絲裂原活化蛋白激酶

1、絲裂原活化蛋白激酶 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,絲裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinase,MAPK) Ser/Thr蛋白激酶 受細(xì)胞外刺激而激活 在所有真核細(xì)胞中高度保守 通路組成 三級(jí)激酶模式 調(diào)節(jié)多種重要的細(xì)胞生理/病理過(guò)程,本章主要內(nèi)容： MAPK 信號(hào)通路的成員 MAPK的蛋白結(jié)構(gòu) MAPK通路模式 MAPK的激活 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路間的關(guān)系,一、MAPK 信號(hào)通路的成員 MAPK是信號(hào)從細(xì)胞表面核內(nèi)的重要轉(zhuǎn)遞者。 已鑒定的 (據(jù)1999的統(tǒng)計(jì))： MAPK激酶激酶 (MKKK) 14種 MAPK激酶 (MKK) 7種 MAPK 12種,MKKK(MA

2、P Kinase Kinase Kinase) 亞族,MKK (MAP Kinase Kinase)亞族,MAPK (MAP Kinase)亞族,二、MAPK的蛋白結(jié)構(gòu) （一）MAPK的一級(jí)結(jié)構(gòu) 蘇氨酸磷酸化位點(diǎn)與其他蛋白激酶同源，酪氨酸磷酸化位點(diǎn)是MAPK獨(dú)特的。 磷酸化位點(diǎn)的三肽模體 TXY ERK和ERK5 TEY p38 TGY JNK TPY,三肽模體位于L12 各亞族L12長(zhǎng)度不同 活化唇 (activation lip) 各亞族都具有12個(gè)保守亞區(qū) 真核細(xì)胞蛋白激酶超家族區(qū)分標(biāo)志之一 家族成員之間具有較高的同源性,哺乳動(dòng)物MAPK,哺乳動(dòng)物MAPK,二）MAPK的二級(jí)結(jié)構(gòu)和超二級(jí)

3、結(jié)構(gòu) 以ERK2為例 N端域 主要由折疊和2個(gè)螺旋組成 （1109和320358位氨基酸殘基） C端域 螺旋，含磷酸化唇和MAPK插 入，催化環(huán)（Arg-147152) （110319位氨基酸殘基） 交界處的裂隙 ATP結(jié)合位點(diǎn),三）MAPK的空間結(jié)構(gòu)特征 大體結(jié)構(gòu)：非常相似 底物結(jié)合口袋的結(jié)構(gòu)特征： 無(wú)活性時(shí)被阻斷，有活性時(shí)暴露出。 ATP結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)特征： 大小、形狀、疏水性和電荷等不同 磷酸基團(tuán)結(jié)合位點(diǎn)： 4個(gè)保守位點(diǎn),三、MAPK通路模式,四、MAPK的激活 MAPK激活機(jī)制的發(fā)現(xiàn) 重要的實(shí)驗(yàn)觀察： 20世紀(jì)80年代，觀察到當(dāng)GF刺激時(shí)，Tyr被磷酸化的主要蛋白為42kDa 佛波酯醇

4、刺激時(shí)，產(chǎn)生同樣的蛋白 胰島素RTK催化Ser/Thr蛋白激酶 胰島素刺激，產(chǎn)生Thr和Tyr雙磷酸化的42kDa蛋白,MAPK的激活機(jī)制 活性部位位于兩個(gè)折疊域的界面 是通過(guò)Thr和Tyr的雙位點(diǎn)同時(shí)磷酸化而被激活 例：ERK2 Tyr-185 , Thr-183 pY185 解除L12對(duì)底物結(jié)合的阻斷 MAPK是Pro指導(dǎo)的蛋白激酶,對(duì)于ERK2來(lái)說(shuō)，其底物的一般保守性序列為 Pro-X-Ser/Thr-Pro 活化環(huán)中Tyr-185 和Thr-183的磷酸化， 引起該環(huán)重新折疊，與Arg結(jié)合位點(diǎn)相互作用 酸性氨基酸替代，不導(dǎo)致組成性活化 MAPK的點(diǎn)突變不影響其活性,五、酵母MAPK通路

