中德美聯(lián)3500簡易操作手冊(cè)

1、 中德美聯(lián)3500/3500XL簡易操作手冊(cè)1. 空間定位和光譜校正1.1 設(shè)置Dye Set 進(jìn)入library界面，選擇Dye Sets菜單，點(diǎn)擊Create，在Dye Set Name中輸入“AGCU_E5”作為我公司Dye Set名稱，從Chemistry下拉菜單中選擇“Matrix Standard”，從Dye Set Template下拉菜單中選擇“E5 Template”，設(shè)置完成后點(diǎn)擊Save保存設(shè)置。1.2 空間定位 進(jìn)入3500 Data Collection Software主界面，選擇Maintenance菜單，在Maintenance界面中點(diǎn)擊Calibrate下拉菜

2、單中的Spatial按鈕，選擇合適的空間定位參數(shù)即可開始空間定位。3500系列遺傳分析儀空間定位與3100、3130系列類似。1.2 光譜校正 a、光譜校正前先更換水和陰陽極Buffer，按10ul甲酰胺：0.5ul 5 Dye Matrix Standard的比例配制甲酰胺和光譜校正標(biāo)準(zhǔn)品混合物，輕輕震蕩混勻后短暫離心。準(zhǔn)備一塊新的96孔反應(yīng)板，將配制好的混合物均勻的分裝在前三列各孔中。3500/3500xL進(jìn)行光譜校正時(shí)儀器默認(rèn)第一個(gè)Run，即前三列中加入了光譜校正混合物。95加熱3 min ，立即冰浴 3 min，變性完成后裝載96孔板并置于儀器托盤中。b、點(diǎn)擊Calibrate下拉菜單

3、中的Spectral按鈕，按照?qǐng)D示選擇各種參數(shù)點(diǎn)擊Start Run即可進(jìn)行光譜校正。注意在Dye Set中應(yīng)選則在1.1中設(shè)置好的與AGCU試劑盒相匹配的Dye Ste。如果光譜校正未達(dá)到儀器默認(rèn)質(zhì)量要求，儀器會(huì)自動(dòng)重復(fù)跑樣三次，并自動(dòng)選擇各次跑樣中質(zhì)量最好的通道作為此次光譜校正的最后結(jié)果。光譜校正時(shí)應(yīng)觀察實(shí)時(shí)原始數(shù)據(jù)，以便及時(shí)做出相應(yīng)調(diào)整，確保最終結(jié)果。C、3500系列遺傳分析儀與3100、3130系列遺傳分析儀最大的區(qū)別之一就是光譜校正。它不需要編寫protocol、run module等軟件欄目及其相應(yīng)參數(shù)設(shè)置，直接按照儀器默認(rèn)的參數(shù)進(jìn)行即可，因此操作更為簡單、快捷。2. 軟件參數(shù)設(shè)置

4、2.1 創(chuàng)建Instrument Protocol 進(jìn)入library界面，選擇Instrument Protocols菜單，點(diǎn)擊Create。按下圖所示選擇或設(shè)置各個(gè)參數(shù)，設(shè)置完成后點(diǎn)擊Save保存。注意將Protocol Name命名為“AGCU_E5_STR”，進(jìn)樣電壓設(shè)置為3kv，進(jìn)樣時(shí)間可設(shè)置為610 sec，Dye Set選擇1.1步驟中已設(shè)置好的“AGCU_E5”，其他參數(shù)設(shè)置請(qǐng)參照下圖。2.2 創(chuàng)建Size Standard 進(jìn)入library界面，選擇Size Standards菜單，點(diǎn)擊Create。在Size Standard中輸入“AGCU_SIZ500”，Dye Co

5、lor下拉菜單中選擇“Orange”，在左側(cè)對(duì)話框中依次輸入75、100、139、150、160、200、300、340、350、400、450、490、500，每次輸入結(jié)束后點(diǎn)擊中間“Add Size”菜單即可將所輸數(shù)字加入右側(cè)對(duì)話框中。待全部輸入結(jié)束后點(diǎn)擊Save保存。2.3 創(chuàng)建QC Protocol 進(jìn)入library界面，選擇QC Protocols菜單，點(diǎn)擊Create。在Protocol Name中輸入“AGCU_QC”，Size Standard下拉菜單中選擇在2.2中已創(chuàng)建的“AGCU_SIZ500”，將Use Baselining改為38。其他參數(shù)均按下圖所示進(jìn)行設(shè)置，設(shè)置

