《疫學(xué)診斷試驗(yàn)》PPT課件.ppt

1、臨床常用免疫學(xué)檢驗(yàn),第一節(jié) 概述 臨床應(yīng)用 1.為臨床確定診斷提供依據(jù) 2.具有很高的臨床診斷參考價(jià)值 3.判斷機(jī)體免疫功能高低和免疫耐受力,一、 細(xì)胞免疫及相關(guān)分子檢查 1.免疫細(xì)胞 T細(xì)胞 T細(xì)胞亞群及其功能 B細(xì)胞 表面標(biāo)志；表面受體；亞群 NK細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 其他細(xì)胞,2.CD分子 3.細(xì)胞因子 白細(xì)胞介素 干擾素 TNF CSF G-CSF；GM-CSF；M-CSF；EPO 生長(zhǎng)因子,二、免疫活性物質(zhì)與體液免疫 免疫球蛋白檢測(cè) IgG;IgA;IgM;IgE;S-IgE M蛋白檢測(cè) 冷球蛋白檢測(cè) 尿本周蛋白檢測(cè) 三、補(bǔ)體和免疫復(fù)合物 CH50 C3；C4 CIC,四、自身免疫病的免疫

2、學(xué)檢測(cè) 1.ANA 2.抗雙鏈DNA抗體 抗ENA抗體 抗線粒體抗體 抗平滑肌抗體 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體 RF CRP,五、腫瘤免疫檢查 六、移植免疫學(xué)檢查 七、感染免疫學(xué)檢查 1.病毒性肝炎 2.AIDS 3.性傳播疾?。⊿TD） 4.其他,免疫功能檢驗(yàn)(Immunologic Function Test) 免疫功能檢驗(yàn)分為細(xì)胞免疫功能檢驗(yàn)和體液免疫功能檢驗(yàn)，對(duì)于了解患者的免疫狀態(tài)，以及細(xì)胞的各種功能，為深入研究和認(rèn)識(shí)機(jī)體免疫系統(tǒng)的生理、病理改變，闡明某些疾病的發(fā)病機(jī)制和臨床診斷與治療將提供有利的信息。下面簡(jiǎn)單介紹臨床常用的一些免疫檢驗(yàn)項(xiàng)目,一. IgG、IgA、IgM測(cè)定 免疫球蛋白（Im

3、munoglobulin ，Ig) 是一組具有抗體活性的蛋白。存在于機(jī)體的血液、體液、外分泌液及某些細(xì)胞的膜上，分為 IgG、IgA、IgM、IgD、和IgE 五類。其中 IgG、IgA、IgM 含量較多，一般應(yīng)用單向免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法和速率散射比濁法測(cè)定,參考值 依年齡、性別、地區(qū)等因素有差異。 IgG： 6.9416.18g/ L IgA： 0.683.78 g/ L IgM： 0.602.63g/L臨床意義 1. Ig 含量減低：一種或多種Ig 水平減少，分原發(fā)性和繼發(fā)性。見于各種先天性或獲得性免疫缺陷病。繼發(fā)性常與免疫抑制劑應(yīng)用、射線、蛋白質(zhì)丟失、營(yíng)養(yǎng)不良等有關(guān)。也可見于細(xì)胞毒藥物

4、治療后,2. Ig含量增高：(1) 多克隆性增高，見于各種慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病，如 SLE、RA、SS等；也見于寄生蟲疾病、結(jié)節(jié)病等。(2) 單克隆性增高，又稱 “M”蛋白，主要見于免疫增殖性疾病，如多發(fā)性骨髓瘤、重鏈病、輕鏈病，巨球蛋白血癥等,注意事項(xiàng) Ig水平與年齡、性別有一定的關(guān)系，Ig 含量因檢測(cè)方法不同而有差別，各地區(qū)參考值也不相同，在判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)綜合考慮。如有“M 蛋白”，可進(jìn)一步作 血清或尿液免疫電泳，檢測(cè)輕鏈和重鏈,二. 血清總IgE測(cè)定 IgE 為 血清中含量極少的一種免疫球蛋白，與過敏性疾病和寄生蟲感染有關(guān)。目前檢測(cè)方法有多種， 包括 ELISA、間接血凝試驗(yàn)