5、 釀酒酵母 已鑒定出5條 單倍體的交配途徑 浸潤(rùn)性生長(zhǎng)通路 細(xì)胞壁重構(gòu)通路 雙組分滲透壓感受器通路 Sho1滲透壓感受器通路,一）酵母菌中MAPK模式的組成和作用 釀酒酵母：4種MKKK 4種MKK 6種MAPK 其中，4種參加明確的5種MAPK通路 2種 (SMK1, YKL161C)參加未知的MAPK通路 3個(gè)成員通過(guò)與支架蛋白結(jié)合而聯(lián)在一起,二）單倍體酵母與交配有關(guān)的通路 釀酒酵母的2種交配型(單倍體)： a細(xì)胞型和 細(xì)胞型 2種性信息素：a因子和 因子 7次跨膜受體：Ste3和 Ste2 異三聚體G蛋白： Gpa1 亞基 Ste4 亞基 Ste18 亞基,Ste2 receptor,釀

6、酒酵母的交配通路,ste： 不育基因 Ste5： 支架蛋白 Ste12： 轉(zhuǎn)錄因子,支架蛋白 ( Scaffold protein) 其主要功能是將其他蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，促進(jìn)它們相互作用。 將細(xì)胞信號(hào)通路中的各種信號(hào)分子結(jié)合在一起，形成復(fù)合物 起生理性隔室化的效應(yīng),從而防止該通路與其他通路發(fā)生交聯(lián) 含有許多蛋白結(jié)合域,三）浸潤(rùn)通路 缺乏氮源 形態(tài)改變 假菌絲： 缺乏氮源時(shí)，橢圓型的雙倍酵母進(jìn)行不對(duì)稱的細(xì)胞分裂以產(chǎn)生一個(gè)細(xì)而長(zhǎng)的子細(xì)胞，后者又不斷產(chǎn)生長(zhǎng)的子細(xì)胞。由于母細(xì)胞與子細(xì)胞仍然相連，因此這種單級(jí)分裂方式的不斷重復(fù)將產(chǎn)生由延長(zhǎng)的細(xì)胞組成的絲狀物,KSS1： 絲狀生長(zhǎng)所需要 (單倍體，雙倍體)

7、 注： 未被Ste7激活時(shí)，是浸潤(rùn)生長(zhǎng)的抑制物，被Ste7激活時(shí)，刺激浸潤(rùn)生長(zhǎng),FUS3和KSS1的鑒別： 刺激激活的條件不同 FUS3 信息素 KSS1 缺乏氮源 表達(dá)不同 FUS3 單倍體細(xì)胞中 KSS1 單倍體細(xì)胞和雙倍體細(xì)胞中 對(duì)浸潤(rùn)生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)作用 FUS3 抑制 KSS1 刺激,四）細(xì)胞壁重構(gòu)通路,酵母的生長(zhǎng)依賴于有效的細(xì)胞壁重構(gòu) PKC1：MKKKK MKK1和MKK2的重疊作用意義不清,五）滲透壓感受器和應(yīng)激通路 釀酒酵母的2種滲透壓感受器： “雙組分”滲透壓感受器 低滲透壓條件下激活 膜滲透壓感受器 高滲透壓條件下激活 2種滲透壓感受器對(duì)MAPK通路的調(diào)節(jié) 作用不同,1. “雙

