人體組織的檢驗醫(yī)學醫(yī)藥

1、第十八章 人體組織檢驗 物證教研室 徐冬冬,人體組織是重要的法醫(yī)物證 重建案件現(xiàn)場 個人識別 親權(quán)鑒定 軟組織、硬組織和角化組織,毛發(fā)檢驗,皮膚的特殊附屬器，由皮膚毛囊細胞產(chǎn)生的角質(zhì)體。 可見于案發(fā)現(xiàn)場、兇器、作案工具、肇事車輛、受害人衣服、體表或手中,毛發(fā)檢材的發(fā)現(xiàn)與提取 毛發(fā)的發(fā)現(xiàn)：重點部位-受害人身邊。 毛發(fā)的提取：鑷子夾取，放入物證帶，做好標記。 注意：隱蔽部位的毛發(fā)；勘察者脫落的毛發(fā)；設置對照,1.毛發(fā)的結(jié)構(gòu),一、毛發(fā)的特點,注意事項,毛小皮： 不同種屬花紋特征不同人毛呈細小波浪狀。 毛皮質(zhì)： 不同種屬色素顆粒分布不同，是鑒別人毛與動物毛的重要依據(jù)人毛色素多集中于皮質(zhì)周圍。 毛髓質(zhì)：

2、 細胞排列具有特征性，可以此區(qū)別動物毛,毛發(fā)的形態(tài)：直發(fā)、波狀發(fā)、卷發(fā),與種族、遺傳、生長部位有關(guān),毛發(fā)的顏色： 白色角質(zhì)體 黑色角質(zhì)體 白、黑、黃、褐色 紅色角質(zhì)體 發(fā)色是區(qū)別種族的重要物證之一,隨年齡增加，黑色角質(zhì)體減少，頭發(fā)漸變灰、白,北極狼的皮毛顏色隨季節(jié)不同,毛發(fā)的分布及分類： 分布： 除唇、手掌、手指、足趾末節(jié)等外均長有毛發(fā) 分類： 硬毛：較粗硬，如頭發(fā)、眉毛、睫毛、腋毛、陰毛、胡須等 毳毛：細軟、色淡、毛髓質(zhì)缺如,法醫(yī)學實踐中，以頭發(fā)和陰毛最為常見,毛發(fā)的生長周期,受部位、性別、年齡、季節(jié)和健康狀況等因素影響,每日脫落約30120根,毛發(fā)的理化性質(zhì)： 可溶于強堿性溶液。 人體上皮

3、組織的一部分，含有蛋白質(zhì)、脂肪、水、微量元素（含量有個體差異）等各種成分。 毛發(fā)的功能： 保護皮膚和保持體溫的作用,目的與要求： 1是否為毛發(fā) 2是人毛或動物的毛發(fā) 3人毛發(fā)的部位，損傷檢驗 4毛發(fā)的個人識別,二、毛發(fā)的實驗室檢查,肉眼觀察：毛尖、毛干和毛根的結(jié)構(gòu)特征 顯微鏡觀察：毛小皮、皮質(zhì)、髓質(zhì)三層結(jié)構(gòu) 燃燒法：毛法燃燒后發(fā)出特殊的臭味,1、是否毛發(fā),2、人毛與動物毛的鑒別,人頭發(fā)的毛干、毛小皮花紋,狗毛的毛干、毛小皮花紋,兔毛的毛干、毛小皮花紋,主要采取對比的方法，根據(jù)毛發(fā)的長短、粗細、色澤、橫斷面的形狀、髓質(zhì)的位置以及表面附著物等特點，綜合分析,3、人毛部位的確定,頭發(fā) 長度：人體各部

4、位中最長的，長于10cm大都是頭發(fā) 直徑：屬中等（ 75100m ） 毛尖：短發(fā)多呈剪斷狀，長發(fā)多呈破裂狀或有小分支 橫斷面：多為圓形或橢圓形 表面常有人工處理痕跡,陰毛 長度：一般長約3-6cm，最長不超過8cm 形狀：多呈S形彎曲，毛干上常有凹痕 毛小皮：極不規(guī)則波紋狀，常見樹枝狀交叉。 髓質(zhì)：常連續(xù)，比頭發(fā)略寬 橫斷面：橢圓形與腎形 可附著分泌物，有時有精子、月經(jīng)血、內(nèi)衣纖維,人陰毛毛干、毛小皮花紋,腋毛 長度、卷曲度與陰毛類似，常呈淡褐色 毛干上也有凹痕，但較少 直徑較頭發(fā)細 橫斷面多為橢圓形 表面常附著腋窩大汗腺的分泌物，呈粘膠狀,胡須 長短不定，多為直發(fā)，波狀發(fā)少見 較頭發(fā)略粗，人

