機(jī)能學(xué)教學(xué)課件

1、機(jī)能學(xué),目的,為適應(yīng)現(xiàn)代素質(zhì)教育的需要，培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)思維，獲取知識(shí)、獨(dú)立開展實(shí)際工作、運(yùn)用新技術(shù)的能、和創(chuàng)新意識(shí)與開拓精神和提高學(xué)生學(xué)習(xí)的主動(dòng)性與創(chuàng)造性，最終達(dá)到提高綜合素質(zhì)的目的，有機(jī)融合生理、藥理和病理生理學(xué)的實(shí)驗(yàn)而新設(shè)立的一門新型的獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)教學(xué)課程機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)。本門課是我校醫(yī)學(xué)生必修的基礎(chǔ)課程之一,生理、藥理、病生教學(xué)實(shí)驗(yàn),過(guò)程,機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué),實(shí)驗(yàn)生理科學(xué),或,根據(jù)新開課程的特點(diǎn)與要求編寫,基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室,機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)室,機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)課程的實(shí)施與準(zhǔn)備,生化與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,計(jì)算機(jī)實(shí)驗(yàn)中心,形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室,管理,網(wǎng)絡(luò)化多媒體機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)室,1,2,3,4,設(shè)備,MS-4000

2、生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),設(shè)備,是配置在微機(jī)上的四通道生物信號(hào)采集、放大、顯示、記錄與處理系統(tǒng), 可同時(shí)輸入4個(gè)生物機(jī)能信號(hào)，適用于生理、藥理、毒理和病理等實(shí)驗(yàn),MS-4000計(jì)算機(jī)生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),機(jī)能實(shí)驗(yàn)室特色,機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)課是一門實(shí)驗(yàn)教學(xué)課程，專門針對(duì)學(xué)生進(jìn)行系統(tǒng)、規(guī)范的實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練，為學(xué)生提供理論聯(lián)系實(shí)際、大膽實(shí)際操作和積極思考的機(jī)會(huì)。本課程通過(guò)對(duì)各種生理現(xiàn)象的觀察、動(dòng)物病理模型的制備和藥物救治等方法的系統(tǒng)學(xué)習(xí)，將三門學(xué)科知識(shí)融會(huì)貫通。更加貼近臨床實(shí)踐,機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)課結(jié)合相關(guān)學(xué)科的理論知識(shí)形成了自身的特色，實(shí)驗(yàn)教學(xué)是本課程的主要教學(xué)形式，并獨(dú)立開課、單獨(dú)考核，實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容有基本知識(shí)和基本技能訓(xùn)練項(xiàng)

3、目、綜合性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目和探索性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)項(xiàng)目等三類實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。通過(guò)學(xué)習(xí)機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)課，掌握機(jī)能學(xué)科實(shí)驗(yàn)的基本規(guī)律和基本技能、養(yǎng)成科學(xué)的思維方法、提高實(shí)際工作的能力，將為進(jìn)行臨床醫(yī)學(xué)實(shí)踐和醫(yī)學(xué)科學(xué)研究打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),動(dòng)物機(jī)能學(xué),李 榮 教 授,第一章、緒論 第二章、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本知識(shí) 第五章、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 第六章、安全實(shí)驗(yàn)和毒性實(shí)驗(yàn),一、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)學(xué)概述 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)學(xué) Animal experiment science 是指在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，還包括各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，實(shí)驗(yàn)方法及技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的科學(xué)。是一門新興的基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)課程，綜合了生理學(xué)、病理生理學(xué)、藥理學(xué)三門學(xué)科的理論知識(shí)和實(shí)驗(yàn)技能，使它

4、們成為一個(gè)有機(jī)的整體的一門實(shí)驗(yàn)課程。 研究對(duì)象動(dòng)物 目的：通過(guò)實(shí)驗(yàn)教學(xué)鍛煉和加強(qiáng)學(xué)生的基本操作技能，培養(yǎng)和樹立血色懷念感的嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)態(tài)度，啟發(fā)和誘導(dǎo)學(xué)生的科學(xué)思維方式，最大程度地調(diào)動(dòng)學(xué)生的主觀能動(dòng)性,第一章緒論,任務(wù)： （1）通過(guò)各種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察動(dòng)物體中的各種生命指征的產(chǎn)生并探討這些生命指征產(chǎn)的生并滔滔這些生命指征產(chǎn)生的原理，以及動(dòng)物體在疾病狀態(tài)寫的病理生理過(guò)程和藥物處理前后這些生命指標(biāo)的變化。 （2）使學(xué)生通過(guò)這種綜合性實(shí)驗(yàn)既能看到實(shí)驗(yàn)中的生理現(xiàn)象及其原理，又能看到疾病狀態(tài)下疾病發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸的規(guī)律以及藥物治療疾病狀態(tài)的作用機(jī)能。 （3）機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)是整個(gè)醫(yī)學(xué)教學(xué)中的重要組成部分，是“三基”培

5、養(yǎng)中必不可少的部分,意義：生理學(xué)、藥理學(xué)和病理生理學(xué)都是理論性和實(shí)踐性較強(qiáng)的學(xué)科，它們的實(shí)驗(yàn)課以動(dòng)物實(shí)驗(yàn)課為主。為了更好地適應(yīng)教育形勢(shì)的發(fā)展，貫徹“教育要面向現(xiàn)代化、面向未來(lái)”的指示，更好地按照國(guó)家教委“二十一世紀(jì)教學(xué)內(nèi)容和課程體系改革”的精神，以突出主干課、減少必修課、豐富選修課、加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)課為原則，把生理、藥理、病生學(xué)科的實(shí)驗(yàn)課程精簡(jiǎn)、綜合和提高，統(tǒng)籌安排而形成機(jī)能學(xué)，對(duì)加強(qiáng)學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和綜合分析等方面的能力培養(yǎng)、完善學(xué)科間的交叉與滲透，有效地發(fā)揮人力和物力的作用,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)學(xué)的特點(diǎn)： 內(nèi)容的豐富性通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討機(jī)體正常、病理或藥物干預(yù)的情況下，有關(guān)的器官的功能變化及其規(guī)律。 綜合

6、性能力提高同學(xué)們通過(guò)學(xué)生有關(guān)理論、操作儀設(shè)備，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（包括經(jīng)典性、綜合性和探索性實(shí)驗(yàn)）、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)病例分析，力求使自身綜合能力有明顯提高。這些能力包括攝取知識(shí)的能力，動(dòng)手操作能力，觀察、比較、分析和綜合能力，邏輯思維和解決問(wèn)題的能力，口頭和書面表達(dá)能力，科學(xué)創(chuàng)新能力,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)學(xué)分類： 根據(jù)教學(xué)與科研的需要分為：教學(xué)實(shí)驗(yàn)和科研實(shí)驗(yàn)。 教學(xué)實(shí)驗(yàn)明確教學(xué)目的、觀察實(shí)驗(yàn)反應(yīng)和結(jié)果，分析討論。 科研實(shí)驗(yàn)立題前準(zhǔn)備、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)方法確定、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇、實(shí)驗(yàn)技術(shù)、技巧的要求和規(guī)定、記錄、總結(jié)，對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)、數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，撰寫論文,依據(jù)時(shí)間的長(zhǎng)短，可分為：急性實(shí)驗(yàn)和慢性實(shí)驗(yàn)。 急性實(shí)驗(yàn)一般是施以致病因素

7、便于觀察實(shí)驗(yàn)或者在麻醉的情況下施以手術(shù)，將器官暴露、取出，在較短時(shí)間內(nèi)，觀察細(xì)小環(huán)節(jié)的變化。 影響因素：由于受麻醉、手術(shù)創(chuàng)傷的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果常不完全真實(shí)，需要慢性實(shí)驗(yàn)和臨床研究校正。 慢性實(shí)驗(yàn)是在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)施以致病因素，使動(dòng)物逐漸致病，或者先在無(wú)菌條件下給動(dòng)物施以手術(shù)并待手術(shù)創(chuàng)口愈合后，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。 有利條件動(dòng)物的狀況較為接近自然生活條件，能較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)連續(xù)觀察，獲得較為系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)資料，有利于揭露疾病過(guò)程中整個(gè)生命活動(dòng)變化的規(guī)律或者藥物的作用,依據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象可分為： 在體實(shí)驗(yàn)呼吸、休克。 離體實(shí)驗(yàn)蛙心、消化系統(tǒng)的離體腸管。 細(xì)胞培養(yǎng) 1）在體實(shí)驗(yàn)是指整體動(dòng)物作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的實(shí)驗(yàn)，如在復(fù)制疾病的動(dòng)

