液相色譜儀操作規(guī)程55595.doc

1、1 目的 規(guī)范Waters e2695液相色譜儀的操作規(guī)程，正確使用本儀器，保證檢測工作順利進行以及操作人員、設備、周圍環(huán)境的安全。2 適用范圍 本指導書適用于Waters e2695液相色譜儀、2489紫外檢測器及隨機工作站。3 職責3.1操作人員按本規(guī)程操作儀器，對儀器進行日常維護，作使用登記。3.2保管人員負責監(jiān)督儀器操作是否符合規(guī)程，對儀器進行定期維護，保養(yǎng)。3.3科室負責人負責對儀器綜合管理。4 儀器性能指標4.1.Alliance e2695系統(tǒng)4.1.1 泵/溶劑管理系統(tǒng)：相互獨立控制的線性雙柱塞驅動裝置,雙壓力傳感器反饋回路, 無脈動, 無需混合器和阻尼器。4.1.1.1溶劑數(shù)

2、：44.1.1.2流速范圍：0.001-10.000ml/min, 以0.001ml為增量4.1.1.3流速精度：0.075%RSD4.1.1.4流速準確度：1.0%RSD4.1.1.5操作壓力：0-6000psi(0-410bar) ，可設上 ,下限4.1.1.6混合范圍：0.0100.0%，以 1% 增量 4.1.1.7梯度準確度： 0.5%，不隨反壓變化4.1.1.8梯度精度：0.15%，不隨反壓變化4.1.1.9壓縮補償：自動，連續(xù)4.1.1.10梯度曲線：多種梯度曲線: 線性, 凸線和凹線等11種4.1.1.11系統(tǒng)體積： 650L, 不隨反壓變化 4.1.2 自動進樣器/樣品管理系

3、統(tǒng)： 4.1.2.1樣品盤數(shù)：120位,分5個樣品盤,每個樣品盤可放置24個2ml樣品瓶4.1.2.2進樣次數(shù)：每個樣品可進樣1到99次 4.1.2.3進樣精度：0.5%RSD4.1.2.4樣品污染度： 0.999 coefficient of deviation4.1.3 在線柱塞清洗裝置： 可在線清洗柱塞桿，可防止因緩沖鹽溶液結晶而造成的堵塞，延長密封圈的使用壽命。4.1.4 在線脫氣裝置：4.1.5柱溫箱：4.1.5.1溫度設定范圍：室溫至654.1.5.2溫度穩(wěn)定性：0.154.1.5.3柱容量：4根7.8X300柱4.2檢測器：4.2.1 2489雙波長紫外檢測器雙通道紫外檢測器，可

4、進行雙波長同時測定；最新專利梯形狹縫池設計，確保低噪音，高靈敏度，寬線性范圍；Maxplot,Ratioplot優(yōu)化靈敏度，檢測共流出物雜質，可作簡單峰純度鑒定。4.2.1.1波長范圍：190-700nm4.2.1.2 燈：氘燈，具有燈優(yōu)化軟件,可以延長燈的使用壽命，可編程控制燈的開關4.2.1.3波長準確度：1.0nm4.2.1.4波長重現(xiàn)性：0.1nm4.2.1.5光譜帶寬：5nm 4.2.1.6噪音：5 X 10-6AU4.2.1.7漂移：1 X 10-4AU/hr4.2.1.8線性范圍： 5% at 2.5 AU 4.2.1.9流通池：池長10mm，池體積10ul4.2.1.10 采集

5、速率：80Hz5 操作規(guī)程5.1操作前準備 5.1.1色譜柱的檢查與安裝 首先打開柱溫箱門看是否是所需用的色譜柱，若不是則旋下色譜柱螺母，卸下色譜柱，馬上用死堵堵上。取出所需色譜柱，兩端用螺母旋緊，固定在卡槽上，注意色譜柱的方向，不能裝反。5.1.2 溶劑的準備。5.1.2.1 甲醇或乙腈必須用HPLC純，其他無機試劑也最好用HPLC純，且需經(jīng)過0.45m濾膜溶劑過濾裝置過濾。試劑的純凈非常重要。必須要采用超純水，可以用哇哈哈純凈水替代。5.2 主機操作 5.2.1灌裝及清洗系統(tǒng)5.2.1.1當真空脫氣機第一次使用或當真空管是空的，或當改變溶劑，且當前溶劑與真空管中溶劑不相溶時，應當灌裝清洗系

