化學(xué)藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則.doc

1、化學(xué)藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則為化學(xué)藥注射劑臨床使用的安全性和制劑質(zhì)量可控性而定。化學(xué)藥注射劑安全性檢查包括異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）、降壓物質(zhì)（或組胺物質(zhì)）、過敏反應(yīng)等項(xiàng)。根據(jù)處方、工藝、用法及用量等設(shè)定相應(yīng)的檢查項(xiàng)目并進(jìn)行適用性研究。一、化學(xué)藥品（包括抗生素、生化藥品）安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定1.靜脈用注射劑靜脈用注射劑，均應(yīng)設(shè)細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）檢查項(xiàng)。所用原料系動物來源或微生物發(fā)酵液提取物，組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染毒性雜質(zhì)且又缺乏有效的理化分析方法的靜脈用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立異常毒性檢查項(xiàng)。所用原料系動物來源或微生物發(fā)酵提取物時,組分結(jié)構(gòu)不清晰且有可能污染異源蛋白或未知

2、過敏反應(yīng)物質(zhì)的靜脈用注射劑，如缺乏相關(guān)的理化分析方法且臨床發(fā)現(xiàn)過敏反應(yīng)，應(yīng)考慮設(shè)立過敏反應(yīng)檢查項(xiàng)。所用原料系動物來源或微生物發(fā)酵提取物時, 組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染組胺、類組胺樣降血壓物質(zhì)的靜脈用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立降壓物質(zhì)或組胺類物質(zhì)檢查項(xiàng)。2.肌內(nèi)注射用注射劑所用原料系動物來源或微生物發(fā)酵提取物時, 組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染毒性雜質(zhì)且又缺乏有效的理化分析方法的肌內(nèi)注射用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立異常毒性檢查項(xiàng)。所用原料系動物來源或微生物發(fā)酵提取物時, 組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染異源蛋白或未知過敏反應(yīng)物質(zhì)的肌內(nèi)注射用注射劑，如缺乏相關(guān)理化分析方法且臨床發(fā)現(xiàn)過敏反應(yīng)，應(yīng)考慮設(shè)立過敏反應(yīng)檢查項(xiàng)。臨床用

3、藥劑量較大，生產(chǎn)工藝易污染細(xì)菌內(nèi)毒素的肌內(nèi)注射用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)3.特殊途徑的注射劑椎管內(nèi)、腹腔、眼內(nèi)等特殊途徑的注射劑，其安全性檢查項(xiàng)目一般應(yīng)符合靜脈用注射劑的要求，必要時應(yīng)增加其它安全性檢查項(xiàng)目，如刺激性檢查、細(xì)胞毒性檢查。4. 注射劑輔料注射劑輔料使用面廣，用量大，來源復(fù)雜，與藥品的安全性直接相關(guān)。在質(zhì)量控制中，應(yīng)根據(jù)輔料的來源、性質(zhì)、用途、用法用量，配合理化分析方法，設(shè)立必要的安全性檢查項(xiàng)目。5.其它原料和生產(chǎn)工藝特殊的注射劑必要時應(yīng)增加特殊的安全性檢查項(xiàng)目，如病毒檢查、細(xì)胞毒性檢查等。所用原料系中藥提取物的注射劑，應(yīng)按中藥注射劑的要求設(shè)立相關(guān)的安全性檢查項(xiàng)目。二、安全

4、性檢查方法和檢查限值確定檢查方法和檢查限值可按以下各項(xiàng)目內(nèi)容要求進(jìn)行研究。研究確定限值后，應(yīng)進(jìn)行三批以上供試品的檢查驗(yàn)證。1.異常毒性檢查本法系將一定量的供試品溶液注入小鼠體內(nèi)，規(guī)定時間內(nèi)觀察小鼠出現(xiàn)的死亡情況，以判定供試品是否符合規(guī)定。供試品的不合格表明藥品中混有超過正常毒性的毒性雜質(zhì)，臨床用藥將可能增加急性不良反應(yīng)。檢查方法 參照異常毒性檢查法（附錄 C）。設(shè)定限值前研究 參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)并經(jīng)單次靜脈注射給藥毒性試驗(yàn)確定該注射劑的急性毒性數(shù)據(jù)（LD50 或LD1 及其可信限）。有條件時，由多個實(shí)驗(yàn)室或多種來源動物試驗(yàn)求得LD50和LD1 數(shù)據(jù)。注射速度0.1ml/秒，觀察時間為72 小時。如其

5、它給藥途徑應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)途徑的急性毒性試驗(yàn)。設(shè)定限值 異常毒性檢查的限值應(yīng)低于該注射劑的正常毒性劑量，考慮到實(shí)驗(yàn)室間差異、動物反應(yīng)差異和制劑的差異，建議限值至少應(yīng)小于LD1 可信限下限的1/3(建議采用1/31/6)。靜脈注射最大劑量0.8ml/20g 仍未見毒性反應(yīng)或死亡，可以此作為檢查限值。如有動物、給藥途徑和時間、觀察指標(biāo)和時間等方法和限值的特殊要求在正文項(xiàng)下另作規(guī)定。2.細(xì)菌內(nèi)毒素-熱原檢查本法系利用鱟試劑（或家兔）測定供試品所含的細(xì)菌內(nèi)毒素 (或熱原)的限量是否符合規(guī)定。不合格供試品在臨床應(yīng)用時可能產(chǎn)生熱原反應(yīng)而造成嚴(yán)重的不良后果。檢查方法 參照細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（附錄E）或熱原檢查法（附