8、物模型的基礎(chǔ)上觀測(cè)處理因素的效應(yīng)。 2）離體實(shí)驗(yàn)是指通過(guò)手術(shù)把所需要的器官?gòu)膭?dòng)物體內(nèi)取出，再觀測(cè)處理因素的效應(yīng)這樣一類的實(shí)驗(yàn)。優(yōu)點(diǎn)：離體實(shí)驗(yàn)?zāi)芘懦齽?dòng)物神經(jīng)體液等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)效應(yīng)的影響，特別適合觀察藥物作用的實(shí)驗(yàn)。 3）細(xì)胞培養(yǎng)是在培養(yǎng)組織細(xì)胞株的基礎(chǔ)上觀測(cè)處理因素的效應(yīng)這樣一類的實(shí)驗(yàn)，它要求的實(shí)驗(yàn)條件較多，多用于科學(xué)研究,機(jī)能學(xué)課程的主要內(nèi)容及程序,分三步： （一）基本技能訓(xùn)練 一室蛙脊髓破壞、蛙心插管 4h 蛙坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備 二室手術(shù)器械的認(rèn)識(shí)及操作方法 4h 靜脈麻醉、氣管切開、神經(jīng)分離、頸靜脈 （動(dòng)脈）插管、股動(dòng)脈插管 三室微機(jī)基本操作 4h （MS4000多媒體生物信號(hào)記錄分4h

9、析系統(tǒng)） 四室胸腹部手術(shù) 4h 心肺摘出、膽總管插管、離體腸管 腸管結(jié)扎、股動(dòng)脈插管,二）難度較小的綜合性實(shí)驗(yàn) 一室骨骼肌的單收縮、復(fù)合收縮 和強(qiáng)直收縮及神經(jīng)干動(dòng)作電位 4h 二室水楊酸鈉血漿半衰期T1/2測(cè)定 4h 三室急性右心衰竭 4h 四室消化系統(tǒng)功能調(diào)節(jié) 及藥物對(duì)腸管的影響 4h,三）難度較大的綜合性實(shí)驗(yàn) 一室蛙心灌流及藥物對(duì)離體蛙心的作用4h 二室尼可剎米LD50測(cè)定 4h 三室呼吸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié) 與實(shí)驗(yàn)性肺水腫的搶救 4h 四室血壓的調(diào)節(jié)與失血性休克的搶救4h,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)學(xué)課程的基本要求： 為了更好地體現(xiàn)教師的主導(dǎo)作用和學(xué)生的主體作用，老師和同學(xué)們都要認(rèn)真嚴(yán)肅的態(tài)度帶好和學(xué)好機(jī)能學(xué)這門課程

10、，這里著重談對(duì)同學(xué)們的要求。 （一）、實(shí)驗(yàn)前 1、認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的有關(guān)內(nèi)容，了解實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟僮鞣椒皩?shí)驗(yàn)操作重點(diǎn)領(lǐng)會(huì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理。 2、結(jié)合該次實(shí)驗(yàn)復(fù)習(xí)或者學(xué)習(xí)有關(guān)的理論。 3、做好小組成員的分工，使每位同學(xué)都有機(jī)會(huì)訓(xùn)練基本操作和一起使用。 4、根據(jù)觀察指標(biāo)設(shè)計(jì)記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的表格。 5、根據(jù)有關(guān)理論，預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 6、著手實(shí)驗(yàn)前要檢查實(shí)驗(yàn)用品（器材和藥品是否齊全,二）、實(shí)驗(yàn)時(shí) 1、遵守課堂紀(jì)律和實(shí)驗(yàn)室守則 2、嚴(yán)格按照實(shí)習(xí)指導(dǎo)的步驟進(jìn)行操作愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物器械和要品盡量減少動(dòng)物損傷和藥品器械的損耗，對(duì)貴重儀器要倍加愛(ài)護(hù)，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。 3、同學(xué)之間要密切配合，認(rèn)真觀察實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的現(xiàn)象及時(shí)客觀

11、地記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)必要時(shí)加上文字注釋，不容許擅自修改實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和憑空臆造，倘若出現(xiàn)與預(yù)期結(jié)果不同時(shí)，要分析其原因，觀察記錄過(guò)程也就是培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)態(tài)度的過(guò)程。 4、實(shí)驗(yàn)過(guò)程要根據(jù)實(shí)驗(yàn)思考題進(jìn)行思考問(wèn)題，培養(yǎng)科學(xué)思維和解決問(wèn)題的能力。 5、保持實(shí)驗(yàn)室的安靜，不做與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的活動(dòng)，不談與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的話題。 6、注意安全嚴(yán)防觸電火災(zāi)中毒及被動(dòng)物咬傷等事故發(fā)生，萬(wàn)一出現(xiàn)事故，要立即報(bào)告迅速處理。 7、討論時(shí)要主動(dòng)發(fā)言，語(yǔ)言簡(jiǎn)練言之有理，言之有據(jù),三）、實(shí)驗(yàn)后 1、清洗擦干實(shí)驗(yàn)器械并放回原位，如有損壞和遺失要進(jìn)行登記并尋找或賠償。 2、存活的動(dòng)物、動(dòng)物尸體、標(biāo)本及其他廢棄物品等要放到指定的地方，不得隨意放置。 3

12、、值班同學(xué)要做好實(shí)驗(yàn)室清潔衛(wèi)生工作，關(guān)好門窗水、電方能離開實(shí)驗(yàn)室。 4、整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，認(rèn)真地獨(dú)立地撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，按時(shí)交給老師,四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的記錄和處理 1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的記錄。 實(shí)驗(yàn)記錄是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀反映，也是分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的依據(jù)，實(shí)驗(yàn)時(shí)要仔細(xì)觀察，即使記錄。要做到客觀、完整、具體、清楚、如刺激的種類、時(shí)間、強(qiáng)度、藥品的名稱。劑量和給藥時(shí)間。動(dòng)物或標(biāo)本對(duì)刺激發(fā)生反應(yīng)的表現(xiàn)、特征、強(qiáng)度與持續(xù)時(shí)間等。 需指示的是在實(shí)驗(yàn)中每次刺激或給藥前對(duì)照。以便與刺激或給藥后的變化相比較。 實(shí)驗(yàn)時(shí)要有耐性，要等前一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)基本恢復(fù)正常后才可進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)要控制記錄儀器的走紙速度，不使記錄的曲線太密而不易辨別和分析，也不

13、要太疏而浪費(fèi)紙張。同時(shí)，還要保持走紙速度前后一致。如實(shí)驗(yàn)中必需調(diào)整走速時(shí)一定要注明速度，以便在分析結(jié)果時(shí)換算成統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，以防作出錯(cuò)誤判斷,實(shí)驗(yàn)中為研究某生理現(xiàn)象變化的規(guī)律及特征，需用科學(xué)方法將新觀察的記錄到的結(jié)果轉(zhuǎn)變成可測(cè)定性資料，因此需對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行整理和分析。首先，要對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的本質(zhì)進(jìn)行定性。例如。對(duì)引導(dǎo)電位要肯定其是場(chǎng)電位還是動(dòng)作電位，是細(xì)胞內(nèi)還是細(xì)胞外，其方向是正還是負(fù)？是否為一種偽變等。凡屬定量資料。如：高低、長(zhǎng)短、快慢、大小等。均應(yīng)以法定國(guó)際計(jì)量單位和數(shù)值表達(dá)，并根據(jù)需要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。有些結(jié)果可繪制成統(tǒng)計(jì)表或圖形表示。再者如實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一個(gè)隨時(shí)間而變化的過(guò)程，則應(yīng)考慮其速度周期和頻

14、率。另外，還要考慮這種結(jié)果在機(jī)體何部位產(chǎn)生的它的空間范圍。形態(tài)大小和分布等情況以確定現(xiàn)象和結(jié)構(gòu)的關(guān)系,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理,實(shí)驗(yàn)報(bào)告是對(duì)實(shí)驗(yàn)的全面總結(jié)。學(xué)生通過(guò)書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，將掌握書寫科學(xué)論文的基本格式及繪圖制表的方法。為以后撰寫科學(xué)論文等打下良好的基礎(chǔ)；通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)資料全面的總結(jié)。將進(jìn)一步提高分析綜合概括問(wèn)題的能力；通過(guò)復(fù)習(xí)有關(guān)理論或查閱資料，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果作出正確分析和解釋，將有利于培養(yǎng)理論聯(lián)系實(shí)際和應(yīng)用知識(shí)的能力。因此，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告是非常重要的。 （一）、實(shí)驗(yàn)報(bào)告寫作要求 1、凡是獨(dú)立操作的實(shí)驗(yàn)，均要求每位學(xué)生按照每一實(shí)驗(yàn)的具體要求認(rèn)真獨(dú)立的完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫。 2、實(shí)眼報(bào)告應(yīng)按規(guī)定