8、組分”滲透壓感受器 “雙組分”轉(zhuǎn)導(dǎo)體系通常見(jiàn)于原核細(xì)胞 “雙組分”轉(zhuǎn)導(dǎo)體系的組成 感受器分子 胞外區(qū) + 胞質(zhì)His激酶域 + 反應(yīng)-調(diào)節(jié)分子 接受域 + DNA結(jié)合域 是一種His-Asp磷酸化體系 “雙組分”轉(zhuǎn)導(dǎo)體系在哺乳類尚未鑒定出,“雙組分”轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程 感受器蛋白活化 胞質(zhì)激酶域的His磷酸化 反應(yīng)-調(diào)節(jié)分子接受域 的Asp磷酸化 啟動(dòng)輸出功能，即轉(zhuǎn)錄激活作用,酵母 “雙組分”滲透壓感受器： 由3種蛋白組成 Sln1 + Ypd1 +Ssk1 兩個(gè)相連的“雙組分”體系 第一個(gè) Sln1(His激酶域和接受域) 第二個(gè) Ypd1 (His激酶域) + Ssk1 (接受域,在低滲透壓條件下

9、Sln1 是有活性的 Ssk1是無(wú)活性的 HOG1也無(wú)活性 在高滲透壓條件下 Sln1 是無(wú)活性的 Ssk1是有活性的 HOG1也有活性,2. Sho1依賴的滲透壓感受器 Sho1：跨膜蛋白滲透壓感受器 結(jié)構(gòu) ：4個(gè)跨膜區(qū) + C-末端胞質(zhì)區(qū) ( 含SH3域,在高滲透壓條件下 Sho1 感受高滲透 Sho1激活Ste11 Pbs2發(fā)揮支架蛋白的作用 Pbs2含有多聚脯氨酸富集區(qū),3. 裂殖酵母菌中的滲透壓感受通路和 應(yīng)激通路 環(huán)境應(yīng)激時(shí)激活2個(gè)相關(guān)的MAPK通路 WIK/WIS/SPC1通路 WIN1/WIS/SPC1通路 (在滲透壓應(yīng)激時(shí)起主要作用) 上游調(diào)節(jié)因子Mcs4是Ssk1蛋白的同源

10、物 ATF1是SPC1的主要核內(nèi)底物,SPC1只有經(jīng)磷酸化后才能入核 熱休克和氧應(yīng)激時(shí)SPC1磷酸化激活，但不需要WIS的作用。 Pyp1使SPC1脫磷酸化,六）芽孢形成通路 芽孢形成：是指將單倍體核包裝入芽孢的過(guò)程 包括減數(shù)分裂。 僅發(fā)生在雙倍體 由饑餓誘發(fā) 芽孢形成過(guò)程： 減數(shù)分裂 雙層膜的原孢子壁包裹單層核膜的4個(gè)單倍體 從原孢子壁的雙層間隙沉積孢子壁,孢子壁的組成：共4層： 第一、二層：同植物細(xì)胞壁 第三層：孢子特異性的結(jié)構(gòu) 聚乙酰氨基葡糖 + 聚氨基葡萄糖 第四層：電子密集層 雙酪氨酸包被,從以上酵母MAPK通路的研究中看到: MAPK通路是一個(gè)連續(xù)的蛋白激酶激活的途徑 MAPK的主

11、要底物為轉(zhuǎn)錄因子 MAPK通路受不同的上游因子調(diào)節(jié) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是高度特異的 某一種蛋白成員存在于數(shù)種通路時(shí),支架蛋白起著隔室化的作用,六、哺乳動(dòng)物MAPK通路 哺乳動(dòng)物MAPK通路不同于酵母: 多種MAPK通路可被一種受體型所激活 MAPK的主要底物包括轉(zhuǎn)錄因子、 胞 質(zhì)蛋白質(zhì) 、細(xì)胞骨架、蛋白激酶和磷脂酶 已鑒定出4條MAPK通路 MAPK有多種亞族和多種不同的剪接體,一）ERK通路 研究得最為透徹 ERK的MAPK有5種 (15) 它們分屬于不同的亞族 ERK1和ERK2(ERK1/2)研究得最為透徹 為細(xì)胞內(nèi)主要的MAPK ERK3存在于細(xì)胞核 ERK4通過(guò)Ras依賴性通路而被激活,1.