5、（indirect hemoagglutination assay IHA ）、 RIA、電化學(xué)發(fā)光法（electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA，）、IFA 等。參考值 0.1-150IU/ml,臨床意義 1. IgE增高：見于IgE型多發(fā)性骨髓瘤、特應(yīng)性哮喘、特應(yīng)性皮炎、過敏性鼻炎、寄生蟲感染、熱帶嗜酸細(xì)胞增多癥、SLE、RA及某些霉菌病等。 2. IgE減低：一般無意義?？梢娪谠l(fā)性無丙種球蛋白血癥、惡性腫瘤及細(xì)胞毒藥物治療后,注意事項(xiàng) 年齡、性別均可影響總IgE水平。一般男性高于女性；新生兒水平低，青春期水平最高，30歲以后逐漸下降。不同種族血

6、清總IgE水平也有差別，混血人種比白人高34倍，黑人水平更高，黃種人水平也較高?？侷gE水平高不一定是過敏；過敏者總IgE也不一定高。因此，在評(píng)價(jià)總IgE結(jié)果時(shí)要考慮到以上因素,三. 特異性IgE抗體（sIgE)的檢測(cè) 過敏患者的血清中存在著具有變應(yīng)原特異性的IgE 稱之為特異性IgE,如對(duì)牛奶過敏者則有針對(duì)牛奶變應(yīng)原的IgE；對(duì)蒿草花粉過敏者，則有針對(duì)該花粉的IgE，該抗體只能與該變應(yīng)原特異性結(jié)合,四. 血清補(bǔ)體測(cè)定 補(bǔ)體（Complement )是血清中的一組具有酶活性的蛋白。它由20多種蛋白組成。當(dāng)機(jī)體受到病原微生物侵襲時(shí)，在抗體的存在下，補(bǔ)體參與滅活 virus 或殺死 bacteri

7、a 的免疫反應(yīng)。在自身免疫病中，complement也能參與破壞自身組織或細(xì)胞而造成免疫病理損傷。測(cè)定血清中補(bǔ)體活性或其單一補(bǔ)體成分含量，對(duì)于許多疾病的診斷和鑒別診斷、療效觀察以及發(fā)病機(jī)理的研究都有一定的臨床意義,一) 總補(bǔ)體活性測(cè)定（50% hemolytic unit of complement， CH50) Complement 可使溶血素 (抗體) 致敏的SRBC裂解而發(fā)生溶血，補(bǔ)體活性與溶血程度呈正相關(guān)。根據(jù)產(chǎn)生50%溶血所需要的最小補(bǔ)體量，可計(jì)算出血清總補(bǔ)體的活性,參考值 75160 U/ml臨床意義.增高：常見于各種急性炎癥、組織損傷、心肌梗死和某些惡性腫瘤等。.降低：見于各種免

8、疫復(fù)合物性疾病，如SLE、急、慢性腎小球腎炎、自身免疫性溶血性貧血。也可見于病毒性肝炎、DIC、蛋白丟失性腸病、嚴(yán)重灼傷、急性粒細(xì)胞性白血病等,注意事項(xiàng) 待測(cè)血清需新鮮、無溶血。測(cè)定方法有試管法、微量板法，近來又有生化儀器法等。不同方法具有不同的參考值,二) 補(bǔ)體C3測(cè)定（Complement 3 ，C3) C3為補(bǔ)體系統(tǒng)各組分中含量最高的組分，是激活補(bǔ)體傳統(tǒng)途徑與旁路途徑的關(guān)鍵成分。檢測(cè)方法主要有RID、免疫比濁、速率散射比濁等。參考值 0.8-1.55g/L,臨床意義 1. C3增高：見于某些急性炎癥或傳染病早期以及某些惡性腫瘤等。 2. C3降低：見于SLE、RA、急性腎小球腎炎、肝臟疾