6、統(tǒng)。5.2.1.2如果使用易揮發(fā)的混合溶劑或改變溶劑時，若系統(tǒng)長時間關機（比如，隔夜）灌裝系統(tǒng)推薦將泵的流速控制在高水平（3-5ml/min）。5.2.1.3使用注射器灌裝系統(tǒng)（干灌裝）：點擊儀器面板上“Menu/status”按鈕，選擇“Direct Function”,然后點擊“dry prime”選擇欲灌裝的通道并逆時針方向旋開灌裝/排放閥，將專用注射器插入灌裝/排放閥入口內，拉動注射器活塞吸入大約10毫升灌裝液或直到管路中不在有氣泡為止。灌裝完成后順時針方向擰緊灌裝/排放閥。5.2.1.4首次灌裝系統(tǒng)時，使用干灌裝并使用異丙醇、甲醇、乙醇作為灌裝溶劑。5.2.1.5置換管路中的流動相，

7、使用濕灌裝：點擊儀器面板“Menu/status”按鈕，選擇“Direct Function”,然后點擊“wet prime”選擇欲灌裝的通道。5.2.1.6如果當前管路中溶劑是有機的或水而當前流動相也為有機溶劑 或為水，在能互相溶解的情況下，用流動相作為灌裝溶劑。5.2.1.7如果當前管路中溶劑是有機的或水而當前流動相也為有機溶劑或為 水，但不能互相溶解的情況下，使用異丙醇灌裝系統(tǒng)。5.2.1.8如果管路中溶劑為有機的而當前流動相為緩沖鹽或管路中為緩沖鹽而流動相為有機溶劑時，使用10%異丙醇、甲醇、乙醇灌裝系統(tǒng)。5.3優(yōu)化泵的性能5.3.1總是把存放溶劑瓶的溶劑瓶架放在泵的頂部（或在相對于泵

8、較高的位置）。5.3.2當使用鹽溶液的時候，常需要用水沖洗所有流路。這樣就可以將閥門端口的沉淀的鹽沖洗掉。在運行泵之前，用至少兩倍體積（30ml）的水沖洗真空脫氣機，特別是當泵關閉較長時間時或者通道中使用易揮發(fā)混合溶劑時。5.3.3當基線長時間不能處于穩(wěn)定狀態(tài)時，通常情況下應考慮溶劑進口過濾器是否堵塞。當溶劑過濾器堵塞時，應將其從溶劑瓶中取出并將其放入30%硝酸溶液中超聲清洗30min。在將其重新裝入溶劑瓶之前，必須用MillQ水對其進行徹底的清洗。長期處于水或緩沖液中的過濾器常因為溶劑中藻類等微生物的生長，造成過濾器的堵塞。因此建議在使用完此類流動相后，用50%乙腈清洗溶劑過濾器。5.3.4

9、當使用緩沖溶液時，在關閉系統(tǒng)前必須將通道中的溶劑置換成50%乙腈，以防止藻類等微生物的生長。5.4使用Empower色譜工作站5.4.1雙擊電腦桌面上的Empower快捷圖標，出現(xiàn)Empower登陸窗口。輸入用戶名與密碼，默認賬號為“system”，密碼為“manager”，點擊“OK”進入Empower工作站。單擊高級鍵, 選擇用戶類型和 QuickStart 界面。5.4.2選擇 QuickStart 界面，點擊“確定”,然后選擇待選定的操作項目以及色譜系統(tǒng) （僅查看數(shù)據(jù)可選擇色譜系統(tǒng)中的沒有系統(tǒng)），單擊“確定”。 5.4.3編輯儀器方法和方法組5.4.3.1監(jiān)視區(qū)單擊方法組編輯向導5.4