12、ERK1/2通路中MKKK 許多受體通過(guò)活化Ras激活ERK1/2通路 Raf: 是該通路中的重要的MKKK 亞型: 有3種 A-Raf 、 B-Raf 、 Raf1 組成: 含3個(gè)結(jié)構(gòu)域 C-末端的激酶域 富含Cys的調(diào)節(jié)域 含Ras結(jié)合位點(diǎn)的調(diào)節(jié)域,表達(dá): Raf1在體內(nèi)廣泛表達(dá) 而A-Raf 和B-Raf表達(dá)方式嚴(yán)格 如B-Raf 主要在神經(jīng)組織中表達(dá) 激活: 酶水平的調(diào)節(jié)較復(fù)雜 主要包括2個(gè)過(guò)程: 一是結(jié)合于GTP- Ras 二是 磷酸化 ( 一簇 Ser338, Ser339, Tyr340, Tyr341,Raf1對(duì)于H-、K-和N- Ras顯示應(yīng)答 B-Raf 可被Rap1a活化

13、 TC21能夠與Raf1和B-Raf相互作用，激活它們。 上游激酶的調(diào)節(jié): 已知磷酸化Raf1的激酶有Src 、PAK、PKC及其他蛋白激酶,其他的磷酸化位點(diǎn) Ser259和Ser621 調(diào)節(jié)Raf1與14-3-3蛋白結(jié)合，穩(wěn)定其活性。不過(guò)， 14-3-3蛋白也可能抑制Raf活性。抑制性的磷酸化位點(diǎn)是由Akt (Ser259)和PKA催化的。 抑制：RKIP可干擾Raf-MEK的結(jié)合，抑制后者磷酸化和活化,2. ERK1/2通路中MKK (MEK) MEK1和MEK2是該通路主要的MEK 為雙特異性蛋白激酶 通過(guò)兩個(gè)殘基的磷酸化而被激活 ( Ser或Thr) (同MAPK) 突變可引起其活性增

14、加(不同于MAPK) 酸性氨基酸替代，明顯增加其活性 特異性較高，僅磷酸化少數(shù)底物,MEK4可磷酸化非MAPK MEK1和MEK2含3個(gè)非酶活性結(jié)構(gòu)域 ERK1/2結(jié)合位點(diǎn) ( D域 ) 富含Pro結(jié)構(gòu)域 核輸出序列 ( NES,MEK1和MEK2的上游調(diào)節(jié)因子 Raf、RTK、非RTK、GPCR 在轉(zhuǎn)化細(xì)胞： Ras Raf1 MEK1 ERK1/2 在心肌細(xì)胞 A-Raf MEK1 ERK1/2 在PC細(xì)胞 B-Raf MEK1 ERK1/2,3. ERK1/2蛋白激酶的作用底物及滅活 底物的保守性磷酸化位點(diǎn)模體為 Pro-Lue-Ser/Thr-Pro 底物蛋白 胞質(zhì)蛋白: p90S6K

15、 、cPLA2 、EGF 受體 細(xì)胞骨架: MAP1、2 、4 、Tau 轉(zhuǎn)錄因子：Elk-1, Ets-1, Sap1a, c-Myc等 滅活: MKP-1, -3, -4,4. ERK1/2通路的生物學(xué)功能 刺激細(xì)胞增殖 抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、分化 細(xì)胞周期調(diào)控 調(diào)控MTOC 紡錘體的組裝 促進(jìn)細(xì)胞存活 某些情況下，與細(xì)胞死亡有關(guān),二）JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 1991年鑒定出的新的MAPK 與ERK有兩點(diǎn)不同： 被紫外線輻射等細(xì)胞應(yīng)激所激活 磷酸化c-Jun的氨基活化位點(diǎn) 故稱之為c-Jun N-terminal kinase (JNK) 鼠的同源物則被命名為Stress activated prot