15、用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙。寫報(bào)告應(yīng)文字簡(jiǎn)練，條理清楚，觀點(diǎn)明確，字跡整潔，并正確使用標(biāo)點(diǎn)符號(hào),實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫,二）書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告的具體內(nèi)容 1、姓名，班級(jí)，組別（此內(nèi)容寫在實(shí)驗(yàn)報(bào)告的封面） 2、實(shí)驗(yàn)題目（名稱） 3、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求（目的） 4、實(shí)驗(yàn)方法和步驟包括實(shí)驗(yàn)用的動(dòng)物，主要器材，藥品等。 5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果這是實(shí)驗(yàn)報(bào)告中最主要的部分，應(yīng)將實(shí)驗(yàn)過(guò)程觀察到的現(xiàn)象及時(shí)、忠實(shí)、正確，詳細(xì)的記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果后，根據(jù)記錄填寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。不可單憑記憶，否則易發(fā)生錯(cuò)誤和遺漏。 目前，醫(yī)學(xué)論文多采用三線表、直方圖、曲線或文字等方式表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。同學(xué)們要把實(shí)驗(yàn)過(guò)程獲得的數(shù)據(jù)、曲線、文字等原始資料加以整理，填入實(shí)驗(yàn)報(bào)告的適當(dāng)

16、位置。如用表格方式，就采用三線表,6、討論和結(jié)論這是實(shí)驗(yàn)報(bào)告質(zhì)量高低的重要部分。 討論要從實(shí)驗(yàn)結(jié)果出發(fā)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的分析、推理。分析要有理有據(jù)，推理要符合邏輯。可能的話在分析推理的基礎(chǔ)上提出恰如其分的結(jié)論。討論時(shí)不應(yīng)從書本上抄一段理論，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果做一般的解釋，更不應(yīng)抄襲別人的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。如有參考資料應(yīng)注明出處。 出現(xiàn)與理論推倒不符的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)尋找原因（是操作失誤？實(shí)驗(yàn)誤差？個(gè)體差異？還是預(yù)測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不科學(xué)？）。不容許擅自改動(dòng)數(shù)據(jù)，要在實(shí)驗(yàn)和書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告過(guò)程中培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的工作作風(fēng)和實(shí)是求是的科學(xué)態(tài)度,所選的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中一種為嚙齒類動(dòng)物，另一種為非嚙齒類動(dòng)物。 常用的實(shí)驗(yàn)序列是小鼠、大

17、鼠、狗、猴或小型豬,第二章 常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本知識(shí),一 常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物特性 （一）蟾蜍 Toad屬于兩棲綱，無(wú)尾目。 1、生物學(xué)特性蟾蜍(Buf buio gargerizans)屬于兩棲類，無(wú)尾目。品種很多。屬于兩棲類變溫動(dòng)物，皮膚光滑濕潤(rùn)，有腺體無(wú)鱗片。幼年生活于水中，用鰓呼吸，食物以水中植物為主。蟾蜍經(jīng)過(guò)變態(tài)后轉(zhuǎn)入陸棲或半陸棲生活，有不發(fā)達(dá)的肺，用肺和皮膚呼吸。以昆蟲等幼小動(dòng)物為食。有五趾形跗肢，適合爬行和跳躍。心臟有兩個(gè)心房，一個(gè)心室，心房、心室區(qū)分不明顯，動(dòng)靜脈血液混合。有冬眠習(xí)性。蟾蜍身體背腹扁平，頭呈三角形，左右對(duì)稱，眼大，突出于頭部?jī)蓚?cè)，有上、下眼瞼和瞬膜，有鼻、耳等感受器

18、官。幼年為蝌蚪，有尾，變態(tài)后尾消失，前肢四趾，后肢五趾。蟾蜍無(wú)鳴囊，背部皮膚有許多疣狀突起毒腺，可分泌蟾蜍毒，以耳后的橢圓形耳腺分泌最多。 和捕捉,2)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 蟾蜍廣泛用于生理學(xué)科研和教學(xué)中。用蟾蜍腓腸肌和坐骨神經(jīng)可觀察外周神經(jīng)及其肌肉的功能，刺激蟾蜍皮膚觀察反射弧，用蟾蜍作脊休克、脊髓反射、微循環(huán)等實(shí)驗(yàn)。利用蟾蜍離體心臟，研究心臟的生理功能。蟾蜍還可用于生殖生理、藥理學(xué)、胚胎發(fā)育、免疫學(xué)等的研究,二）兔Rabbit屬哺乳綱。嚙齒目。兔科。 1、生物學(xué)特性草食動(dòng)物，性情溫順，膽小易驚，耳大，血管清晰。頸部減壓神經(jīng)，交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)分開。喉部狹窄。家兔的正常體溫在385395C。靜態(tài)時(shí)以腹式

19、呼吸為主，每分鐘3556次。胃常處于排空狀態(tài)，小腸的吸收功能與人一樣。鈣磷代謝主要是通過(guò)腎臟。 2、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用家兔廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究中，特別是用于科研和教學(xué)中。在機(jī)能教學(xué)實(shí)驗(yàn)中，由于兔耳緣靜脈淺表，易暴露，是靜脈給藥的最佳部位。兔的減壓神經(jīng)在頸部與迷走神經(jīng)、交感神經(jīng)分開走行而單獨(dú)成為一束，常用于研究減壓神經(jīng)與心血管活動(dòng)的關(guān)系。家兔用于心血管反射調(diào)節(jié)、呼吸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)、泌尿功能調(diào)節(jié)以及神經(jīng)放電活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)等。此外，家兔還用于免疫學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、生殖生理學(xué)、眼科以及臨床疾病的研究,家兔復(fù)制疾病模型與其它實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較有以下特點(diǎn)： 體型較鼠大；比狗體型小，性溫馴，易飼養(yǎng)，繁殖率高。因此，當(dāng)實(shí)驗(yàn)中須用較大動(dòng)

20、物時(shí)，常用家兔。 在血液循環(huán)方面，容易做到直接描記動(dòng)脈血壓，股動(dòng)脈壓，肺小動(dòng)脈楔入壓，中心靜脈壓等。觀察血壓反應(yīng)不如狗，貓。兔的減壓神經(jīng)則是獨(dú)立走向的，便于觀察減壓神經(jīng)對(duì)心、血管系統(tǒng)的作用。家兔心臟在離體情況下，搏動(dòng)很久，是觀察有害因子對(duì)哺乳類動(dòng)物心臟直接作用較適合的一個(gè)模式。離體兔耳，又可作為觀察有害因子對(duì)血管直接作用的一個(gè)模型。 家兔適宜于研究發(fā)熱，解熱藥和檢查致熱源。 消化系統(tǒng)：與人類相差較遠(yuǎn)，不適宜做這方面研究 其他：對(duì)組織胺不敏感，注射組織胺并不引起血壓下降，不能造成過(guò)敏性休克模型,三）小鼠Mouse小鼠屬于嚙齒類動(dòng)物，體型較小，一般體重在50g以內(nèi)。小鼠性情溫順，易于捕捉，膽小怕驚

21、，對(duì)外來(lái)刺激敏感。喜群居于陰暗環(huán)境，晝伏夜動(dòng)。小鼠為雜食性動(dòng)物，胃容量小，不耐饑渴，隨時(shí)采食。體溫變化大，對(duì)環(huán)境濕、溫度變化很敏感。適宜的溫度為18，相對(duì)濕度為5060。小鼠成熟早，繁殖力強(qiáng)，壽命13年,2)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 小鼠在實(shí)驗(yàn)中用量大，用途廣。小鼠實(shí)驗(yàn)研究資料豐富、參考對(duì)比性強(qiáng)；其實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性、可靠性和重復(fù)性高，被廣泛用于各類科研實(shí)驗(yàn)中，如用于生理學(xué)小腦功能障礙的實(shí)驗(yàn)等，用于藥理學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)以及臨床疾病的實(shí)驗(yàn)研究。 小鼠復(fù)制疾病模型，較其它動(dòng)物具有以下主要特點(diǎn)： 小鼠價(jià)格低廉，便于大量繁殖，適合用于需要大量動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)，容易滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。例如：藥物半致死量的測(cè)定。 小鼠對(duì)許

22、多疾病有易感性，因而適用于研究如血吸蟲、瘧疾、流感、腦炎等這類疾?。恍∈蟮募兤废瞪醵?，每系有其獨(dú)特的生物特性，對(duì)某些疾病易感。小鼠廣泛用于各種腫瘤的研究。 器官小。研究組織學(xué)電鏡觀察時(shí)節(jié)約人力，物力。 有發(fā)達(dá)的神經(jīng)系統(tǒng)，應(yīng)用于復(fù)制神經(jīng)官能癥模型,四）貓(Cat)學(xué)名Feli scatus (1)生物學(xué)特性 貓屬于哺乳類動(dòng)物。喜愛(ài)孤獨(dú)而自由的生活，喜居于清潔、明亮、干燥的環(huán)境。貓的大腦和小腦均很發(fā)達(dá)，貓眼能按照光線的強(qiáng)弱變化而靈敏地調(diào)節(jié)瞳孔大小。 (2)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 貓是醫(yī)學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一。特別在國(guó)外的實(shí)驗(yàn)研究中較普遍使用。在生理學(xué)實(shí)驗(yàn)中，由于貓具有極為敏感的神經(jīng)系統(tǒng)，頭蓋骨和腦的形狀固定

