血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn)

1、血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝(HA)與血凝抑制(HI)試驗(yàn),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 三、實(shí)驗(yàn)原理 四、實(shí)驗(yàn)材料 五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定 六、注意事項(xiàng) 七、新城疫背景介紹,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的基本原理、操 作方法和結(jié)果判定方法 2、了解新城疫有關(guān)背景知識(shí),血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,1、血凝試驗(yàn)(HA)檢測(cè)新城疫抗原 2、血凝抑制試驗(yàn)(HI)檢測(cè)新城疫抗體,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),三、實(shí)驗(yàn)原理,1、血凝試驗(yàn)（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能選擇性地使某種動(dòng)物地紅細(xì)胞發(fā)生凝集，這種凝集紅細(xì)胞的現(xiàn)象稱為血凝（HA）,也稱直接血凝反應(yīng)。,病毒顆粒,紅細(xì)胞

2、,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),2、血凝抑制試驗(yàn)（HI）原理：當(dāng)病毒的懸液中加入特異性抗體，且這種抗體的量足以抑制病毒顆?；蚱溲貢r(shí)，則紅細(xì)胞表面的受體就不能與病毒顆?；蜓刂苯咏佑|。這時(shí)紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制，稱為紅細(xì)胞凝集抑制（HI）反應(yīng)，也稱血凝抑制反應(yīng)。,I am late！,抗體,抗原,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),四、實(shí)驗(yàn)材料,1、血凝板（2人/塊） 2、新城疫陽(yáng)性血清 3、被檢血清（1份） 4、1紅細(xì)胞懸液 5、稀釋液 6、移液器（50ul, 2人/把） 7、槍頭,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),五、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果判定,血凝試驗(yàn)（HA) 1、在血凝板上第一排的112孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水 2、在第1孔

3、內(nèi)加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul 3、每孔加入1雞紅細(xì)胞懸液50ul 4、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37中靜置30分鐘 5、結(jié)果判定,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝效價(jià)測(cè)定,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),1、：紅細(xì)胞呈細(xì)沙樣均勻鋪于孔底，即100凝集； 2、：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75凝集； 3、 ：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有凝集塊，即50凝集； 4、 ：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25凝集； 5、 ：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集；,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝價(jià)的判定,以出現(xiàn)

4、（50凝集）的抗原最高稀釋倍數(shù)為該抗原的血凝價(jià)（1:128）。 50ul 1:256稀釋的病毒抗原為該抗原的一個(gè)血凝單位。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝抑制試驗(yàn),1、將病毒抗原稀釋成4個(gè)血凝單位（1/1284=1:32） 2、在血凝板上112孔內(nèi)各加入50ul生理鹽水； 3、在第1孔內(nèi)加入被檢血清50ul，然后倍比稀釋至第11孔，最后棄50ul； 4、第112孔內(nèi)加入4單位抗原50ul（第12孔為病毒對(duì)照）； 5、每孔加入1雞紅細(xì)胞懸液50ul； 6、輕輕振蕩均勻，后放于室溫或37中靜置30分鐘 6、結(jié)果判定,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝抑制效價(jià)測(cè)定,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),1、：紅細(xì)胞呈細(xì)

5、沙樣均勻鋪于孔底，即100凝集； 2、：紅細(xì)胞均勻鋪于孔底，當(dāng)邊緣不整齊而稍向孔底集中，即75凝集； 3、 ：紅細(xì)胞形成一個(gè)環(huán)狀，四周有下凝集塊，即50凝集； 4、 ：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣不夠光滑，四周稍有凝集塊，即25凝集； 5、：紅細(xì)胞于孔底形成圓團(tuán)，邊緣光滑整齊，即無(wú)凝集。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝抑制價(jià)的判定,以出現(xiàn)完全抑制凝集(即不凝集) 的血清最高稀釋倍數(shù)為該血清的血凝抑制價(jià)（1:4）。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),六、注意事項(xiàng),1、紅細(xì)胞用前請(qǐng)搖勻 2、用槍加樣定要準(zhǔn)，盡量不要有氣泡 3、結(jié)果判定有耐心 4、HA和HI勿相混,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),七、新城疫背景介紹,血凝與血凝抑制實(shí)