9、病、冷球蛋白血癥等。狼瘡腎炎時(shí) 血清 中C3含量降低，當(dāng)病情好轉(zhuǎn)時(shí)，含量恢復(fù)正常,三), 補(bǔ)體C4測(cè)定（Complement 4 ，C4) C4是一種多功能的1-球蛋白，也是補(bǔ)體系統(tǒng)中的主要成分。在補(bǔ)體傳統(tǒng)活化途徑中發(fā)揮重要作用。裂解后的產(chǎn)物在補(bǔ)體的活化、促進(jìn)吞噬、防止免疫復(fù)合物沉著和中和毒素等方面發(fā)揮很大作用。檢測(cè)方法同C3測(cè)定,參考值 0.160.47g/L臨床意義 1. 升高：見于風(fēng)濕熱的急性期、結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎、皮肌炎、心肌梗死、Reiter綜合征和各種類型的關(guān)節(jié)炎。 2. 降低：見于自身免疫病，例如：SLE、RA、慢性活動(dòng)性肝炎、多發(fā)性硬化癥、IgA型腎病等。在SLE，C4含量下降明

10、顯，并較C3下降為早,五.循環(huán)免疫復(fù)合物（Circulating immunocomplex ， CIC,) CIC是體內(nèi)游離抗原與抗體相結(jié)合的產(chǎn)物。復(fù)合物可分大、中、小三類。大的復(fù)合物(19s) 可被吞噬細(xì)胞吞噬去除；中等復(fù)合物(約等于19s )存在于局部病變部位，如腎基膜、皮膚基底膜、血管內(nèi)膜和關(guān)節(jié)滑膜等；只有小的復(fù)合物(19s)游離于血液、體液中，為一種可溶的CIC。CIC測(cè)定對(duì)免疫復(fù)合物病、自身免疫病以及肝病的診斷、療效觀察、預(yù)后判斷均有重要意義,檢測(cè)方法有多種，如聚乙二醇沉淀法、C1q結(jié)合法等。 PEG可引起蛋白沉淀，蛋白分子愈大沉淀所需 PEG 濃度愈小。CIC分子量較大，且抗原-

11、抗體結(jié)合后發(fā)生構(gòu)型改變，而被低濃度PEG從液相中析出，PEG還抑制CIC解離，促使CIC聚合成更大的凝聚物而被沉淀，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)450nm處測(cè)定吸光度。計(jì)算出濁度值，可知CIC的存在和含量,參考值 PEG沉淀法： 10U/ml臨床意義 1. CIC陽性常見于自身免疫病如SLE、RA等，也可見于血清病、慢性活動(dòng)性肝炎、細(xì)菌感染、傳染病、惡性腫瘤等。 2. 動(dòng)態(tài)檢測(cè)CIC的變化，可監(jiān)測(cè)疾病的發(fā)展、判斷療效及預(yù)后,注意事項(xiàng) 參考值依方法不同而有差別，此法快速簡(jiǎn)便，但特異性較差，只適于篩查。低密度脂蛋白可引起濁度增加，故應(yīng)空腹取血。高球蛋白血癥及標(biāo)本反復(fù)凍融易造成假陽性,六. T淋巴細(xì)胞亞群（T

12、 cell subpopulation )測(cè)定 T cell 因功能不同可將其分為若干亞群，如T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞；T抑制/細(xì)胞毒性細(xì)胞等。也可根據(jù)T細(xì)胞表面分化抗原(CD)不同劃分為相應(yīng)的亞群，如CD3；CD4；CD8等。同一CD表型的細(xì)胞功能可能不同。如CD8細(xì)胞中既有T抑制細(xì)胞，也有細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。T細(xì)胞各亞群的相互協(xié)調(diào)，穩(wěn)定地調(diào)節(jié)著機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng),應(yīng)用抗CD抗原的單克隆抗體，如抗CD3、抗CD4、抗CD8等，對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，依據(jù)各單抗的陽性率，判定各T cell 亞群，并算出CD4/CD8的比值。測(cè)定方法有 IFA、IEA、APAAP法、流式細(xì)胞儀法等,參考值（IFA法