23、，是腦神經(jīng)生理學(xué)的較好實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。在電極探針插人大腦各部位的生理學(xué)研究方面現(xiàn)已完全標(biāo)準(zhǔn)化，可以在清醒條件下研究神經(jīng)遞質(zhì)等活性物質(zhì)的釋放和條件反射，外周神經(jīng)與中樞神經(jīng)的聯(lián)系。還可做去大腦僵直、交感神經(jīng)的瞬膜和虹膜反應(yīng)以及呼吸、心血管反射的調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)等。此外，貓也用于藥理學(xué)和臨床疾病的實(shí)驗(yàn)研究,狗(Dog)學(xué)名Canis familiaris (1)生物學(xué)特性 狗屬于哺乳類動(dòng)物。狗的品種多，個(gè)體差異大。狗聽覺(jué)、嗅覺(jué)靈敏，反應(yīng)敏捷，對(duì)外界環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)。易飼養(yǎng)，可調(diào)教，能很好地配合實(shí)驗(yàn)研究需要。狗喜食肉、骨，生性好動(dòng)，有良好的耐力。狗具有發(fā)達(dá)的血液循環(huán)與神經(jīng)系統(tǒng)，臟構(gòu)造及其比例與人的相似，是比較理想的實(shí)

24、驗(yàn)動(dòng)物。 (2)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 狗是目前基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究和教學(xué)中的常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一。在生理與常用于心血管系統(tǒng)、脊髓傳導(dǎo)、大腦皮層功能定位、條件反射、內(nèi)分泌腺摘除和各種消化系統(tǒng)功能的實(shí)驗(yàn)研究。狗還用于藥理學(xué)、毒理學(xué)、行為學(xué)、腫瘤學(xué)、核醫(yī)學(xué)以及臨床某些疾病的研究。狗特別應(yīng)用于,一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(experimental design)是科學(xué)研究的一個(gè)組成部分。在整個(gè)科研過(guò)程中，一般是根據(jù)對(duì)事物的認(rèn)識(shí)提出某一問(wèn)題，經(jīng)過(guò)文獻(xiàn)查閱歸納前人的成就和看法，進(jìn)行邏輯推理，從而形成一種有科學(xué)依據(jù)的設(shè)想和假設(shè)。在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)用以證明該設(shè)想的技術(shù)路線，并選擇合適的實(shí)驗(yàn)方法，安排實(shí)驗(yàn)步驟、然后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察和累積資料

25、。經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析，最后得出結(jié)論來(lái)驗(yàn)證當(dāng)初的設(shè)想和假說(shuō)。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否嚴(yán)密，直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和結(jié)論的可靠性。良好的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是由比較經(jīng)濟(jì)的人力、物力和時(shí)間，獲得較為可靠的結(jié)果。使誤差減至最低限度。還可使多種處理因素包括在很少的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)中，達(dá)到高效的目的。不重視實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和設(shè)計(jì)不周密，可因獲得的數(shù)據(jù)不完全或不可靠而使實(shí)驗(yàn)失敗；也可能是大量浪費(fèi)人力而事倍功半,第五章 機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),進(jìn)行新課題的研究或初做科學(xué)實(shí)驗(yàn)者，很難一開始就做出周密的設(shè)計(jì)。因此需要做預(yù)備試驗(yàn)。預(yù)備試驗(yàn)是根據(jù)原始假說(shuō)作初步探索，也是對(duì)原始假說(shuō)作非正式驗(yàn)證。同時(shí)也是對(duì)初步確定采取的實(shí)驗(yàn)方法和操作步驟進(jìn)行演習(xí)。預(yù)備試驗(yàn)結(jié)

26、果對(duì)原始假說(shuō)，實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)操作做必要的修改，為正式實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)做好準(zhǔn)備。 二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)題目的選擇 選題的好壞決定該研究工作的價(jià)值和實(shí)驗(yàn)的成功率。選題好壞的標(biāo)準(zhǔn)主要有下列幾方面。 1創(chuàng)新性 科學(xué)研究為創(chuàng)新性工作，僅僅重復(fù)別人的實(shí)驗(yàn)不是科研，所以研究的問(wèn)題必須是別人沒(méi)有研究過(guò)的，或雖有人研究過(guò)但還不能做結(jié)論的問(wèn)題。因此必須檢索國(guó)內(nèi)外有關(guān)的文獻(xiàn)和科研新資料，以保證課題的新穎,2科學(xué)性 研究的問(wèn)題必須有一個(gè)設(shè)想，再設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)去證明設(shè)想是否正確，設(shè)想不是憑空瞎想，而應(yīng)有一定科學(xué)依據(jù)，也就是要有科學(xué)性。 3目的性 醫(yī)學(xué)研究的目的是為了闡明生理現(xiàn)象、病理變化、探索疾病發(fā)生發(fā)展的規(guī)律和機(jī)制、探索疾病防治方法、藥物

27、的作用機(jī)制等等，有一定的理論或?qū)嵱靡饬x的科學(xué)研究才有研究的價(jià)值。 4可行性 必須具備進(jìn)行該課題研究所需的實(shí)驗(yàn)條件，再好的課題如果不具備研究條件也無(wú)法進(jìn)行。 三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的幾個(gè)基本問(wèn)題 1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的三大原則：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的三大原則是指對(duì)照、隨機(jī)和重復(fù)。原由Fisher氏提出，現(xiàn)被普遍接受,1)對(duì)照(Control) 一般來(lái)說(shuō)，實(shí)驗(yàn)都應(yīng)有實(shí)驗(yàn)組(處理組)和對(duì)照組，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組具有同等重要的意義。這是因?yàn)樵趯?shí)驗(yàn)中很難避免非實(shí)驗(yàn)因素的干擾而造成誤差。用對(duì)照組的方法能比較有效地消除各種非實(shí)驗(yàn)因素的干擾所造成的誤差。 同體對(duì)照：即同一動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前后(或施加特定影響的前后)獲得的結(jié)果及數(shù)據(jù)作對(duì)照。這種對(duì)照可以最

28、大限度地減少抽樣誤差。 異體對(duì)照：在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，一般是選用體重相近，性別相同者進(jìn)行配對(duì)或分組。 空白對(duì)照：指不給任何處理的對(duì)照。但在大多數(shù)情況下，都必須給對(duì)照組一個(gè)與實(shí)驗(yàn)組條件相同但不加特定影響的處理。 資料對(duì)照：即以文獻(xiàn)資料或歷史的、他地的、他人的資料作為對(duì)照。但由于時(shí)間、地點(diǎn)和條件不同，差異相當(dāng)大，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一般不采用,2)隨機(jī)化(randomization) 隨機(jī)不是隨便而是隨機(jī)遇而定，也就是指被研究的樣本是總體中任意抽取的，即在抽取時(shí)要使每一樣本有同等機(jī)會(huì)被抽取，隨機(jī)抽樣是縮小抽樣誤差的基本方法。 在實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組除某種特定處理因素不同外，其他非特定因素最好是完全一樣，均衡。事實(shí)

29、上完全一致和絕對(duì)均衡是不可能的，只做到基本上的一致和均衡，這主要通過(guò)隨機(jī)抽樣來(lái)完成。 隨機(jī)抽樣方法很多，如抽簽法、模球法。也可查隨機(jī)數(shù)字來(lái)確定，詳細(xì)方法請(qǐng)參考有關(guān)書刊,3)重復(fù)(replication) 每一實(shí)驗(yàn)應(yīng)有足夠的例數(shù)和重復(fù)數(shù)。樣本所含的數(shù)目越大或重復(fù)的次數(shù)越多，則越能反映機(jī)遇變異的客觀真實(shí)情況，因此重復(fù)可反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，但是樣本例數(shù)很多或?qū)嶒?yàn)重復(fù)次數(shù)很大，非但在實(shí)驗(yàn)上有一定困難而且也是不必要的，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)就是要使樣本的重復(fù)次數(shù)減少到不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的最小限度。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)率至少要超過(guò)95，這樣做出假陽(yáng)性的錯(cuò)誤判斷的可能性小于5(P005)。如果一定數(shù)量的樣本就能獲得P005水平

30、的實(shí)驗(yàn)，當(dāng)然要比過(guò)量樣本獲得P005的實(shí)驗(yàn)更可取。決定樣本的例數(shù)取決于： 處理效果大小，效果越明顯所需重復(fù)數(shù)越小； 實(shí)驗(yàn)誤差，誤差越小所需樣本數(shù)減少； 抽樣誤差，樣本的個(gè)體差越小，反映越一致，所需樣本數(shù)就小； 資料性質(zhì)，計(jì)數(shù)資料樣本數(shù)要多些，計(jì)量資料則相應(yīng)減少,2實(shí)驗(yàn)對(duì)象的選擇：在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中，實(shí)驗(yàn)對(duì)象包括動(dòng)物、離體臟器或游離肢體、分離而得的活細(xì)胞成分、在實(shí)驗(yàn)室中已長(zhǎng)期培養(yǎng)的細(xì)胞或細(xì)菌。生理科學(xué)實(shí)驗(yàn)課程中的實(shí)驗(yàn)的對(duì)象以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為主。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇合適與否與實(shí)驗(yàn)成敗及誤差大小有很大關(guān)系。其選擇要點(diǎn)是： (1)動(dòng)物種類盡量選擇接近于人類而又經(jīng)濟(jì)的動(dòng)物； (2)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行品種和純度的選擇。在有