16、ein kinase (SAPK,之所以稱為SAPK是因?yàn)樵趹?yīng)答各種刺激時(shí)，它們的活性增加。這些應(yīng)激包括： 細(xì)胞因子 生長(zhǎng)因子撤離 干擾DNA和蛋白合成的試劑 UV輻射 熱休克 反應(yīng)活性氧 (ROS) 高滲透壓,JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 是已知的應(yīng)答最多樣刺激的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一 JNK通過(guò)Thr-Pro-Tyr模體的磷酸化被激活 由JNK、 MAP2Ks、 MAP3Ks 和MAP4Ks組成 細(xì)胞外配體應(yīng)答的JNK通路照比細(xì)胞應(yīng)激應(yīng)答研究得較為清楚,JNK： 人的JNK由3個(gè)基因 ( jnk1, jnk 2和 jnk3)編碼 3個(gè)基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的不同剪接產(chǎn)生10個(gè)JNK亞型 (46kDa, 55kD

17、a) JNK家族成員間的激酶催化核心的同源性為87% 同一基因編碼的46kDa和55kDa亞型無(wú)明顯的功能差異,JNK1和JNK2廣泛地在多種組織表達(dá) JNK3 主要在神經(jīng)組織表達(dá) JNK1和JNK2 在激酶域的不同剪接體可改變JNK與它們底物的相互作用 不同的亞型受不同的調(diào)節(jié),JNK底物包括： 轉(zhuǎn)錄因子 c-Jun, Jun-D, ATF-2, ATF, Elk-1 Sap-1a, GABP, GABP 腫瘤抑制蛋白p53 JNK生理功能： JNK1和JNK2有重疊功能，在免疫應(yīng)答和胚胎發(fā)育中具有重要的調(diào)節(jié)作用。 JNK3在神經(jīng)組織中有特異功能,1. JNK信號(hào)通路MKK和MKKK MKK

18、(MAP2Ks) MKK4 ( SEK1/MEK4/JNKK1/SKK1 ) 主要激活JNK，但對(duì)p38也有活化作用 可能是個(gè)抑癌基因 胚胎發(fā)育所必需 使細(xì)胞免于凋亡 不是惟一的激活劑,MKK7 (MEK7/JNKK2/SKK4 ) 特異地激活JNK，而不激活p38或ERK 與MKK4相關(guān)，屬于哺乳動(dòng)物細(xì)胞MAPKK超家族 與果蠅的HEP(DJNK的激活劑)密切相關(guān) MKK7基因編碼6個(gè)蛋白亞型 不同亞型應(yīng)答不同的細(xì)胞外刺激和上游激酶,MKK4與MKK7在人和鼠組織中廣泛表達(dá)，但在不同的組織起表達(dá)的豐度不同 MKK4與MKK7介導(dǎo)來(lái)自同一細(xì)胞外刺激的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，但它們被不同MAP3Ks所激活。

19、同MEK1/2，用酸性氨基酸置換磷酸化位點(diǎn)的氨基酸，可增加其激酶活性,MEKK (MAP3Ks) 包括： MEKK14、 ASK1/MAPKKK5 MAPKKK6、 TAK1 Tpl-2 、 MLK2/MSK MLK3/SPRK/PTK1 MUK/DLK/ZPK LZK,MEKKs ( MAPK/ERK kinase kinases ) 因與酵母的STE11同源而被克隆 首先鑒定出的激活JNK的MAP3K是MEKK1 目前已克隆的4種稱為MEKK14 在蛋白C-末端具有同源的激酶域，而它們的N-末端幾乎無(wú)同源性,MEKK1和4與G蛋白Cdc42和Rac相互作用 MEKK1還可結(jié)合Ras MEK