13、）總T細(xì)胞（CD3+）53-88%；CD4+細(xì)胞32-60%；CD8+細(xì)胞20-40%。CD4+/CD8+1.5-2.0。 （流式細(xì)胞儀法）總T細(xì)胞（CD3+）955-2860/l；CD4+細(xì)胞27-51%，550-1440l；CD8+細(xì)胞15-44%，320-1250l。CD4+/CD8+0.64-2.85,臨床意義 T cell 亞群在許多臨床疾病中可發(fā)生異常改變，特別是免疫功能受損病人。測(cè)定 T cell 亞群變化對(duì)了解疾病的發(fā)病機(jī)制、指導(dǎo)臨床治療、控制疾病的發(fā)生發(fā)展均有重要意義。 1. 在自身免疫病中，如SLE、RA、自身免疫性溶血性貧血，以及乙型肝炎病人常表現(xiàn)為CD8細(xì)胞的數(shù)量及功能

14、低下，有時(shí)也有CD4細(xì)胞增高，CD4+/CD8+比值升高,2. 免疫缺陷病患者CD4+/CD8+比值減少，如AIDS病人，CD4+顯著減少，常出現(xiàn)CD4+/CD8+比值倒置。常作為HIV感染者的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。 3. 感染性疾病患者免疫抑制功能增強(qiáng)，表現(xiàn)為CD8+細(xì)胞的數(shù)量及功能都異常增高。病毒感染時(shí)，CD3+、CD4+細(xì)胞減少，CD8+細(xì)胞增多，CD4+/CD8+比值降低,4. 腫瘤病人CD3+，CD4+細(xì)胞明顯減少，CD8+明顯增加，CD4+/CD8+比值明顯下降。據(jù)此，可了解機(jī)體的免疫狀態(tài)，指導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)劑及治療藥物的應(yīng)用。 5. 支氣管哮喘病人，在過敏原激發(fā)后，外周血CD4+ T 細(xì)胞迅速降低

15、，支氣管肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+ T 細(xì)胞則增高。過敏性鼻炎患者CD3+、CD4+、CD8+ T 細(xì)胞均比正常人低。 6. 血液系統(tǒng)疾病 T cell 亞群也有相應(yīng)變化，如再生障礙性貧血、粒細(xì)胞減少癥時(shí)CD4+細(xì)胞減少，CD8+細(xì)胞增多，CD3+/CD8+ 比值下降,注意事項(xiàng) T cell 亞群檢測(cè)方法很多，參考值也不盡相同，在判斷結(jié)果時(shí)要全面考慮，結(jié)合臨床及其他檢查。此外，利用上法也可測(cè)定B細(xì)胞、NK細(xì)胞等。流式細(xì)胞儀法，B細(xì)胞絕對(duì)值為 90-560/l，百分?jǐn)?shù)為 5-18%，NK細(xì)胞絕對(duì)數(shù)為 150-1100/l，百分?jǐn)?shù)為 7-40%。華人較其他種族有較高的NK細(xì)胞值,第四

16、節(jié) 自身免疫病和風(fēng)濕病的免疫學(xué)檢驗(yàn),自身免疫病（AID)是指由于過度而持久的自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致組織器官損傷并引起相應(yīng)器官病變或臨床癥狀的一類疾病。風(fēng)濕病是一類涉及到關(guān)節(jié)、軟骨、肌肉等結(jié)締組織的慢性疾病。實(shí)驗(yàn)室檢查特別是免疫學(xué)檢查對(duì)AID和風(fēng)濕病的診斷是及其重要的。有些檢查可作為診斷指標(biāo)之一；有些檢查可作為病情進(jìn)展和預(yù)后判斷的監(jiān)測(cè)指標(biāo)；有些檢查可作為藥物療效的考核指標(biāo)之一,隨著免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及分子生物學(xué)的應(yīng)用，各種自身抗體的檢查越來越多地應(yīng)用于臨床。作為臨床醫(yī)生，應(yīng)該熟悉這些檢驗(yàn)的意義，并能結(jié)合臨床及其他檢查，客觀地運(yùn)用這些指標(biāo)，協(xié)助診斷，了解病情，指導(dǎo)治療。這里僅介紹臨床常用的一些自身抗體的