5、體最粗的毛 斷面多為三角形或多角形，少數(shù)為橢圓形 其它部位毛 眉毛、睫毛、鼻毛一般粗短，長度1cm左右,1）自然脫落 毛根完全角化，干燥萎縮，無根鞘附著 5%10%的亞硝基鐵氰化鈉溶液染色，無顏色反應 （2）暴力拔出的毛發(fā) 毛囊組織附著，毛球濕潤且下端呈開放狀或鉤狀彎曲 10亞硝基鐵氰化鈉浸泡染色呈鮮紅色,4、毛發(fā)的脫落和損傷,左為自然脫落之毛囊，右為暴力拔下之毛囊,3）拉斷的毛發(fā) 離斷的毛發(fā)斷端不規(guī)則，呈縱形分裂狀，有時甚至呈階梯狀，毛小皮損傷嚴重,4）熱作用損傷 毛發(fā)對溫熱作用有一定抵抗力，通常超過150，出現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變。燙發(fā)對毛小皮有明顯的損傷,5）鈍器損傷 完全斷裂：斷端膨大，不整

6、齊，有時呈扇形或階梯狀。 未斷裂：作用部位呈仿錘形膨大，皮質(zhì)中出現(xiàn)長形或橫形裂紋，皮質(zhì)纖維分離，毛小皮剝脫,左為完全斷裂之毛發(fā)斷端，右為鈍器打擊致毛干局部變形,6）銳器損傷 鋒利銳器：斷端平滑整齊，毛干不碎裂，皮質(zhì)纖維不分裂。 較鈍的銳器：斷端呈鋸齒狀或階梯狀,剪刀剪斷之毛發(fā)斷端,1）形態(tài)學觀察 毛發(fā)的形態(tài)和附著物檢查 形態(tài)：色澤、長度、是否完整的毛發(fā)。 附著物：附著物的成分可獲得有關(guān)職業(yè)、毛發(fā)來源等信息,5、毛發(fā)的個人識別,毛發(fā)結(jié)構(gòu)觀察 外形：毛發(fā)外形，有無毛囊，斷面形狀，毛尖是否分叉等。 色素：色素顆粒的大小，數(shù)量，分布，有無染發(fā)的色素。 髓質(zhì)：粗細，是否連續(xù)，是否偏離中軸。 毛小皮：紋理

7、特征,2）毛發(fā)的ABO血型測定 一般用解離試驗，方法同血痕檢驗 注意事項： 毛發(fā)必須壓扁，充分暴露皮質(zhì)和髓質(zhì) 所用血清要特異性好，效價高（128），吸收時間要長 掌握好洗滌次數(shù) 設置對照,3）毛發(fā)的酶型檢測（新鮮帶毛囊） （4）毛發(fā)的DNA分析 帶毛囊的毛發(fā) Chelex-100法是提取毛囊中DNA的首選方法，可分析 STR基因座及性別鑒定（牙釉基因） 毛干的mtDNA分析 可檢測毛干mtDNA-D環(huán)區(qū)序列多態(tài)性進行個人識別,堿性裂解法 提取毛干線 粒體DNA,5）毛發(fā)中微量元素分析 包括定性和定量檢驗 不同人種、職業(yè)、年齡、性別和不同地區(qū)的居民、個體之間有一定差異。 常用方法：原子發(fā)射光譜，

8、原子吸收分光光譜，中子活化及電子探針技術(shù)。 注意：同一個體不同部位和不同生長期的頭發(fā)微量元素含量也有一定差異,6）毛發(fā)年齡估計與推斷,一般說來，不同年齡階段的人，其毛發(fā)的生長、形態(tài)、色澤和結(jié)構(gòu)都有各自的特征。 胎兒和嬰兒毛發(fā)細軟，多無髓質(zhì)，色素較少。 青壯年色素顆粒多，毛發(fā)粗且黑，有彈性。 老年人的毛發(fā)，由于色素顆粒少，空氣含量增加，因此多出現(xiàn)白發(fā),在交通肇事、碎尸、空難、爆炸等案件中，組織塊是最常見的法醫(yī)生物檢材。 可通過形態(tài)學、免疫學、免疫組織化學以及分子生物學方法確定組織塊的種類、種屬、性別以及身份來源,三、軟組織檢驗,1.種類鑒別（各種組織有其固有的形態(tài)結(jié)構(gòu)） 肉眼觀察：適合于組織塊比

