品，放罷整齊。 2） 禁止在辦公區(qū)域抽煙。4）3 下班后先檢查各自辦公區(qū)域的門窗是否鎖好