10、.3.2選擇新建按鈕，彈出儀器方法編輯器。5.4.3.3單擊 2690/5，彈出 2695 編輯界面。5.4.3.4 Alliance 系統(tǒng)（包括 2695、2795 和 2695D）通用編輯頁面中，可選擇單次輸送體積。查看脫氣選項，確認設置正確。流量選項中設置泵模式、總流量以及流動相配比。 選擇等度或者梯度。5.4.3.5單擊2489，彈出2489編輯界面。在波長模式中選擇相應的波長模式。單波長或者雙波長，輸入所需的波長，選擇相應的采樣速率，一般為2點/秒。TUV 檢測器濾波常數(shù)快速選項僅適用于單波長模式；采樣速率以一個色譜峰上的采樣點不少于 15 個點為準。5.4.3.6點擊文件，選擇另存

11、為，輸入儀器方法名稱，點擊保存；點擊文件，選擇退出。5.4.3.7在被選項中選擇所需的儀器方法名稱，點擊 “下一步”。5.4.3.8在下拉菜單中選擇所需的處理方法和報告方法（如果沒有合適的方法選擇無處理、無報告），點擊“下一步”。5.4.3.9輸入方法組名稱，單擊完成。5.4.4進樣單擊平衡系統(tǒng)按鈕進入平衡系統(tǒng)/監(jiān)視基線界面，選擇相應的儀器方法，點擊平衡/監(jiān)視器，在監(jiān)視窗口監(jiān)視基線至系統(tǒng)平衡，停止系統(tǒng)監(jiān)視狀態(tài)，點擊停止按鈕。單擊樣，點擊參數(shù)編輯快捷方式進入定義單進樣參數(shù)編輯界面，輸入樣品名、功能、方法組等參數(shù)。點擊“進樣”。5.4.5使用向導建立樣品組和樣品組方法5.4.5.1選擇“運行樣品”

12、任務欄，然后單擊“樣品隊列”，進入樣品列表。單擊新建樣品組向導，建立樣品組。選擇創(chuàng)建樣品組方法類型為LC 或 PDA/MS，然后點擊“定義樣品板”，在選擇標準進樣在那里開始中選擇合適的選項。檢查開始加載樣品瓶的位置是否 正確，點擊“下一步” 。5.4.5.2在描述標樣中需要設置一下內容：樣品組中的標樣數(shù)：x；每瓶標樣進樣次數(shù): x；進樣體積: x ； 行時間： xx；方法組 xxx；點擊選項： 輸入下一進樣延遲時間 x ； 點擊“下一步”。樣品數(shù)：x；每瓶樣品進樣次數(shù)：x； 進樣體積： x ; 行時間：x 方法組 x；點擊“選項”。輸入下一進樣延遲時間 x；點擊“下一步”。5.4.5.3在識別

13、標準樣界面中，輸入標樣名稱，增量后綴使用 1。在識別樣品界面中，輸入樣品名稱，增量后綴使用 a。點擊“下一步”。 運行模式選項中選擇只測試。查看摘要，點擊“下一步”。 注 ：彈出組分編輯器，輸入標樣中每個組分的名稱（內標不需要輸入含）?？梢灾苯雨P閉該窗口，在處理數(shù)據(jù)的時候再添加。 點擊“完成”，5.4.5.4在菜單欄中選擇文件。為方法組命名并保存樣品組方法。單擊“樣品隊列”，打開運行樣品窗口，點擊運行當前樣品組方法鍵，選擇“運行”。選擇需運行的樣品組名稱，點擊“運行”。樣品組運行過程中，在正在運行欄中正在運行以及運行完畢的樣品以紅色顯示。 注：以向導建立的樣品組首行功能一般為清除校正，一般在運