9、較大的檢材的識別 組織切片：顯微鏡下觀察，干燥組織可用5%醋酸浸軟組織 皮 膚-復層鱗狀上皮細胞結(jié)構(gòu)+真皮層的毛囊和皮脂腺 腦組織-神經(jīng)細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞 肝 臟-肝細胞及膽管構(gòu)成肝小葉結(jié)構(gòu) 腎 臟-腎小球、腎小管 消化道-粘膜層、粘膜下層、肌層、外膜,2.種屬鑒定 免疫學方法：抗人血清、膠體金等 分子生物學方法： Alu序列 28srRNA 細胞色素b基因 SON基因,3.組織塊的個人識別,血型：ABO系統(tǒng)等 血清型：維生素結(jié)合蛋白（DPB）、Km、Gm等 酶型：PGM1, 巖藻糖苷酶等 DNA分析：VNTR, STR, mtDNA等 性別鑒定：肉眼觀察、 Amelogenin基因,測定組織

10、塊中的遺傳標記,1)ABO血型測定 ABO血型是法醫(yī)學物證檢驗個人識別的傳統(tǒng)檢測項目，迄今廣泛應用于基層法醫(yī)實踐，意義主要在于否定。 方法：吸收試驗、解離試驗、紅細胞粘連試驗、免疫組化法和ABO基因分型等 (2) 酶型和血清型測定,3)DNA分析 檢材：新鮮的組織塊，腐敗組織、蠟塊組織切片 1）組織的DNA提取 新鮮或冷凍組織：酚氯仿抽提 腐敗組織：酚氯仿抽提，再用Chelex-100提取 組織切片或蠟塊：脫蠟后酚氯仿抽提 甲醛固定的組織：消化時增加蛋白酶K的用量及消化時間，酚氯仿抽提后Chelex-100提取 2）DNA分析：STR、mtDNA等,4) 性別鑒定,直接判定性別 組織碎塊： A

11、melogenin基因檢測,注意事項： 主要目的是個人識別 盡快送檢 不能及時送檢時應低溫保存，或充分干燥后保存，不宜用甲醛固定 合理選材 考慮癌變的組織；腐敗組織可能影響結(jié)果;各種因素（變性或分解）的對結(jié)果影響,骨骼和牙齒是人體堅硬的組織，高度鈣化，可抗腐敗和長期保存，是個人識別的重要檢材。 骨骼和牙齒形態(tài)學分析屬法醫(yī)人類學 DNA分析關(guān)鍵提取到DNA DNA來源 骨骼DNA：骨細胞、成骨細胞和破骨細胞； 牙齒 DNA：牙髓腔中的細胞和牙骨質(zhì)成骨細胞,骨及牙齒檢驗,注意事項,1.低拷貝DNA的影響 2.環(huán)境因素對DNA的影響 3.設置對照 4.結(jié)合STR和mtDNA分析,指(趾)甲檢驗,AB

12、O血型 特點：ABH血型物質(zhì)較多，不受分泌型的影響。 方法：吸收試驗 DNA檢測 有機法結(jié)合Chelex-100法；mtDNA、STR分析 指甲油與指甲垢的鑒定,謝 謝,人體組織檢驗,1. 毛發(fā)與其他纖維的鑒別，人毛與動物毛的鑒別，人毛部位的確定，毛發(fā)的脫落與損傷，毛發(fā)個人識別（形態(tài)學觀察、ABO血型測定、DNA 分析、微量元素分析）的基本方法。 2. 軟組織的確證、種屬鑒定、性別鑒定、個人識別的方法,混合斑檢驗,1. 陰道液斑確證（細胞學檢查、陰道肽酶測定），精液成分個人識別（ABO血型測定、DNA分析）、陰道液成分個人識別的原理、方法、結(jié)果評價和輪奸案混合斑檢材的鑒定。 2.多個體血液混合斑的ABO血型測定和DNA多態(tài)性檢驗的程序、方法,唾液及唾液斑檢驗,1.唾液（斑）的提取方法。 2.確證唾液（斑）（淀粉-碘反應、口腔粘膜脫落上皮細胞檢查）的原理及方法。 3.唾液（斑）個人識別（ABO血型測定）的原理及方法,精液斑檢驗,1.精斑的檢驗程序。 2.精斑預試驗（酸性磷酸酶