6、驗(yàn),雞新城疫（Newcastle Disease ND ）,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),1、概 述,ND是由ND病毒（Newcastle disease Virus, NDV）引起的高度接觸性和高度毀滅性的急性敗血性傳染病。 1926年首先發(fā)生于印尼，同年發(fā)現(xiàn)于英國(guó)新城 我國(guó)1928年有該病記載 是當(dāng)今全球范圍內(nèi)最嚴(yán)重的家禽傳染病之一 被國(guó)際獸疫局（OIE) 列為A類傳染病,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),別名： 新城疫、亞洲雞溫、偽雞瘟 雞瘟 ： 禽流感、歐洲雞溫、真性雞溫,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),新城疫病毒，屬副粘病毒科，副粘病毒屬。 病毒顆粒表面具有血凝素蛋白，可以刺激機(jī)體產(chǎn)生血凝抑制抗體，,2、病原體,血凝與

7、血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),根據(jù)臨診表現(xiàn)和病程長(zhǎng)短分為： （1）最急性型： 突然發(fā)病，病變不明顯，見(jiàn)于雛雞及本病流行初期。 急性型：（典型新城疫） 亞急性型（非典型ND) 慢性型（非典型ND）,3、病狀及病理變化,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),（2）、急性型：侵害消化系統(tǒng)為主，也稱嗜內(nèi)臟速發(fā)型。 病狀特點(diǎn)： a. 食欲減退，飲水增加，離群呆立，眼睛半開(kāi)半閉，翅膀下垂，冠、肉髯呈紫黑色。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),b. 嗉囊積液 、體溫升高、呼吸困難。鼻腔內(nèi)有大量分泌物，嚴(yán)重拉稀 糞便呈黃綠色或褐色，有時(shí)混有血。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),c.死亡率高, 非免疫雞感染后可以80-100%死亡。 d.部分患雞出現(xiàn)

8、神經(jīng)癥狀，頭頸歪向一側(cè)而咀向上，母雞產(chǎn)蛋下降。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),病變特點(diǎn)： 全身的粘膜和漿膜出血，突出病變?cè)谙馈?A.腺胃粘膜水腫，粘膜上的乳頭及其周圍有出血點(diǎn)，間有潰瘍。 B.腺胃與肌胃、腺胃與食道交界處粘膜可見(jiàn)到出血點(diǎn)或出血帶。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),C.小腸、直腸、泄殖腔粘膜充血、出血或有壞死， D.盲腸扁桃體出血。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),皮下脂肪出血,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),腦膜充血出血 卵黃性腹膜炎,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),有的病雞表現(xiàn)眼結(jié)膜炎,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),（3）、亞急性型（非典型ND，以侵害呼吸道為主）也稱肺腦炎型： 其主要的特點(diǎn)：是癥狀

9、及病變不典型。 癥狀：多見(jiàn)4-35日齡雞，25日齡前后最常發(fā)病。 呼吸困難，精神沉郁， 繼而較早地出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，此時(shí)出現(xiàn)歪頭，扭頸，角弓反張，倒地不能起立。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),病變：喉頭及氣管粘膜水腫，出血、充血、并有大量粘液， 肺呈紫黑色（肺出血性炎癥）。 硬腦膜下樹枝狀充血，并有出血點(diǎn)。 心冠、脂肪有出血點(diǎn)。 發(fā)病率高，死亡率較低。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),（4）、慢性型（非典型ND） 母雞： 輕者只表現(xiàn)產(chǎn)蛋率下降（約10-30%），產(chǎn)軟殼蛋。 重者出現(xiàn)精神沉郁，呼吸困難，黃綠色稀糞，喉頭、氣管粘膜充血、出血，個(gè)別病例出現(xiàn)消化道病變。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),5、診 斷,1、血凝抑制試驗(yàn)（HI）：監(jiān)測(cè)雞群中的HI抗體，評(píng)價(jià)疫苗的免疫效果及雞體內(nèi)的抗體水平。 2、分離病毒： 鑒別弱毒及野毒。 （1）分離病毒：強(qiáng)毒：24-72小時(shí)雞胚死亡，弱毒一般不死。,血凝與血凝抑制實(shí)驗(yàn),6、免疫,滅活疫苗（激發(fā)體液免疫） 活疫苗（激發(fā)體液免疫、細(xì)胞免疫和局部粘膜免疫） I系苗、II系苗、III系苗、IV系苗和V4弱毒苗 HI抗體檢測(cè)： 種雞