14、行樣品前刪除該行或改為平衡。 5.4.6建立數(shù)據(jù)處理方法。5.4.6.1單擊“瀏覽項目”鍵，在“樣品組”中選擇目標樣品組。在樣品組上點擊鼠標右鍵選擇查看相關通道，樣品組在單個通道中顯示。5.4.6.2選擇定最低濃度的標樣，點擊鼠標右鍵，選擇下拉菜單中的查看，會顯示未處理的 色譜圖形。5.4.6.3點擊處理方法向導快捷鍵，選擇創(chuàng)建新處理方法，點擊”確定”。確認處理類型為 LC，積分方式可選擇為傳統(tǒng)，再點擊使用處理方法向導，選擇“確定”。積分-峰檢測 1：要設定峰寬，用鼠標左鍵拖拽放大選定區(qū)域，放大感興趣的最窄峰。注：在色譜圖區(qū)域方可以放大某個需要監(jiān)測的峰。點擊鼠標右鍵選擇全視圖可以 還原色譜圖。

15、積分-峰檢測 2：在色譜圖的積分界面選擇一段典型的基線作為積分的閾值，點擊 “下一步”。積分-幾分區(qū)域：用鼠標左鍵拖拽放大選定區(qū)域，在基線上選取積分的起始時間點。積分-剔除峰：建議選擇最小峰高，選擇所要積分的高度最小峰（或鍵入相應數(shù)值）。小于此峰高 90%的峰將不被積分。點擊“下一步”。5.4.6.4在定量方法中選擇面積 ，組分信息中選擇含量，校正曲線你和類型選擇線性 。點擊“下一步”。 QuickStart: 跨通道內標樣界面點擊否。校正-名稱和保留時間：因為選擇的是標樣，點擊峰 1 可以看到一個下拉菜單選擇相應的組分名稱或者鍵入運行樣品個組分相應的名稱。 添加于組分名稱相匹配的標準含量，然

16、后點擊“下一步”。 注：如果需要輸入多水平的標樣濃度或含量，請忽略此含量缺省值的設置步驟，點擊“下一步”。（如果使用的單一水平的標樣，可以在缺省含量中輸入對應的數(shù)值）。 5.4.6.5校正：選擇外標法，校正：選擇單一內標樣，需要在下拉菜單中選擇或鍵入內標相應得名稱，然后點“下一步”。校正：選擇多重內標需要輸入所有內標的名稱。處理方法名：為處理方法命名，點擊完成。色譜圖界面會顯示該處理方法應用后的色譜結果，包括積分。如需為積分方法添加積分事件，鼠標右鍵點擊色譜圖窗口，選擇添加積分事件。積分事件所示功能會立刻應用于處理方法中。編輯處理方法的高級功能需要選擇快捷鍵。有任何更改均需再次保存處理方法。

17、點擊峰表底部可預覽 2D 通道和峰。點擊“瀏覽項目”鍵，選擇“通道”或“樣品組”標簽欄。右鍵點擊目標樣品組或通道并選擇處理。在處理界面，選擇使用指定的處理方法，選擇相應的處理方法名稱，點擊清除校正，選擇校正并定量。點擊”確定”，數(shù)據(jù)處理，產(chǎn)生結果?？稍诮Y果欄中查看。 5.4.7查看結果和視圖篩選選擇“結果”標簽欄，使用視圖篩選器從下拉菜單中選擇今天 。選擇需查看的結果，右鍵點擊選擇查看 查看結果點擊“曲線”快捷鍵，查看每個組分的校正曲線。切換至主窗口點擊“峰型”按鈕。5.4.8預覽結果并創(chuàng)建一個綜合報告方法5.4.8.1點擊“瀏覽項目”切換回結果表預覽狀態(tài)。 5.4.8.2選中一個或多個結果，

18、點擊鼠標右鍵選擇預覽。5.4.8.3打開報告方法：若選取一個結果，在預覽窗口選擇使用以下方法：使用缺省單個報告，單擊“確定”。 5.4.8.4預覽報告并查看數(shù)據(jù)。點擊“修改方法”鍵修改報告。5.4.8.5雙擊色譜圖或峰結果表編輯報告屬性。5.4.8.6點擊文件，選擇保存，為新建的報告方法命名。點擊“預覽”鍵預覽報告。5.4.8.7 如需將報告保存為 PDF 格式，點擊“另存為”標簽欄。5.4.9方法組的建立5.4.9.1在建立了適當?shù)膬x器方法、處理方法與報告方法后，可以將其組合得到一個方法組 5.4.9.2采集區(qū)單擊方法組編輯向導。5.4.9.3彈出新方法組：選擇儀器方法界面。選擇相應的儀器方