31、些實(shí)驗(yàn)中，需用純種(近交系)動(dòng)物； (3)動(dòng)物的狀態(tài)和營(yíng)養(yǎng)狀況良好； (4)最好選用年齡一致或接近的動(dòng)物，體重一致或相近的動(dòng)物。 (5)動(dòng)物的性別最好相同，如對(duì)性別要求不高的實(shí)驗(yàn)可雌雄混用，分組時(shí)應(yīng)雌雄搭配開。與性別有關(guān)者，只能用某一性別的動(dòng)物,3觀察指標(biāo)的選擇：指標(biāo)是在實(shí)驗(yàn)觀察中用來(lái)指示(反映)研究對(duì)象中某些特征(如對(duì)藥物的效應(yīng))的可被研究者或儀器感知的一種現(xiàn)象標(biāo)志，也就是說(shuō)，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)是反應(yīng)試驗(yàn)對(duì)象所發(fā)生的生理現(xiàn)象或病理現(xiàn)象的標(biāo)志，指標(biāo)可分為計(jì)數(shù)指標(biāo)和計(jì)量指標(biāo)，或主觀指標(biāo)和客觀指標(biāo)等等。 所定的指標(biāo)，至少要符合下述基本條件： (1)特異性 指標(biāo)應(yīng)特異地反映所觀察的事物(現(xiàn)象)的本質(zhì)，即指

32、標(biāo)特異地反映某一特定的現(xiàn)象，不至于與其他現(xiàn)象的混淆。如高血壓中的血壓尤其是舒張壓就可作為高血壓病的特異指標(biāo)。 (2)客觀性 最好選用可具體數(shù)值或圖形表達(dá)的指標(biāo)(如腦電圖、心電圖、血壓和呼吸描記、化驗(yàn)檢查等等)。因?yàn)橹饔^指標(biāo)(如肝脾觸診。目力比色等)易受主觀性因素的影響而造成較大的誤差,3)重現(xiàn)性 一般來(lái)說(shuō)，客觀性指標(biāo)在相同條件下可以重現(xiàn)，重現(xiàn)性高的指標(biāo)一般意味著無(wú)偏性或偏性小，誤差小，從而較正確的反映實(shí)際情況。重現(xiàn)性小可能與儀器穩(wěn)定性、操作誤差，受試動(dòng)物的機(jī)能狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件影響有關(guān)。若非這些因素影響而重現(xiàn)性小的指標(biāo)不宜采用。 4)靈敏性 指標(biāo)測(cè)量的技術(shù)方法或儀器靈敏是極其重要的。方法不靈敏

33、，該測(cè)出的變化測(cè)不出來(lái)，就會(huì)得出“假陰性結(jié)果”，儀器不精密，所獲陰性數(shù)值不真實(shí)。目前常用的分光光度計(jì)，放射免疫法等，因?yàn)殪`敏度較高常被采用。 5)技術(shù)和設(shè)備的可能性 盡量選用即靈敏客觀，又切合本單位和研究者技術(shù)和設(shè)備實(shí)際的指標(biāo)。 6)指標(biāo)選定必須有依據(jù) 現(xiàn)成(定型)指標(biāo)，必須有文獻(xiàn)依據(jù)：自己創(chuàng)立的指標(biāo)必須經(jīng)過(guò)專門的實(shí)驗(yàn)鑒定,4指標(biāo)觀察和記錄：觀察和記錄在科學(xué)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中，占有十分重要的地位，為了正確地觀察和記錄，實(shí)驗(yàn)記錄時(shí)要嚴(yán)謹(jǐn)、細(xì)致、實(shí)事求是，力戒主觀偏性。要重視原始記錄、在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中應(yīng)預(yù)先規(guī)定或設(shè)計(jì)好原始記錄方式。原始記錄時(shí)要及時(shí)、完整、正確和整潔，嚴(yán)禁撕頁(yè)或涂改。 原始記錄不管是什么記錄方

34、式都必需寫明實(shí)驗(yàn)?zāi)俊?shí)驗(yàn)對(duì)象、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)日期、記錄好觀察測(cè)量的結(jié)果和數(shù)據(jù),對(duì)照可分為： 同體對(duì)照：即同一動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前后(或施加特定影響的前后)獲得的結(jié)果及數(shù)據(jù)作對(duì)照。這種對(duì)照可以最大限度地減少抽樣誤差。 異體對(duì)照：在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，一般是選用體重相近，性別相同者進(jìn)行配對(duì)或分組。 空白對(duì)照：指不給任何處理的對(duì)照。但在大多數(shù)情況下，都必須給對(duì)照組一個(gè)與實(shí)驗(yàn)組條件相同但不加特定影響的處理。 資料對(duì)照：即以文獻(xiàn)資料或歷史的、他地的、他人的資料作為對(duì)照。但由于時(shí)間、地點(diǎn)和條件不同，差異相當(dāng)大，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一般不采用,2)隨機(jī)化(randomization) 隨機(jī)不是隨便而是隨機(jī)遇而定，也就是

35、指被研究的樣本是總體中任意抽取的，即在抽取時(shí)要使每一樣本有同等機(jī)會(huì)被抽取，隨機(jī)抽樣是縮小抽樣誤差的基本方法。 在實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組除某種特定處理因素不同外，其他非特定因素最好是完全一樣，均衡。事實(shí)上完全一致和絕對(duì)均衡是不可能的，只做到基本上的一致和均衡，這主要通過(guò)隨機(jī)抽樣來(lái)完成。 隨機(jī)抽樣方法很多，如抽簽法、模球法。也可查隨機(jī)數(shù)字來(lái)確定，詳細(xì)方法請(qǐng)參考有關(guān)書刊,3)重復(fù)(replication) 每一實(shí)驗(yàn)應(yīng)有足夠的例數(shù)和重復(fù)數(shù)。樣本所含的數(shù)目越大或重復(fù)的次數(shù)越多，則越能反映機(jī)遇變異的客觀真實(shí)情況，因此重復(fù)可反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，但是樣本例數(shù)很多或?qū)嶒?yàn)重復(fù)次數(shù)很大，非但在實(shí)驗(yàn)上有一定困難而且

36、也是不必要的，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)就是要使樣本的重復(fù)次數(shù)減少到不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的最小限度。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)率至少要超過(guò)95，這樣做出假陽(yáng)性的錯(cuò)誤判斷的可能性小于5(P005)。如果一定數(shù)量的樣本就能獲得P005水平的實(shí)驗(yàn)，當(dāng)然要比過(guò)量樣本獲得 P005的實(shí)驗(yàn)更可取。決定樣本的例數(shù)取決于： 處理效果大小，效果越明顯所需重復(fù)數(shù)越小； 實(shí)驗(yàn)誤差，誤差越小所需樣本數(shù)減少； 抽樣誤差，樣本的個(gè)體差越小，反映越一致，所需樣本數(shù)就??； 資料性質(zhì)，計(jì)數(shù)資料樣本數(shù)要多些，計(jì)量資料則相應(yīng)減少,2實(shí)驗(yàn)對(duì)象的選擇：在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中，實(shí)驗(yàn)對(duì)象包括動(dòng)物、離體臟器或游離肢體、分離而得的活細(xì)胞成分、在實(shí)驗(yàn)室中已長(zhǎng)期培養(yǎng)的細(xì)胞或細(xì)菌。生理科

37、學(xué)實(shí)驗(yàn)課程中的實(shí)驗(yàn)的對(duì)象以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為主。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇合適與否與實(shí)驗(yàn)成敗及誤差大小有很大關(guān)系。其選擇要點(diǎn)是： (1)動(dòng)物種類盡量選擇接近于人類而又經(jīng)濟(jì)的動(dòng)物； (2)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行品種和純度的選擇。在有些實(shí)驗(yàn) 中，需用純種(近交系)動(dòng)物； (3)動(dòng)物的狀態(tài)和營(yíng)養(yǎng)狀況良好； (4)最好選用年齡一致或接近的動(dòng)物，體重一致或相近的動(dòng)物。 (5)動(dòng)物的性別最好相同，如對(duì)性別要求不高的實(shí)驗(yàn)可雌雄混用，分組時(shí)應(yīng)雌雄搭配開。與性別有關(guān)者，只能用某一性別的動(dòng)物,3觀察指標(biāo)的選擇：指標(biāo)是在實(shí)驗(yàn)觀察中用來(lái)指示(反映)研究對(duì)象中某些特征(如對(duì)藥物的效應(yīng))的可被研究者或儀器感知的一種現(xiàn)象標(biāo)志，也就是說(shuō)，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)是