17、檢測(cè),1.抗核抗體（Antinuclear antibody ,ANA)測(cè)定 ANA是抗細(xì)胞核多種成分的自身抗體，無種屬及器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體及其他細(xì)胞成分抗體。這些 抗體共同組成ANA譜。常用檢測(cè)方法為IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點(diǎn)法、膠體金標(biāo)斑點(diǎn)免疫滲濾法等。其中IFA是應(yīng)用較廣的一種方法。一般采用鼠肝切片或Hep-2細(xì)胞為底物抗原片，當(dāng)加入病人血清時(shí)，病人血清中的ANA可與細(xì)胞中相應(yīng)抗原成分結(jié)合。再加入熒光標(biāo)記抗人IgG，在熒光顯微鏡下可見細(xì)胞核內(nèi)亮綠色熒光,參考值 1:10或陰性臨床意義 ANA陽性見于多種疾病

18、，常用于風(fēng)濕病及自身免疫病的診斷。SLE患者陽性率在95以上，且效價(jià)常在1：80以上。在其他風(fēng)濕病如RA、系統(tǒng)性硬化癥、皮肌炎、干燥綜合征 (SS)、混合結(jié)締組織病(MCTD)等也可陽性。其他如肝病，病毒感染等也可呈低效價(jià)陽性,ANA陽性，在熒光顯微鏡下一般分為4個(gè)型別：(1) 均質(zhì)型，是針對(duì)DNA與組蛋白復(fù)合物的 抗體，常見于SLE；(2)周邊型或膜型，主要是針對(duì)雙鏈DNA的抗體，一般只見于SLE活動(dòng)期；(3)斑點(diǎn)型，是針對(duì)可提取性核抗原（ENA）的抗體，見于SLE、MCTD等許多風(fēng)濕性疾病；(4)核仁型，主要是針對(duì) RNA 的抗體，主要見于系統(tǒng)性硬化癥。注意事項(xiàng) 正常人中特別是老年人中可有

19、低效價(jià)的ANA，此外，口服避孕藥的婦女也可檢測(cè)到ANA,一）抗Sm抗體 Sm是病人Smith的縮寫。Sm抗原屬于SnRNP，由5個(gè)RNA和多肽組成，抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗體是酸性糖蛋白，是SLE的標(biāo)記抗體,二) 抗nRNP(u1RNP)抗體 u1RNP是u1RNA和蛋白質(zhì)組成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是MLTD的重要 血清 標(biāo)志,三）抗SSA抗體 SS為干燥綜合征的縮寫。此抗體又稱抗RO抗體。SSA抗原是RNA和蛋白質(zhì)復(fù)合物，抗原表位在52KD多肽上，主要見于原發(fā)性干燥綜合征患者及SLE,四）抗SSB抗體 SSB抗體常伴隨SSA抗

20、體同時(shí)出現(xiàn)，又稱抗La抗體，SSB抗原屬于SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白質(zhì)的復(fù)合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。與SSA抗體并存對(duì)診斷SS有特異性,五）抗Scl-70抗體 Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上，是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的降解產(chǎn)物，抗Scl-70抗體幾乎僅見于硬皮病，陽性率30%左右,六）抗Jo-1抗體 Jo-1抗體是組氨酰tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗體是多發(fā)性肌炎和皮肌炎的標(biāo)記抗體，陽性率25-40,七）抗核糖體抗體 核糖體在核仁合成，然后轉(zhuǎn)入胞漿，抗原表位在大亞基上的38KD、16KD和15KD多肽上?？购颂求w抗體陽性

21、主要見于SLE，陽性率20-30,檢測(cè)以上抗體的方法主要有：對(duì)流免疫電泳法(CIE)、雙相免疫擴(kuò)散法，免疫印跡試驗(yàn)(IBT)，免疫斑點(diǎn)技術(shù)和ELISA法等。一般采用兔胸腺或牛胸腺提取物或細(xì)胞提取物作為抗原。近年來，應(yīng)用分子重組抗原制備的試劑盒已投入市場(chǎng),參考值陰性臨床意義 1. 抗n RNP抗體：見于3540的SLE病人，在MCTD病人中陽性率可達(dá)95100，也可見于其他風(fēng)濕性疾病。 2. 抗Sm抗體：主要見于SLE及重疊綜合征，急性期病人75為陽性。一般SLE患者3040陽性率。但Sm抗體陽性者90以上為SLE，故稱之為SLE的標(biāo)記抗體,3. 抗SSA和抗SSB抗體：見于4045的SS病人。