6、完成后點(diǎn)擊Save保存。2.4 創(chuàng)建Assay 進(jìn)入library界面，選擇Assays菜單，點(diǎn)擊Create。在Assay Name中輸入“AGCU_STR”，Application Type下拉菜單中選擇“HID”，Instrument Protocol下拉菜單中選擇2.1中創(chuàng)建的“AGCU_E5_STR”，QC Protocol下拉菜單中選擇2.3中創(chuàng)建的“AGCU_QC”。待所有選項(xiàng)選擇完成后點(diǎn)擊Save保存。若第一步是從創(chuàng)建Assay開始，也可在該界面下點(diǎn)擊“Create New”菜單，按照上文所述要求逐一創(chuàng)建新的Instrument Protocol、QC Protocol并將其保

7、存至Library中，其效果與前面創(chuàng)建現(xiàn)在調(diào)用一樣。2.5 創(chuàng)建 Convention 進(jìn)入library界面，選擇 Conventions菜單，點(diǎn)擊Create。在Name中輸入“AGCU_Samplename”，其他參數(shù)按下圖進(jìn)行設(shè)置，也可根據(jù)個(gè)人喜好進(jìn)行更改。注意在Select 中選擇Custom ，可以先在硬盤新建文件夾，此處點(diǎn)擊Browse進(jìn)行選擇。待所有設(shè)置完成后點(diǎn)擊Save保存。2.6 創(chuàng)建Result Group 進(jìn)入library界面，選擇Result Groups菜單，點(diǎn)擊Create。在Name中輸入“AGCU_Resultgroup” ，其他參數(shù)按下圖進(jìn)行設(shè)置，也可根據(jù)

8、個(gè)人喜好進(jìn)行更改。注意在Select 應(yīng)與2.5中選擇Custom 位置相同。待所有設(shè)置完成后點(diǎn)擊Save保存。2.7 創(chuàng)建Plate Template a、進(jìn)入library界面，選擇Assign Plate Contents菜單，在New Plate下拉菜單中選擇Create Plate from Template，在該界面中選擇軟件自帶的ABI樣品表模板“5dye_36_POP4”雙擊打開。b、將ABI樣品表模板“5dye_36_POP4”中Assays、 Conventions和Results Groups欄目下的各可選項(xiàng)逐一刪去。c、在Assays、 Conventions和Resu

9、lts Groups各欄目下點(diǎn)擊Add from library，分別向各欄目中加入AGCU_STR、AGCU_Samplename和AGCU_Resultgroup。d、各欄目選項(xiàng)加入完成后點(diǎn)擊Save Plate菜單，選擇Save as后輸入“AGCU_Platetemplate”，點(diǎn)擊ok保存即可。3產(chǎn)物檢測(cè)3.1 打開軟件進(jìn)入主界面，見下圖3.2 點(diǎn)擊主界面左上方導(dǎo)航鍵（藍(lán)色箭頭），打開Define Plate Properties界面，在New Plate按鈕中選擇Create Plate from Template， 或者直接點(diǎn)擊快捷鍵Create Plate from Template。3.3 從已有的樣品表模板中選擇“AGCU_Platetemplate”打開。輸入本次檢測(cè)樣品表名稱，如“20110328_AGCUTEST”，輸入完成后點(diǎn)擊Assign Plate Contents進(jìn)入下一界面。3.4 在Assign Plate Contents界面點(diǎn)擊Import在板號(hào)列表中選中相應(yīng)的板號(hào)可導(dǎo)入列表，如果不需導(dǎo)入加樣板可直接在Plate View中編寫待檢測(cè)的樣品名。3.5選中相應(yīng)的待檢測(cè)區(qū)域后（點(diǎn)擊加樣