38、反應(yīng)試驗(yàn)對(duì)象所發(fā)生的生理現(xiàn)象或病理現(xiàn)象的標(biāo)志，指標(biāo)可分為計(jì)數(shù)指標(biāo)和計(jì)量指標(biāo)，或主觀指標(biāo)和客觀指標(biāo)等等,所定的指標(biāo)，至少要符合下述基本條件： (1)特異性 指標(biāo)應(yīng)特異地反映所觀察的事物(現(xiàn)象)的本質(zhì)，即指標(biāo)特異地反映某一特定的現(xiàn)象，不至于與其他現(xiàn)象的混淆。如高血壓中的血壓尤其是舒張壓就可作為高血壓病的特異指標(biāo)。 (2)客觀性 最好選用可具體數(shù)值或圖形表達(dá)的指標(biāo)(如腦電圖、心電圖、血壓和呼吸描記、化驗(yàn)檢查等等)。因?yàn)橹饔^指標(biāo)(如肝脾觸診。目力比色等)易受主觀性因素的影響而造成較大的誤差。 (3)重現(xiàn)性 一般來(lái)說(shuō)，客觀性指標(biāo)在相同條件下可以重現(xiàn)，重現(xiàn)性高的指標(biāo)一般意味著無(wú)偏性或偏性小，誤差小，從而較

39、正確的反映實(shí)際情況。重現(xiàn)性小可能與儀器穩(wěn)定性、操作誤差，受試動(dòng)物的機(jī)能狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件影響有關(guān)。若非這些因素影響而重現(xiàn)性小的指標(biāo)不宜采用,4)靈敏性 指標(biāo)測(cè)量的技術(shù)方法或儀器靈敏是極其重要的。方法不靈敏，該測(cè)出的變化測(cè)不出來(lái)，就會(huì)得出“假陰性結(jié)果”，儀器不精密，所獲陰性數(shù)值不真實(shí)。目前常用的分光光度計(jì)，放射免疫法等，因?yàn)殪`敏度較高常被采用。 (5)技術(shù)和設(shè)備的可能性 盡量選用即靈敏客觀，又切合本單位和研究者技術(shù)和設(shè)備實(shí)際的指標(biāo)。 (6)指標(biāo)選定必須有依據(jù) 現(xiàn)成(定型)指標(biāo)，必須有文獻(xiàn)依據(jù)：自己創(chuàng)立的指標(biāo)必須經(jīng)過(guò)專門的實(shí)驗(yàn)鑒定,4指標(biāo)觀察和記錄：觀察和記錄在科學(xué)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中，占有十分重要的地位，

40、為了正確地觀察和記錄，實(shí)驗(yàn)記錄時(shí)要嚴(yán)謹(jǐn)、細(xì)致、實(shí)事求是，力戒主觀偏性。 要重視原始記錄、在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中應(yīng)預(yù)先規(guī)定或設(shè)計(jì)好原始記錄方式。原始記錄時(shí)要及時(shí)、完整、正確和整潔，嚴(yán)禁撕頁(yè)或涂改。 原始記錄不管是什么記錄方式都必需寫明實(shí)驗(yàn)題目、實(shí)驗(yàn)對(duì)象、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)者、實(shí)驗(yàn)日期、記錄好觀察測(cè)量的結(jié)果和數(shù)據(jù)。規(guī)定填寫的項(xiàng)目要及時(shí)、完整、正確地填寫好。圖形、圖片一定要整理保存,研究者不僅要設(shè)法取得原始資料或數(shù)據(jù)。而且要應(yīng)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)原理和方法來(lái)處理數(shù)據(jù)和對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析判斷。 (1)首先必須把實(shí)驗(yàn)中的原始資料或數(shù)據(jù)完整地收集起來(lái)，經(jīng)過(guò)歸納、整理使之系統(tǒng)化、標(biāo)準(zhǔn)化。 (2)其次進(jìn)行統(tǒng)計(jì)指標(biāo)的計(jì)算，算出

41、各組數(shù)據(jù)的均值或百分?jǐn)?shù)(率或比)。如是計(jì)數(shù)指標(biāo)，一般用百分?jǐn)?shù)表示之；若為計(jì)量指標(biāo)，則計(jì)算出均值，最好還標(biāo)明均數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差，進(jìn)而標(biāo)明百分?jǐn)?shù)或均數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)誤,3)最后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性測(cè)驗(yàn)，測(cè)量均值或百分?jǐn)?shù)對(duì)估計(jì)總體的可能程度；比較兩組以上統(tǒng)計(jì)數(shù)值之差異是否顯著，以此推論事物的一般規(guī)律，或否定原先假說(shuō)或使上升為結(jié)論或理論。 5填寫實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)書 研究題目： 理論依據(jù)及研究現(xiàn)狀： 研究?jī)?nèi)容： 研究方法： 實(shí)驗(yàn)對(duì)象： 性別: 規(guī)格： 數(shù)量： 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的處理： 觀察指標(biāo)： 實(shí)驗(yàn)步驟： 儀器與藥品： 預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 設(shè)計(jì)人,四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的初步練習(xí) 高等醫(yī)學(xué)院校學(xué)生應(yīng)初步具有對(duì)生理過(guò)程或疾病進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究的能力

42、。學(xué)生自行設(shè)計(jì)生理學(xué)科實(shí)驗(yàn)是根據(jù)已掌握的理論知識(shí)和技能，經(jīng)過(guò)邏輯推理，擬出在課程時(shí)間范圍內(nèi)的實(shí)際條件允許下主要以動(dòng)物為對(duì)象的實(shí)驗(yàn)方法，來(lái)驗(yàn)證某一問(wèn)題，以培養(yǎng)初步掌握實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則，以提高教學(xué)質(zhì)量,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中需要注意的問(wèn)題設(shè)計(jì)是嚴(yán)密直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確和結(jié)論的可靠性。不重視實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)或設(shè)計(jì)不周密都會(huì)使實(shí)驗(yàn)結(jié)果資料紊亂或殘缺不全，得出錯(cuò)誤結(jié)論，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,對(duì)學(xué)生自己設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)除了參考前面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的一些原則和方法外，必須注意以下幾點(diǎn)： 1目的明確：通過(guò)實(shí)驗(yàn)需要解決的問(wèn)題必須明確。題目簡(jiǎn)練，內(nèi)容不宜大不宜雜。一個(gè)實(shí)驗(yàn)解決一個(gè)問(wèn)題或12個(gè)主要問(wèn)題。 2科學(xué)性強(qiáng)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要充分的理論根據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。包括前

43、人已有的成就，已經(jīng)指出的問(wèn)題或得出的結(jié)論。 3指標(biāo)明確可靠：易觀察、易客觀記錄、重復(fù)性好，得出的結(jié)果和結(jié)論能說(shuō)明問(wèn)題。 4切實(shí)可行：實(shí)驗(yàn)對(duì)象是易得的常用小實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(兔、大鼠、小鼠、蛙或蟾蜍等,實(shí)驗(yàn)器材、藥品試劑等宜簡(jiǎn)易價(jià)廉。實(shí)驗(yàn)一般控制在45小時(shí)內(nèi)完成。 實(shí)驗(yàn)分組和對(duì)照 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是一種特定的處理(急性失血、缺氧)作用于動(dòng)物后觀察某種或某些反應(yīng)(如血壓、呼吸的變化)以確定處理與反應(yīng)間的因果關(guān)系。若處理的強(qiáng)度、處理持續(xù)時(shí)間不同，或用同一方法處理不同的對(duì)象(動(dòng)物的種屬、性別、年齡不同)，則將實(shí)驗(yàn)分設(shè)若干組，每組有一定數(shù)量的動(dòng)物。除實(shí)驗(yàn)組外，必須設(shè)立對(duì)照組，在實(shí)驗(yàn)中有非特定因素如抓捉、體位、手術(shù)暴露、

44、溫度及其它種種因素的影響。為使這些非特定因素的影響減少最低限度設(shè)立對(duì)照組，對(duì)照可在自體身上也可在異體動(dòng)物身上進(jìn)行，注意事項(xiàng)可參閱實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析簡(jiǎn)介,五、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)項(xiàng)目 1請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一離體回腸實(shí)驗(yàn)，證明一個(gè)藥物通過(guò)阻斷M膽堿受體而抑制腸平滑肌收縮。 2請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一實(shí)驗(yàn)，證明Adrenaline對(duì)兔血壓的作用及可能的機(jī)制。 3試設(shè)計(jì)一動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，證明Diazepam的預(yù)防性抗驚厥作用。 4減壓反射的傳出神經(jīng)及其效應(yīng)分析。 5骨骼肌不定期測(cè)定。 6神經(jīng)干動(dòng)作電位的產(chǎn)生與Na+的關(guān)系。 7迷走神經(jīng)對(duì)膽囊收縮的作用。 8某一未知藥物對(duì)動(dòng)物呼吸的影響,第一節(jié) 安全實(shí)驗(yàn) 一、凝血時(shí)的測(cè)定方法 血液自體內(nèi)流出體外為溶