22、抗SSA抗體也可見于25的SLE病人及其他風(fēng)濕性疾??；抗SSA抗體與新生兒狼瘡和先天性傳導(dǎo)阻滯有關(guān)?？筍SA抗體也可見于病毒感染等非風(fēng)濕性疾病?？筍SB抗體對(duì)原發(fā)性干燥綜合征較特異，但陽性率僅27左右,4. 抗Scl-70抗體：一般僅見于系統(tǒng)性硬化癥病人，陽性率2060。 5.抗Jol-1抗體見于30的多發(fā)性肌炎病人及10的皮肌炎病人?？笿ol-1抗體與多發(fā)性肌炎病人間質(zhì)性肺炎的發(fā)生率增加有關(guān)。 6.抗rRNP 抗體：主要見于SLE患者，陽性率20%左右，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變有關(guān)，多在疾病活動(dòng)期出現(xiàn),注意事項(xiàng) 判斷試驗(yàn)結(jié)果時(shí)要結(jié)合臨床表現(xiàn)作出評(píng)價(jià)，也應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)方法來作出解釋。對(duì)流免疫電泳法和雙相

23、擴(kuò)散法敏感性低，但特異性較高；免疫印跡法、斑點(diǎn)免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特異性相對(duì)減少,三.抗雙鏈DNA抗體（Antidouble-stranded DNA ， A-dsDNA，) A-dsDNA 對(duì)SLE有高度特異性，是針對(duì)細(xì)胞核脫氧核糖核酸的自身抗體。臨床上常用的檢測(cè)方法有：Farrs法：125IDNA與待檢標(biāo)本中的A-dsDNA形成免疫復(fù)合物，加飽和硫酸銨使復(fù)合物沉淀，以計(jì)數(shù)器分別測(cè)定上清中游離及沉淀物中已結(jié)合的125IDNA含量，可計(jì)算出 血清 中AdsDNA的結(jié)合活性。ELISA法：將小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入病人 血清 ，如有A-dsDNA則結(jié)合到微孔板上，加入酶

24、標(biāo)抗人IgG，加入底物顯色后經(jīng)酶標(biāo)儀比色可知 血清 中A-dsDNA抗體的量,免疫熒光法：采用馬疫錐蟲或短膜蟲作為基質(zhì)，加入病人 血清 。 血清中的A-dsDNA與膜上的天然DNA結(jié)合，加入熒光標(biāo)記抗人IgG。馬疫錐蟲和短膜蟲的動(dòng)基體會(huì)發(fā)出綠色熒光。金標(biāo)斑點(diǎn)法：雙鏈DNA包被于硝酸纖維膜上，加入病人 血清 ，加入金標(biāo)記抗人IgG，如有A-dsDNA存在，會(huì)顯示紅色斑點(diǎn),參考值依方法不同參考值也有不同。 Farrs法： 0.20 免疫熒光法：1:10 ELISA法：依試劑盒而定，一般70u 金標(biāo)法：陰性,臨床意義 A-dsDNA 陽性對(duì) SLE 有較高的特異性。大約60的活動(dòng)性 SLE 病人會(huì)出

25、現(xiàn) A-dsDNA。其他風(fēng)濕性疾病也會(huì)出現(xiàn)，但陽性率非常低，如RA、S.S。注意事項(xiàng) 假陽性結(jié)果非常少見，但陰性亦不能排除SLE的診斷,四.抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA) 測(cè)定 ANCA是針對(duì)中性粒細(xì)胞胞漿多種成分的 自身抗體，主要有髓過氧化物酶(MPO)和蛋白酶3（ Proteinase 3 ，PR3)的抗體 。主要用于診斷Wegener 肉芽腫和系統(tǒng)性血管炎，特別是伴有腎病、呼吸疾病或其他類型血管炎引起多器官損害的患者。檢測(cè)方法有IFA、ELISA、 IBT等,參考值 陰性。臨床意義 免疫熒光法檢查ANCA陽性一般