6、錄D）。設(shè)定限值前研究 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查應(yīng)進(jìn)行干擾試驗(yàn)，求得最大無干擾濃度；熱原檢查應(yīng)做適用性研究，求得對家兔無毒性反應(yīng)、不影響正常體溫和無解熱作用劑量。限值確定 細(xì)菌內(nèi)毒素和熱原檢查的限值根據(jù)臨床一小時內(nèi)最大用藥劑量計算，內(nèi)毒素檢查限值按規(guī)定要求計算，由于藥物和適應(yīng)癥 (如抗感染、抗腫瘤、心血管藥等急重病癥用藥、兒童老人用藥、復(fù)合用藥、大輸液等) 的不同，限值可適當(dāng)嚴(yán)格，至計算值的1/31/2，以保證安全用藥。熱原檢查限值可參照臨床劑量計算，一般為人用每公斤體重每小時最大供試品劑量的25 倍，供試品注射體積每公斤體重一般不少于0.5ml，不超過10ml。內(nèi)毒素測定濃度應(yīng)無干擾反應(yīng)，熱原限值劑量

7、應(yīng)不影響正常體溫。如有干擾或影響，可在正文中增加稀釋濃度、調(diào)節(jié)pH 和滲透壓、或緩慢注射等排除干擾或影響的特殊規(guī)定。3.降壓物質(zhì)檢查本法系通過靜脈注射限值劑量供試品，觀察對麻醉貓的血壓反應(yīng)，以判定供試品中所含降壓物質(zhì)是否符合要求。供試品的不合格表明藥品中含有限值以上的影響血壓反應(yīng)的物質(zhì)，臨床用藥時可能引起急性降壓不良反應(yīng)。檢查方法 參照降壓物質(zhì)檢查法（附錄 G）。設(shè)定限值前研究 供試品按一定注射速度靜脈注射不同劑量后(供試品溶液與對照品溶液的注射體積一般應(yīng)相同，通常為0.21ml/kg),觀察供試品對貓血壓反應(yīng)的劑量反應(yīng)關(guān)系。設(shè)定限值 以臨床單次用藥劑量的1/55 倍作為降壓反應(yīng)物質(zhì)檢查劑量限

8、值，急重病癥用藥盡可能采用高限。除另有規(guī)定外，供試品原液靜脈注射 1ml/kg 劑量未見降壓反應(yīng)，該劑量可作為給藥限值。4組胺類物質(zhì)檢查本法系將一定濃度的供試品和組胺對照品依次注入離體豚鼠回腸浴槽內(nèi)，分別觀察出現(xiàn)的收縮反應(yīng)幅度并加以比較，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。不合格供試品表明含有組胺和類組胺物質(zhì)。在臨床上可能引起血壓下降和類似過敏反應(yīng)等嚴(yán)重的不良反應(yīng)。檢查方法 參照本附錄“附 組胺類物質(zhì)檢查法”設(shè)定限值前研究 在確定限值前，應(yīng)考察供試品對組胺對照品引起的離體豚鼠回腸收縮反應(yīng)的干擾（抑制或增強(qiáng)），求得最大無收縮干擾濃度。若供試品的配方、生產(chǎn)工藝等任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的條件發(fā)生改變

9、時，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。干擾試驗(yàn) 按組胺類物質(zhì)檢查法，依下列順序準(zhǔn)確注入供試品稀釋液與對照品稀釋液低劑量、對照品稀釋液低劑量、供試品稀釋液與對照品稀釋液高劑量、對照品稀釋液高劑量（dS+T、dS 、dSH+T、dSH ），重復(fù)一次，如dS+T 及dSH+T 所致的反應(yīng)值與dS 及dSH 所致的反應(yīng)值基本一致，可認(rèn)為供試品不干擾組胺物質(zhì)檢查；否則該品種不適合設(shè)立組胺物質(zhì)檢查項(xiàng)，建議設(shè)立降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)。限值確定 除特殊要求外，原則上與降壓物質(zhì)檢查限值一致，以臨床單次用藥劑量的1/55 倍量和每公斤體重0.1g 組胺劑量計算注射劑含組胺類物質(zhì)檢查限值，其計算公式為：限值L=K/M，其中K 值為人每公