19、法，點擊“下一步”。5.4.9.4選擇缺省方法界面：選擇相應得處理方法和報告方法，導出方法缺省。點擊“下一步”。5.4.9.5命名方法組：為方法組命名，點擊完成。 5.4.9.6在運行樣品時，方法組/報告方法中調用該方法組，可以自動完成采集、處理、報告數(shù)據(jù)流程。5.4.10數(shù)據(jù)管理5.4.10.1、項目的備份 1）在QuickStart界面，選擇菜單管理-備份當前項目。 2）出現(xiàn)項目備份向導，單擊“下一步”。 3）出現(xiàn)項目備份向導-選擇目的地 。通過瀏覽選擇目的地。建議選擇在非操作系統(tǒng)安裝的硬盤分區(qū)內。一旦選擇完成，單擊“確定”關閉后，回到項目備份窗口，單擊“下一步”。4）出現(xiàn)項目備份向導-備

20、份顯示。確認數(shù)據(jù)的復制已經(jīng)成功，再單擊“下一步”。 5.4.10.2項目的還原1）在QuickStart界面，選擇菜單管理， 下拉菜單中選擇還原項目。 2）出現(xiàn)還原項目向導。3）通過瀏覽選擇被還原的項目所在的路徑，單擊“確定”。 4）單擊“下一步”。5）如出現(xiàn)類似以下內容的對話框，則需為還原的項目另起一個名字。 6）在輸入磁盤空間配額頁中，輸入項目名，并注意此處的表空間配額應不得小于欲還原的項目原有的配額（數(shù)據(jù)文件大?。缓髥螕簟跋乱徊健?。7）如果需要，可以在此頁面中，選擇該項目是否屬于某個父項目。 8）在還原顯示中，如果出現(xiàn)如下對話框，單擊確定。 9）在 還原顯示中，等待數(shù)據(jù)還原結束后，單

21、擊完成。 5.4.11項目管理5.4.11.1新建項目 1）進入到Emopwer 3 的QuickStart界面。在菜單中選擇管理創(chuàng)建新項目 。2）出現(xiàn)新項目向導的對話框，選擇新建項目的父項目： 3）單擊下一步，彈出新建項目向導表空間 ，表空間50MB為默認設置，可根據(jù)需要增減。4）出現(xiàn)新建項目向導選項頁。選擇用于本項目的選項，如果無法確定適當?shù)脑O置，請接受默認選項。單擊下一步 。5）新建項目向導訪問控制：根據(jù)需要選擇設置對您所創(chuàng)建的項目具有訪問權限的用戶和用戶組，或者接受缺省的選項，然后單擊下一步。 6）新建項目向導-復制所選項：需要選擇復制的項目，一般選擇Defaults項目。7） 新建項

22、目向導輸入名：為新項目命名。5.4.11.2查看及更改項目屬性 在建立了新項目以后，可以根據(jù)需要在不同的項目之間進行切換。1) 進入Empower 2的QuickStart界面，選擇菜單管理改變系統(tǒng)/項目 2) 改變項目/系統(tǒng)：根據(jù)需要進行選擇項目或者選擇系統(tǒng)（如果存在二個或者二個以上的系統(tǒng)）。選擇完畢后，單擊確定。如果選擇了在該窗口切換項目/系統(tǒng) ，當前的項目/系統(tǒng)會被新選中的項目/系統(tǒng) 所代替，如果選擇了為項目/系統(tǒng)打開新窗口 ，則會為選中的項目重新打開另外一個QuickStart的界面。 3) 在新的項目/系統(tǒng)的QuickStart界面內即可進行下一步的操作。3系統(tǒng)配置1）在QuickStart界面，選擇菜單視圖-系統(tǒng) ，查看系統(tǒng)。2）出現(xiàn)系統(tǒng)信息窗口。在該窗口中，可以在地址欄中可以查看