26、分為兩種熒光類型，一種是胞漿型，稱為cANCA，一種是核周型，稱為pANCA。cANCA產(chǎn)生彌漫性細(xì)胞漿染色，是針對(duì)PR3的抗體 ，一般見于wegener肉芽腫病(WG)，特別是腎和肺受累的病人。pANCA產(chǎn)生核周染色，是針對(duì)MPO的抗體 ，主要見于系統(tǒng)性血管炎病人。在WG病人中，cANCA陽性率在活動(dòng)期可達(dá)80，且有較高的抗體效價(jià)。在緩解期抗體陽性率低，且效價(jià)下降，或完全消失,注意事項(xiàng) ANCA 陽性也可見于 Good-Pastares 綜合征和 SLE 病人。WG的診斷不能單純依賴ANCA的結(jié)果，還要結(jié)合其他臨床表現(xiàn)，試驗(yàn)室檢查和組織病理學(xué)檢查才能確定。ANCA 效價(jià) 不能完全反應(yīng)疾病的活

27、動(dòng)以及對(duì)治療的反應(yīng)。pANCA 陽性不是特異性的抗 MPO抗體，也可以是抗粒細(xì)胞胞漿中其他酶的抗體，如彈性蛋白酶，組織蛋白酶 G 等。ANCA檢測(cè)應(yīng)注意排除其他自身抗體的交叉反應(yīng)，如ANA。因其可產(chǎn)生假陽性應(yīng)注意鑒別，并進(jìn)行ANA檢測(cè),五.抗線粒體抗體（Antimitochondrial antibody,AMA) AMA是以細(xì)胞漿中的線粒體為抗原的一種自身抗體，無器官和種屬特異性。一般采用大鼠腎及胃作為抗原基質(zhì)，采用IFA檢測(cè)，陽性可見大鼠腎和胃的細(xì)胞漿呈現(xiàn)細(xì)顆粒狀熒光。采用免疫印跡法可將與線粒體抗原的反應(yīng)分為從M1到M9九種類型，高效價(jià)的M2和M9型 自身抗原與原發(fā)性膽汁性肝硬變相關(guān)。目前

28、已有檢測(cè)M2的ELISA試劑盒供應(yīng),參考值 陰性 1：10 為陽性臨床意義 AMA是原發(fā)性膽汁性肝硬化的標(biāo)記 抗體，陽性率達(dá)90%，并且50%患者 抗體效價(jià)達(dá)1：1280或更高。此外，也可見于慢性活動(dòng)性肝炎、隱匿性肝硬化。肝外阻塞性黃疸患者AMA常陰性，因此可作為鑒別診斷的一個(gè)指標(biāo)。正常人中陽性率10%，且效價(jià)較低,六.抗平滑肌抗體（Antismooth muscle antibody，ASMA ) ASMA是抗肝細(xì)胞膜上一種肌動(dòng)球蛋白的自身抗體。這種肌動(dòng)球蛋白與平滑肌有交叉抗原性，因此與平滑肌有反應(yīng)。一般采用IFA法，以大鼠胃作為抗原基質(zhì)，陽性可見胃壁平滑肌呈現(xiàn)亮綠色熒光,參考值 陰性，1：

29、10為陽性臨床意義 主要見于明顯活動(dòng)期的自身免疫性肝炎患者，陽性率在80%以上，效價(jià) 在1：80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可陽性，且早于 HBsAg出現(xiàn)。其他疾病如傳染性單核細(xì)胞增多癥、SS、RA、支原體肺炎、腫瘤和病毒感染者也有不同程度的陽性率。正常人中僅有2%陽性,七. 抗甲狀腺球蛋白抗體（ATGA)和抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA) ATGA 是由甲狀腺炎引起的自身抗體 ，抗原是一種糖蛋白。ATGA有器官特異性而無種屬特異性。ATMA 的抗原是甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)的脂蛋白。常用檢測(cè)方法有：IFA、IHA、RIA、ELISA等,參考值 IHA： 血清效價(jià) 1：32， 1：32為陽