45、膠樣，在體外變?yōu)槟z樣，謂之血凝；由溶膠樣變?yōu)槟z樣所需的時(shí)間，稱為凝血時(shí)。測(cè)定凝血時(shí)的方法有： (一)玻璃片方法 取兔作受試對(duì)象。在兔耳中央動(dòng)脈處剃去被毛、消毒。用手術(shù)刀片把動(dòng)脈切開一個(gè)小口，使其自然流出血液，開始流出的血，用棉球擦去，接著從血管流出的血，取下后分別滴在清潔的載玻片上。血滴直徑應(yīng)在5lOmm，血液滴在玻璃片上就開始記時(shí)，每隔30秒就用干燥的針頭挑動(dòng)血滴一次，直至針頭能挑起纖維蛋白絲為止。發(fā)現(xiàn)有纖維蛋白絲，就立即停表。從開始到停表，所經(jīng)過(guò)的時(shí)間就是凝血時(shí)。此法可作同體對(duì)照。給藥前和給藥后，用同樣的方法采血，同樣方法測(cè)定血凝時(shí)間。這樣，就可以測(cè)出被測(cè)的這種藥物是否對(duì)血液凝固有所影

46、響。此法不足之處為每挑動(dòng)一次，就促使血液凝固加速一些，從而測(cè)出的凝血時(shí)準(zhǔn)確性有誤差。此法只可作篩選止血藥物的初步方法,第六章 安全實(shí)驗(yàn)和毒性實(shí)驗(yàn),二)試管法 用內(nèi)徑8mm的試管一支，在兔心臟取血2ml立即拿下針頭，針管靠近試管壁，緩緩地把血傾人試管lml，立即記時(shí)。然后把這支試管放入水溫37的水浴槽。約經(jīng)過(guò)約3分鐘之后，每隔30秒將試管傾斜一次，觀察血液流動(dòng)情況，直至出現(xiàn)血凝為止，出現(xiàn)后，立即記下凝血的時(shí)間。以血液注入試管開始，至凝血出現(xiàn)為止。這段時(shí)間就是凝血時(shí)。在此之后，用同樣方法再作第二管。以第二管的凝血時(shí)間為凝血時(shí)。 用此方法時(shí)，一定要注意載玻片、試管、針頭、針管等都要清潔干凈、干燥。傾

47、斜試管要緩慢，傾斜度不要過(guò)大,無(wú)論從兔耳中央動(dòng)脈、耳緣靜脈，還是從兔心臟取血，動(dòng)作一定要快，不要使血液凝結(jié)在注射器內(nèi)。 室溫對(duì)凝血有影響。測(cè)試血凝的室溫當(dāng)在15，水浴槽中的水溫一定要保持37。溫度過(guò)高或過(guò)低，都會(huì)影響血液凝固時(shí)間。 此法可以進(jìn)行同樣對(duì)照，即用同一動(dòng)物給藥之前測(cè)一次凝血時(shí)，然后給藥。通常在給藥后一小時(shí)再次測(cè)試凝血時(shí)。兩次相對(duì)照，可以測(cè)定該藥是否對(duì)血凝過(guò)程有影響。 取血用內(nèi)徑為1mm的毛細(xì)玻璃管，將此管直接插人眼后靜脈叢。方法是從眼角球后穿刺。毛細(xì)玻璃管內(nèi)血柱升至5cm即可。然后，每隔30秒，折斷一段毛細(xì)玻璃管，觀察是否出現(xiàn)血凝。這樣一直持續(xù)到出現(xiàn)血凝絲的時(shí)間為止。從毛細(xì)玻璃管內(nèi)血

48、柱達(dá)到5em之際開始到出現(xiàn)血凝絲為止，這段時(shí)間即為凝血時(shí),四)血漿復(fù)鈣凝血時(shí)間測(cè)定方法 在用脫鈣劑抗凝的血液中，再加入鈣離子，使其重新恢復(fù)凝血作用，此時(shí)的凝血時(shí)間與血液中全部凝血因子都有關(guān)。藥物或其它處理因素只要對(duì)其中任一個(gè)凝血因子起作用，都會(huì)造成凝血時(shí)間的變化。這種方法是用血漿進(jìn)行的，所以可稱之為血漿凝血時(shí)間測(cè)定法。 操作的過(guò)程：以家兔為受試對(duì)象。從其頸動(dòng)脈或股動(dòng)脈，從靜脈或直接從心臟取血均可。取血量45ml將其放人裝有濃度為38的枸櫞酸鈉浴液05ml的離心管中，以防凝血。與此同時(shí)，取另一支離心管，放人同等數(shù)量的血加入05ml生理鹽水。將此兩個(gè)離心管混勻之后，放人離心機(jī)內(nèi)的對(duì)稱位置上，開動(dòng)離

49、心機(jī)，以1000r分的速度離心10分鐘。停機(jī)取出。取兩支直徑為8mm的試管，其第一支管內(nèi)放人lml的血漿，第二支管則放入同第一支離心管等重的蒸餾水。兩支試管各加入0025mol1CaCl2然后把它們同時(shí)放入水溫37的水溶槽中，立即計(jì)時(shí)，到纖維蛋白形成，這段時(shí)間就兩支試管作同樣試驗(yàn)，以便對(duì)照比較不同情況下溶液的鈣凝血時(shí)間的差異,二、出血時(shí)的測(cè)定方法 穿破實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毛細(xì)血管，然后觀察，自開始出血，到自然止血，這一段時(shí)間為出血時(shí)間。具體的操作方法是：取1822g體重的小白鼠，雌雄皆可。將其固定后，把尾部剪去一段，其截面直徑大約為3mm處為宜。自尾端斷面出血開始記時(shí)，血止住后停止記時(shí)。這段時(shí)間為出血時(shí)

50、。出血時(shí)與毛細(xì)血管收縮功能、組織因子血小板功能、鈣離子等因素有關(guān),三、創(chuàng)面止血方法 (一)動(dòng)物動(dòng)脈切口止血實(shí)驗(yàn) 選用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可以是狗、貓、兔、豚鼠、大鼠。甚至可選用豬、牛、羊等大動(dòng)物。 具體的操作方法是：動(dòng)物麻醉后，將股動(dòng)脈剝離出45em。用動(dòng)脈夾將這段動(dòng)脈兩端夾住，阻斷血流。取手術(shù)刀或眼科剪刀將暴露出的股動(dòng)脈在兩動(dòng)脈夾之間切或剪一小口，切口大小為動(dòng)脈管的13。切開后，放開兩端動(dòng)脈夾，擦去噴出的血液，馬上敷止血?jiǎng)Ｔ诜笏幍膭?chuàng)口壓上500g的砝碼，壓1分鐘，觀察止血效果。觀察3分鐘，如果仍然出血，可撒止血藥粉(藥膜)繼續(xù)加壓。每隔30秒觀察一次。如果超過(guò)5分鐘，出血仍不止，則可以認(rèn)為所測(cè)的止血

51、劑“未能止血”。 如果實(shí)驗(yàn)用狗，其動(dòng)脈加壓可為500g砝碼，可加壓35分鐘。給家兔加壓3分鐘后血仍未止，即可認(rèn)為此藥“未能止血,二)犬或兔的肝、脾等器官止血實(shí)驗(yàn) 常規(guī)消毒后，切開腹腔，暴露出肝臟或脾臟。用紗布將其牢牢固定，以防臟器回縮，但固定時(shí)亦不宜用力過(guò)大、固定過(guò)緊會(huì)影響動(dòng)物的血液循環(huán)。在紗布固定的部位，切下一小塊肝(或脾)組織，造成創(chuàng)面。如果所切是肝則應(yīng)長(zhǎng)4cra以上，寬152cm，高115cm以上，創(chuàng)口處至少應(yīng)有一個(gè)或一個(gè)以上的小動(dòng)脈噴射狀或噴泉樣出血。如果是脾臟創(chuàng)面應(yīng)長(zhǎng)3cm以上，寬、高各lcm以上，創(chuàng)面應(yīng)有血液涌出，并且伴有一個(gè)以上的小動(dòng)脈噴血或噴泉樣出血。此時(shí)應(yīng)立即撒上止血藥粉或藥

52、膜，敷蓋上紗布，稍加壓力或不加壓。除此以外未用其它方法止血的條件下，肝(或脾)的創(chuàng)面短時(shí)間內(nèi)止血，而且經(jīng)過(guò)多次反復(fù)實(shí)驗(yàn)，80以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是能夠止血，那么這種藥物被證實(shí)為有止血效果,四、兔眼結(jié)膜微循環(huán)的觀察 取家兔一只，雌雄不限，體重應(yīng)為23kg。麻醉后倒臥固定。用開眼器將左眼瞼分開，在落射光源照射下用6X8倍顯微鏡觀察。 觀察的指標(biāo)是： 正常眼球結(jié)膜微動(dòng)脈交叉成網(wǎng)，與靜脈基本平行，但血流方向相反。微動(dòng)脈血流快，微靜脈血流慢。前者走行直，后者呈波浪式。在病理情況下，血管明顯扭曲，甚至有打結(jié)現(xiàn)象。而微動(dòng)脈彎曲呈直角，或者為亂麻式。 觀察動(dòng)、靜脈收縮與擴(kuò)張的變化情況： 正常情況下動(dòng)、靜脈口徑的比例