20、Ks 也調(diào)節(jié)其他細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑 MEKK13激活ERK通路 MEKK34激活p38通路,TAK1 ( TGF-activated kinase) 因其在芽殖酵母中具有回補(bǔ)STE11突變體缺失的功能而被克隆 N-端具有激酶域 C-末端與TAB1/2相互作用 被TGF- 、IL-1、神經(jīng)酰胺、UV激活 可直接激活I(lǐng)KK和NF-B轉(zhuǎn)錄活性,ASK1/MAPKKK5 ASK2/MAPKKK6 ( Apoptosis signal-regulating kinase1) 應(yīng)用PCR技術(shù)而被鑒定出 激酶域位于蛋白分子的中間 ASK1 MKK4 JNK ASK1 MKK3 p38 被TGF- 、FasL激

21、活 誘導(dǎo)凋亡,ASK2/MAPKKK6 ASK1的相關(guān)激酶 (鼠的同源物是ASK2) 應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)而被鑒定出 整個(gè)分子與ASK1的同源性為45% 但激酶域的同源性高達(dá)82% 與MEKK14的同源性約為40% 僅能較弱地激活JNK，但并不能 激活p38,Tpl-2/cot ( Tumor progression locus 2) 最初作為原癌基因而被克隆 與人的cot基因約有90%的相同性 與其他的MAP3K約有30%的相同性 Tpl-2 MEK1 ERK Tpl-2 MKK4 JNK 參與NF-B的激活,MLKs ( Mixed lineage kinase) 該家族激酶的特點(diǎn)： 催化域

22、具有Tyr和Ser/Thr兩種蛋白激酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) N-端含有SH3模體 C-端有Pro富集區(qū) C-端附近有亮氨酸拉鏈,MLK2/MST ( mammalian STE 20-like) MLK2 MEK4 JNK MLK2 MKK7 JNK 對(duì)p38和ERK的作用較弱 含有Cdc42和Rac的結(jié)合位點(diǎn) MLK3/SPRK/PTK MLK3 MKK4 JNK MLK3 MKK3/6 p38 對(duì)ERK無(wú)作用,MUK/DLK/ZPK/LZK ( MAPK- upstream kinase) ( dual luecine zipper- bearing kinase) (luecine zipper-

23、 protein kinase) (luecine zipper- bearing kinase) MUK MEK7 JNK LZK激活JNK,MAP4Ks STE20相關(guān)激酶 N-端具有STE20樣的催化域 中間至少有2個(gè)Pro富集域 C-端有CNH域 是JNK強(qiáng)的特異性激活劑 GCK ( germinal center kinase) KHS (kinase homologous to STE20 ) GCKR (GCK- related kinase) GLK (GCK like kinase,TAO1 ( Thousand and one amino acid protein kina

24、se) 應(yīng)用PCR方法從大白鼠腦的cDNA文庫(kù)中鑒定出。 主要在腦和睪丸中表達(dá) 激酶域與其他STE20相關(guān)激酶的同源性約45% 主要激活MKK3,HPK1 ( hematopoietic progenitor kinase ) 主要在造血細(xì)胞中表達(dá) 含有4個(gè)Pro富集域 與連接物蛋白相互作用 受酪氨酸蛋白激酶調(diào)節(jié) 主要激活JNK，不是ERK和p38 在TGF- 誘導(dǎo)的JNK激活中是TAK的上游,支架蛋白： 在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中了解有限 JIP1 ( JNK-interacting protein 1 ) 應(yīng)用酵母雙雜交篩選出 主要結(jié)合JNK，不是ERK和p38 抑制JNK的核轉(zhuǎn)位 結(jié)合MKK7 與