30、性，ATGA 和ATMA ELISA：正常為陰性，P/N 2.1 為陽性, ATGA 和 ATMA RIA：ATGA 30%；ATMA 15,臨床意義 主要見于橋本甲狀腺炎、甲亢、甲低患者，也可見于甲狀腺瘤、惡性貧血、重癥肌無力、Edison 病和肝臟疾病等。SLE及其他自身免疫病也有一定的陽性率。 正常人也可檢出這兩種 抗體 ，并且隨著年齡的增長(zhǎng)，陽性率增加，特別是 40歲以上婦女，可達(dá)18%左右。 應(yīng)該注意到，有的患者ATGA陰性，但ATMA陽性，因此兩種 抗體 同時(shí)檢測(cè)可提高抗甲狀腺自身抗體的檢出水平,八. HLAB27測(cè)定 HLAB27 抗原為人類MHC I類 抗原B位點(diǎn)的表達(dá)產(chǎn)物，可

31、分為幾種亞型。HLA B27的檢測(cè)方法有多種，補(bǔ)體依賴性微量細(xì)胞毒法(CDMA)；流式細(xì)胞儀法；玫瑰花法；ELISA法；等電聚焦法等。近來應(yīng)用PCR法檢測(cè)HLAB27，敏感而特異，并且可進(jìn)行B27亞型的分析。參考值 非洲美洲人：34%；高家索人：68%；亞洲人：1,臨床意義 強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者HLAB27陽性率為9095%。大約42%的青年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(JRA)存在HLAB27，Reiters 綜合征患者陽性率大約79%。此外，腸病性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎也有一定的陽性率。RA病人陽性率不高。注意事項(xiàng) 在評(píng)價(jià)HLAB27陽性結(jié)果時(shí)應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合考慮，不能單純依靠此結(jié)果作出診斷,小結(jié):

32、 總之，自身抗體的檢測(cè)對(duì)診斷自身免疫病有著重要的意義。人 血清 中存在著多種自身抗體，有器官特異性的，也有非器官特異性的。因此，在選擇自身抗體檢測(cè)時(shí)應(yīng)綜合考慮，合理選用,抗核抗體（ANA）的檢查最常用于篩查全身性風(fēng)濕病和自身免疫病。ANA的檢查可觀察到能與細(xì)胞核內(nèi)的核酸和蛋白抗原起反應(yīng)的自身抗體。細(xì)胞內(nèi)可能存在對(duì)多種抗原起反應(yīng)的自身抗體。細(xì)胞內(nèi)可能存在對(duì)多種抗原起反應(yīng)的抗體。只有某種抗體的效價(jià)很高時(shí)，IFA才能加以鑒別。 在大約1%的正常人的體內(nèi)可測(cè)到低效價(jià)的非特異性抗核抗體，80歲以上老人的檢出率可高達(dá)50%。高效價(jià)的ANA一般與活動(dòng)期SLE密切相關(guān)。采用Hep-2細(xì)胞檢測(cè)ANA，可見到不同的染色模型,homogenous（均質(zhì)型） 又稱彌散型，相應(yīng)的抗原是雙鏈DNA和組蛋白復(fù)合物。常見于SLE，特別是腎臟受累病人。也可見于其它結(jié)締組織病，如：風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，MCTD，干燥綜合征，硬皮病，慢性活動(dòng)性肝炎及原發(fā)性膽汁性肝硬變。Peripheral(周邊型) 相應(yīng)的抗原為雙鏈DNA，多見于活動(dòng)性SLE病人,Speckle(斑點(diǎn)型) 主要是針對(duì)ENA的抗體，包括Sm，RNP，SSA，SSB，Scl-70。一般認(rèn)為低效價(jià)的斑點(diǎn)型ANA不是結(jié)締組織病特有的，實(shí)