53、為1：2。高血壓、動(dòng)脈硬化等疾病使微動(dòng)脈的口徑變小。長(zhǎng)期高血糖和紅斑狼瘡等疾病使血管明顯擴(kuò)張。 正常情況下，微血管光滑，口徑由粗變細(xì)。病態(tài)時(shí)，血管有瘤狀膨大處，局部微血管可能也出現(xiàn)棱形或三角形。 正常情況下血管清晰，病理情況下有滲血或出血現(xiàn)象。 正常血流多見為粒線流態(tài)。如果出現(xiàn)血球聚集現(xiàn)象，則為病態(tài)。若出現(xiàn)在微靜脈和毛細(xì)血管，則說(shuō)明是局部病變；若出現(xiàn)在微動(dòng)脈，則說(shuō)明病變已擴(kuò)及全身,五、家兔腸系膜微循環(huán)的觀察 取家兔一只，雌雄不限，體重為23kg。常規(guī)消毒后，局麻或全麻，從腹部正中切開，輕輕將游離腸袢拉出體外，把腸系膜放人灌流盒內(nèi)，置于顯微鏡載物臺(tái)上，用6X 8或10X40倍顯微鏡進(jìn)行觀察。操作

54、時(shí)手的動(dòng)作要輕，以免拉破膜，造成出血或者刺激過(guò)大，產(chǎn)生反射性血壓下降。 觀察的指標(biāo)是：腸系膜的微動(dòng)脈與微靜脈伴行，交叉成網(wǎng)狀。同時(shí)可觀察內(nèi)皮細(xì)胞是否有腫脹，損傷和脫落現(xiàn)象，是否有白細(xì)胞粘附、血小板粘附等現(xiàn)象。 操作過(guò)程中灌流液一定要使用生理鹽水或復(fù)方生理鹽水。 灌流液的配方是：(配制1000ml溶液) NaCl902g、KCl42g、CaCl2024g、葡萄糖粉090g、明膠10g、加水至1000ml，然后用05mol1的NaHC03 PH至735745，滲透壓295305 mEgl。如有條件，灌流液中應(yīng)與6502 6C02及N2平衡,六、大鼠軟腦膜微循環(huán)的觀察 大鼠1只，體重為220320g

55、，麻醉后將其固定在手術(shù)臺(tái)上。切開頭皮，暴露頂骨。先在小腦延髓池用4號(hào)針穿刺，抽出02ml腦脊液、降低腦壓。然后在左頂骨中間，用顱骨鉆開窗，形成05em直徑的圓形骨孔，用骨膠止血，或用溫鹽水棉球壓迫止血。剪去硬腦膜暴露出軟腦膜，用37的人工腦脊液作間斷灌注，以防干燥。固定大鼠頭部，在落射光源下用6X 8倍顯微鏡觀察。 觀察指標(biāo)為： 腦膜微動(dòng)脈呈鮮紅色，微靜脈為暗紫色。 微動(dòng)脈互相貫通。在微動(dòng)脈中常有血液倒流現(xiàn)象。微動(dòng)脈與相應(yīng)的微靜脈不平行。微動(dòng)脈管較細(xì)。位置較淺表，分支較少。不曾發(fā)現(xiàn)動(dòng)、靜脈有吻合支存在,人工腦脊液配方為：Na+150mmol、K+3mmol、Ca2+25mmol、Mg2+12m

56、mol、Cl132mmol、葡萄糖37mmol、尿素6mmol、HC0325mmol、加水至1000ml。如有條件，須與6502、6C02和N2平衡，并保持溫度為37。 七、小鼠耐低壓缺氧實(shí)驗(yàn) 低壓缺氧裝置由密閉玻璃容器、壓力表、平衡桶和抽氣泵等4部分組成。取用小鼠10只將其分為給藥組和對(duì)照組，各5只，作好標(biāo)志。然后放入密閉玻璃容器內(nèi)。以抽氣泵抽平衡桶內(nèi)的空氣，直至一定的負(fù)壓。通常調(diào)節(jié)壓力表(真空表)，使表針指向負(fù)7049kPa(53-0mmHg)后，停止抽氣。在此之后，打開活塞，開動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，記錄下小鼠死亡時(shí)間；或者觀察到小鼠死亡到半數(shù)(46只)時(shí)，即打開容器，記錄下兩組小鼠的存活數(shù)。這種實(shí)

57、驗(yàn)重復(fù)數(shù)次，將兩組總存活率進(jìn)行x2測(cè)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意以下幾點(diǎn)： 第一、小鼠的體重相差不得超過(guò)2g最好用同一性別的。如果雌雄各半，兩組的搭配應(yīng)該均勻。 第二、如實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖峭怀鲂募∽饔?，可以同常壓缺氧法，注射異丙腎上腺素。為了不使小鼠突然進(jìn)入低壓缺氧狀態(tài)，可在抽氣時(shí)同時(shí)開B、C兩個(gè)活塞，通過(guò)C活塞控制負(fù)壓，使之逐漸增高。這種辦法稱逐步減壓法，亦稱登高實(shí)驗(yàn)法。 例如，每隔10分鐘左右，降氣壓133kPa(100mmHg)，使小鼠因逐漸缺氧而死亡。至死亡一半時(shí)，打開瓶塞，計(jì)算存活率。評(píng)價(jià)基本同常測(cè)氧法,八、小鼠耐缺氧實(shí)驗(yàn) 將體重相等或體重相差不超過(guò)2g的小鼠隨機(jī)分組，分別放入容積相同(150250g)

58、的密閉廣口瓶?jī)?nèi)。瓶?jī)?nèi)裝有同等數(shù)量(5l0g)鈉石灰，以吸收水份和二氧化碳。瓶口涂以凡士林，放入小鼠后將瓶密閉。以秒表記錄呼吸停止時(shí)間。每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)設(shè)空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。每瓶小鼠不應(yīng)少于10只。計(jì)算死亡時(shí)間平均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差。作死亡測(cè)驗(yàn)，比較組間顯著性,操作中應(yīng)注意： 第一、要求選擇體重相近的小鼠，體重相差不得超過(guò)2go要求性別相同；如雌雄各半，則應(yīng)搭配均勻。 第二、要求各瓶容積相等，瓶口嚴(yán)密。 第三、鈉石灰應(yīng)是新鮮的，顏色改變后，應(yīng)立即更換。 第四、由于本方法特異性不高，影響因素較多，所以在作本實(shí)驗(yàn)時(shí)，可同時(shí)用補(bǔ)充方法以突出觀察心臟作用。在實(shí)驗(yàn)前15分鐘給小鼠皮下注射520mgkg的異丙腎上腺素，增

59、加其心肌耗氧，從而增加心肌缺氧在死亡原因中的比重。亦可在密閉橡皮塞上安裝缺氧電極，使之與瓶?jī)?nèi)空氣相接觸，用測(cè)氧儀測(cè)定不同時(shí)間氧消耗速度和死亡時(shí)氧余存量()。以存活時(shí)間、氧耗數(shù)率、死亡時(shí)氧余存量,九、熱原實(shí)驗(yàn) 這三者綜合判斷效果。 熱原又名致熱原，是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的內(nèi)毒素。藥物，尤其是注射劑若含有熱原就會(huì)使人發(fā)燒。目前各國(guó)檢測(cè)熱原的方法主要是“家兔發(fā)熱實(shí)驗(yàn)法”，通常用于藥品檢定實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)已人藥典法定的熱原檢查法。 (一)器具的準(zhǔn)備 ， 試驗(yàn)用的注射器、針頭及一切與供試晶溶液接觸的器皿，均應(yīng)置于烘箱內(nèi)，以250C的高溫加熱30分鐘，或以180C高溫加熱2小時(shí)，待其冷卻后使用。亦可使其它適當(dāng)方法，

60、除去所用器物的熱原,二)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的要求和準(zhǔn)備 選擇體重在173Okg的健康實(shí)驗(yàn)家兔，雌雄均可(如是雌兔，應(yīng)是無(wú)孕者)。測(cè)溫前7天的一切條件(飲食、環(huán)境等)應(yīng)保持一致，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的精神、食欲、排便、排尿等均正常。未經(jīng)使用熱原檢查的家兔，應(yīng)在試驗(yàn)前7日內(nèi)預(yù)測(cè)體溫，進(jìn)行挑選。挑選試驗(yàn)的條件，與檢查供試品時(shí)相同，但不注射藥液。每隔1小時(shí)測(cè)量體溫1次，共測(cè)4次。如果4次測(cè)溫均在3803960范圍之內(nèi)，而且最高和最低體溫相差不超過(guò)04家兔方可供實(shí)驗(yàn)使用。用于熱原檢查之后的家兔，如供試品判定為符合規(guī)定，至少應(yīng)讓其休息2日，方可第二次選來(lái)做檢查使用。其中升溫達(dá)06的家兔，如需再用時(shí)，應(yīng)按從未經(jīng)過(guò)測(cè)溫的家兔來(lái)挑