10、斤體重接受的組胺量（0.1g/kg），M 為降壓物質(zhì)檢查限值（mg/kg、ml/kg、IU/kg）。供試品劑量應(yīng)低于最大無收縮干擾劑量?？鼓[瘤藥、心血管病藥等急重病癥用藥應(yīng)采用高限。5.過敏反應(yīng)檢查本法系將一定量的供試品皮下或腹腔注射入豚鼠體內(nèi)致敏，間隔一定時間后靜脈注射供試品進(jìn)行激發(fā)，觀察豚鼠出現(xiàn)過敏反應(yīng)的情況，以此判定供試品是否符合規(guī)定。供試品不合格表明注射劑含有過敏反應(yīng)物質(zhì)，臨床用藥時可能使患者致敏或產(chǎn)生過敏反應(yīng)，引起嚴(yán)重不良反應(yīng)。檢查方法 參照過敏反應(yīng)檢查法（附錄 K）。設(shè)定限值前研究 測定供試品對豚鼠皮下(或腹腔)和靜脈給藥的無毒性反應(yīng)劑量。必要時，可采用注射劑的半成品原輔料進(jìn)行致敏

11、和激發(fā)研究，確定致敏方式和次數(shù)，在首次給藥后 14、21、28 天中選擇最佳激發(fā)時間。設(shè)定限值 致敏和激發(fā)劑量應(yīng)小于該途徑的急性毒性反應(yīng)劑量. 適當(dāng)參考臨床劑量。一般激發(fā)劑量大于致敏劑量。常用腹腔或皮下注射途徑致敏，每次每只0.5ml,1ml 靜脈注射激發(fā)。如致敏劑量較小，可適當(dāng)增加致敏次數(shù)。附 組胺類物質(zhì)檢查法本法系比較組胺對照品（S）與供試品（T）引起豚鼠離體回腸收縮的程度，以判定供試品中所含組胺類物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定。對照品溶液的制備 精密稱取磷酸組胺對照品適量，按組胺計算，加水溶解并定量稀釋制成每1ml 中含1.0mg 的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，48貯存，

12、在確保收縮活性符合要求的前提下，可在3 個月內(nèi)使用。對照品稀釋液的制備 試驗(yàn)當(dāng)日，精密量取組胺對照品溶液適量，用氯化鈉注射液按高、低劑量組（dSH、dS）配成兩種濃度的稀釋液，高劑量dSH 應(yīng)不致使回腸收縮達(dá)到極限，低劑量dS 所致反應(yīng)值約為高劑量的一半，調(diào)節(jié)劑量使可以重復(fù)出現(xiàn)。一般組胺高低劑量的終濃度為10-610-8g/ml，注入體積0.21.0ml為宜。供試品溶液的制備 按品種項(xiàng)下規(guī)定的限量，照對照品稀釋液低劑量（dS）配制成適當(dāng)?shù)臐舛?。試?yàn)時，一般供試品溶液與對照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等?；啬c肌營養(yǎng)液的制備 A 液：試驗(yàn)當(dāng)日，取氯化鈉160.0g、氯化鉀4.0g、氯化鈣（按無水物計算）

13、2.0g、氯化鎂（按無水物計算）1.0g 與磷酸氫二鈉（含12 個結(jié)晶水）0.10g，加注射用水700ml 使溶解，再加入注射用水適量，使成1000ml。B 液：取硫酸阿托品0.5mg、碳酸氫鈉1.0g、葡萄糖（含1 個結(jié)晶水）0.5g，加適量注射用水使溶解，加A 液50.0ml，混合后加注射用水使成1000ml。B 液應(yīng)臨用前配制，并在24h 內(nèi)應(yīng)用。檢查法 取健康合格的成年豚鼠，雌雄均可，雌者無孕，體重250350g，禁食24h，迅速處死，將血排凈。立即剖腹取出回腸一段（選用遠(yuǎn)端腸段，該段最敏感），注意避免因牽拉使回腸受損，必要時仔細(xì)分離腸系膜。剪取23cm長，用注射器抽取上述溶液B，小心

14、沖洗出腸段的內(nèi)容物。將腸段下端固定于離體器官恒溫水浴裝置的浴槽底部，上端用線與肌張力換能器相連；浴槽中事先放入一定量的 B 液（約1030ml），通入95O2和5CO2的混合氣體，維持恒溫（3436C），用適當(dāng)方法記錄回腸收縮曲線。如果使用杠桿，其長度應(yīng)能使腸段的收縮放大約20 倍。選擇1g 的預(yù)負(fù)荷，可根據(jù)其靈敏度加以調(diào)節(jié)?；啬c放入浴槽后，靜置1530min，方可開始注入藥液。每次注入藥液前，要用B 液沖洗浴槽3 次（最好是溢出，而不排空浴槽）。相鄰兩次給藥的間隔時間應(yīng)一致（約2min），每次給藥前應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定后進(jìn)行。取對照品稀釋液和供試品溶液，照下列次序準(zhǔn)確注入浴槽：dS、dT、dT、dS、dSH，如dSH 所致的反應(yīng)值大于dS 所致反應(yīng)值時判定試驗(yàn)有效。如供試品溶液引起回腸收縮，則分別計算dS、dT 所致反應(yīng)的平均值。若dT 所致反應(yīng)的均值不大于dS 所致反應(yīng)的均值，即判定供試品組胺類物質(zhì)檢查符合規(guī)定；若dT 所致反應(yīng)的均