25、MLK家族、HPK1相互作用,三）p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 p38最初作為L(zhǎng)PS刺激產(chǎn)生的酪氨酸磷酸蛋白而被鑒定出 p38與酵母HOG1具有明顯的同源性 p38是細(xì)胞抑制性抗炎藥的靶分子 雙磷酸化三肽模體 Thr-Gly-Tyr 不同亞型的表達(dá)、激活和特異性不同 亞型之間有重疊的、不同的生理作用,p38的表達(dá)： p38 ：白細(xì)胞、肝、脾、骨髓中等高表達(dá) p38 ：腦和心中高表達(dá) p38 ：主要在骨骼肌中表達(dá) p38 ：肺、腎、腸及內(nèi)分泌器官中高表達(dá) 注： p38 和 p38 具有不同的剪接體 例：Mxi 缺少80氨基酸殘基的p38,p38的結(jié)構(gòu)： N-末端、C-末端延伸短，與已知其他激酶無(wú)同源性 (

26、p38家族成員和JNK亞型除外) 相似于ERK2，但活化環(huán)構(gòu)象差異明顯 ATP結(jié)合位點(diǎn)相對(duì)開放 磷酸化唇序列比ERK2短6個(gè)氨基酸殘基,1. p38 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的MKK和MKKK MEKs: MEK3和MEK6是細(xì)胞中p38激活的主要激酶。 不同的MEK選擇性地激活不同的亞型 MEK6 共同的激活劑 MEK3 激活 p38 , ,MEKKs: MEKK13參與p38激活 MEKK1MEK4 p38 (3T3細(xì)胞) MEKK3MEK3 p38 (轉(zhuǎn)化細(xì)胞) MLK家族的4個(gè)成員參與p38激活 其他激酶 Tp12 ASK TAK,MLK家族成員含有3個(gè)結(jié)構(gòu)域： SH3域 亮氨酸拉鏈 小分子G蛋白

27、結(jié)合域 參與p38激活的4個(gè)成員是： MUK/ZPK/DLK MTK1/MEKK4 MLK2/MST MLK3/PTK/SPRK,上游調(diào)節(jié)因子： Rac、Cdc42、Rho家族的小分子GTPase是p38途徑的較強(qiáng)的調(diào)節(jié)因子。 Rac/Cdc42 PAK p38,來(lái)自細(xì)胞表面的活化： 異三聚體G蛋白可激活p38途徑，但激活機(jī)制因細(xì)胞不同而異。 M1-乙酰膽堿受體-Gq/11 M2-乙酰膽堿受體-Gi -腎上腺素受體-Gs (HEK293細(xì)胞) 1A-腎上腺素受體-Gs (PC12細(xì)胞) -腎上腺素受體-Gi (ARVM細(xì)胞,激活p38途徑的物理、化學(xué)應(yīng)激： 氧化應(yīng)激 (巨噬細(xì)胞 ) 低滲壓 (

28、HEK293細(xì)胞 ) 紫外線輻射 (PC12細(xì)胞 ) 低氧 (牛肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞 ) 循環(huán)擴(kuò)張 (腎小球膜細(xì)胞,亞細(xì)胞定位： 細(xì)胞核、胞質(zhì) (免疫熒光顯微鏡) 應(yīng)激反應(yīng)，如心肌缺血、低氧時(shí)， 胞質(zhì) 核 p38的抑制劑： 吡啶咪唑 結(jié)合于ATP結(jié)合位點(diǎn)延伸袋 p38 , 敏感 p38 , 不敏感,2. p38蛋白激酶的作用底物和滅活 作用底物: 細(xì)胞骨架 細(xì)胞應(yīng)激 微管相關(guān)蛋白(tau) stathmin ( 癌蛋白18） 細(xì)胞質(zhì)蛋白 刺激血小板 cPLA2 血管緊張素 Na+/H+交換體,轉(zhuǎn)錄因子 ATF1/2 (activation transcription factor 1/2) CHOP10 (C/EBP-homologus protein 10 ) MEF2C (myocyte enhancer factor 2C) Max (myc associated factor X ) MAPKAPK 2/3 MNK1/2 (MAPK-interacting kinase 1/2 ) PRAK (p38-regulated/activated kinase,p38蛋白激酶滅活： 蛋白激酶磷酸酶M3/M6 3. p38 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路