DNA的復(fù)制特點(diǎn)(分子生物學(xué))PPT課件

精選,1,蔣尚蓉,精選,2,DNA復(fù)制的特點(diǎn),1.半保留復(fù)制,精選,3,精選,4,Meselson和Stahl的重氮實(shí)驗(yàn),精選,5,精選,6,DNA按53方向延伸,精選,7,三個(gè)磷酸基團(tuán)的強(qiáng)大斥力是dNTP難以靠近帶有三個(gè)磷酸基團(tuán)的5端空間位阻，帶有三個(gè)磷酸基團(tuán)的5端不能與模板配對(duì),精選,8,在出現(xiàn)錯(cuò)配時(shí)就要修復(fù),如果是從35,切除錯(cuò)配的核苷酸后就剩下的5端就是單磷酸腺苷,就必須再加兩個(gè)磷酸基團(tuán)上去,成為三磷酸腺苷,這樣就浪費(fèi)了能量,精選,9,DNA的半不連續(xù)復(fù)制,脈沖標(biāo)記實(shí)驗(yàn)：被3H-T標(biāo)記的新航打金農(nóng)民太熱空工業(yè)可以看見法合成的DNA片段任何額外剛剛過熱而二個(gè)如果戈偉幾乎都為1020s，是公司公司如果我國(guó)俄國(guó)人給我而即均10002000核酸大小核酸大小岡崎實(shí)驗(yàn)脈沖追蹤實(shí)驗(yàn)：小片段已被連接成豆腐乳熱熱太熱越獄兔突然虎頭70120s的大片段,精選,10,岡崎片段,DNA聚合酶具有5，3，外切酶活性，它可以及時(shí)切除復(fù)制起始合成的RNA引物，并填補(bǔ)切除引物的裂隙。,精選,11,dUMP片段,形成原因：1、dUMP會(huì)摻入到DNA分子中去；2、細(xì)胞通過兩道防線阻止了dUMP摻入到DNA分子的過程；3、第二道防線中的“尿嘧啶-N-糖苷酶”和“Ap內(nèi)切酶”會(huì)將新合成的DNA鏈酶切成片段。,精選,12,dUMP片段,dUMP摻入到DNA分子中的機(jī)制：1、細(xì)胞內(nèi)存在dUMP和dTTP兩種類似物，而DNA而我聚合酶又不能區(qū)分這兩者，故會(huì)錯(cuò)將U當(dāng)成T加入到合而我成的DNA新鏈中；2、新合成的鏈中會(huì)有C因氧化脫氨而成為U；,精選,13,dUMP片段,細(xì)胞內(nèi)的第一道防線：DNA復(fù)制的底物為:dNTP（即dATP,dTTP,dGTP,dCTP)；dUMP與dTTP類似，在錯(cuò)配的情況下可以摻入DNA中；由dut基因編碼的dUTP酶能有效地將dUTP,dUDP分解為多dUMP，從而避免了dUTP作為底物而摻入到DNA分子中。,但仍有dUTP分子約以1/1200的概率逃逸分解摻入到DNA分子中,精選,14,細(xì)胞內(nèi)的第二道防線：,形成一個(gè)無嘌呤或堿基的Ap位點(diǎn),Ap內(nèi)切酶進(jìn)一步將Ap位點(diǎn)酶解成缺口,精選,15,dUMP片段,dUTP有1/1200的概率摻入到DNA中，則約1200個(gè)核苷酸就有一個(gè)dUMP被剪切的可能，被剪切后則會(huì)與岡崎片段相似大小的10002000核苷酸的片段。dut-(dUTP酶缺陷型)突變體由于dUMP摻入的概率增加，dUMP片段將變短。ung-(UNG酶缺陷型)突變體由于以摻入dUMP被切除的概率降低，dUMP片段將變長(zhǎng)。,精選,16,DNA復(fù)制的起點(diǎn),復(fù)制開始時(shí)，用低放射-脫氧胸苷標(biāo)記，將來感光還原的銀密度低；再轉(zhuǎn)移到含高放射-脫氧胸苷培養(yǎng)基，則繼續(xù)合成區(qū)的銀密度高；如果：?jiǎn)蜗驈?fù)制，則密度為：高低雙向復(fù)制，密度為：中間低，兩側(cè)高,放射自顯影,精選,17,精選,18,結(jié)束謝謝傾聽,精選,19,由dut基因編碼的dUTP酶能有效地將dUTP,dUDP分解為dUMP，從而避免了dUTP作為底物而摻入到DNA分子中。dUTP酶缺陷型突變體不能合成dUTP酶，故不能分解細(xì)胞中的dUTP。在存在dUTPase的情況下，仍有dUTP分子以1/1200