輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程

輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【目 的】規(guī)范輸血科各級(jí)檢驗(yàn)人員室內(nèi)質(zhì)控操作程序，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠?！具m用范圍】適用于輸血相容性檢測(cè)項(xiàng)目?！韭?責(zé)】輸血科全體員工均遵守執(zhí)行。（一） ABO、RhD血型室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【檢驗(yàn)原理】 選擇已知型別的紅細(xì)胞和血清，根據(jù)其與在用試劑標(biāo)準(zhǔn)血清：抗A、抗B、抗D、ABO血型反定型紅細(xì)胞及ABO血型抗原檢測(cè)卡（微柱凝膠）陽(yáng)性及陰性檢測(cè)結(jié)果，通過(guò)每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測(cè)，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行ABO、RhD血型檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性?！局饕噭┙M成】1. 質(zhì)控品：樣本1 A1型RhD（+）紅細(xì)胞 樣本2 B型RhD（+）紅細(xì)胞 樣本3 A血清 樣本4 B血清 樣本5 O型RhD（+）紅細(xì)胞 樣本6 RhD（-）紅細(xì)胞2. 血型鑒定試劑： 標(biāo)準(zhǔn)血清：抗A，抗B，抗D ABO血型反定型紅細(xì)胞：Ac，Bc，Oc ABO血型抗原檢測(cè)卡（微柱凝膠）【主要儀器】 卡式專(zhuān)用離心機(jī)【檢驗(yàn)方法】 首先將質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)血清及ABO血型反定型紅細(xì)胞從冰箱取出后平衡至室溫。操作步驟按不同檢驗(yàn)方法（平板法、試管法、微柱凝膠法）具體如下：1. 平板法：在玻片上（或紙片上）按表1加樣各1滴（50ul），混勻（直徑約20mm大?。?，前后緩慢搖晃玻片，2分鐘左右肉眼判讀結(jié)果，并記錄。2. 試管法：取13支（95mm12mm或75mm12mm）試管做好標(biāo)記，按表1加樣各1滴（50ul），混勻，離心（離心速度和時(shí)間可以選擇轉(zhuǎn)速1000rpm時(shí)間1分鐘或轉(zhuǎn)速3400rpm時(shí)間15秒），判定結(jié)果，并記錄。表1 平板法、試管法ABO及RhD血型室內(nèi)質(zhì)控加樣表抗A + 樣本1抗B + 樣本1抗D + 樣本14%Ac + 樣本34%Bc + 樣本34%Oc + 樣本3抗A + 樣本2抗B + 樣本2抗D + 樣本24%Ac + 樣本44%Bc + 樣本44%Oc + 樣本4抗A + 樣本5抗B + 樣本5抗D + 樣本5抗D + 樣本63. 柱凝膠法：取4張待檢ABO血型抗原檢測(cè)卡（微柱凝膠）做好標(biāo)記。將樣本1分別加入第1張卡的1-3孔中各1滴（50ul），將樣本2分別加入第2張卡的1-3孔中各1滴（50ul），將樣本5分別加入第3張卡的1-3孔中各1滴（50ul），將樣本6加入第4張卡的第3孔內(nèi)。使用卡式專(zhuān)用離心機(jī)離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄?！窘⒖贾怠渴状问褂觅|(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí)，需要連續(xù)做三天試驗(yàn)，結(jié)果一致，方可定為參考值；更換不同批號(hào)質(zhì)控品時(shí)，需新舊質(zhì)控品同時(shí)做，連續(xù)兩天，舊批號(hào)質(zhì)控品在控，新批號(hào)質(zhì)控品質(zhì)控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時(shí)，需新舊批號(hào)試劑同時(shí)做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā?陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出現(xiàn)超過(guò)1+凝集強(qiáng)度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛枯斞嗳菪詸z測(cè)室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表SXK-JL65輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控登記表SXK-JL66輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表SXK-JL67【注意事項(xiàng)】1. 室內(nèi)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)血清、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞保存在28，嚴(yán)禁在室溫長(zhǎng)期存放。2. 用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號(hào)質(zhì)控品不得混用。3. 紅細(xì)胞質(zhì)控品：輕拿輕放，避免劇烈震蕩；若發(fā)生凝集，出血菌落或嚴(yán)重溶血，不得使用；若出現(xiàn)輕微溶血可用生理鹽水對(duì)其進(jìn)行洗滌，重新懸浮后使用。4. 質(zhì)控血清：出現(xiàn)渾濁或沉淀時(shí)，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)離心，去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用?！緟⒖假Y料】1. 長(zhǎng)春愽迅生物技術(shù)有限公司ABO、RhD血型檢測(cè)質(zhì)控品（微柱凝膠法）說(shuō)明書(shū)2. 長(zhǎng)春愽迅生物技術(shù)有限公司ABO、RhD血型檢測(cè)卡（微柱凝膠法）說(shuō)明書(shū)3. 上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司抗A抗B血型定型試劑（單克隆抗體）說(shuō)明書(shū)4. 密理博（上海）貿(mào)易有限公司康D（IgM+IgG）血型定型試劑（單克隆抗體）說(shuō)明書(shū)（二）不規(guī)則抗體篩檢室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【檢驗(yàn)原理】 選擇已知血清，標(biāo)本其與在用試劑抗人球蛋白檢測(cè)卡（微柱凝膠）中的陽(yáng)性及陰性結(jié)果，通過(guò)每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測(cè)，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行不規(guī)則抗體篩檢過(guò)程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性?！局饕噭┙M成】1. 質(zhì)控品：樣本1 O型血清 樣本2 IgG型抗D（+）AB血清 2. 不規(guī)則抗體篩檢試劑： 抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡（微柱凝膠） 、抗體篩檢紅細(xì)胞【主要儀器】 卡式專(zhuān)用離心機(jī)【檢驗(yàn)方法】 微柱凝膠法，具體操作步驟如下：1. 將質(zhì)控品、抗體篩檢紅細(xì)胞從冰箱取出后平衡至室溫。2. 取1張抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡做好標(biāo)記。3. 將、抗體篩檢細(xì)胞用低離子強(qiáng)度鹽溶液稀釋至0.8%，對(duì)應(yīng)加入上述檢測(cè)卡16管中，50ul/管。4. 分別在前3管加入樣本1，后3管加入樣本2，50ul/管。5. 將檢測(cè)卡置37 孵育器中15分鐘。 6. 即刻使用卡式專(zhuān)用離心機(jī)離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄?！窘⒖贾怠渴状问褂觅|(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí)，需要連續(xù)做三天試驗(yàn)，結(jié)果一致，方可定為參考值；更換不同批號(hào)質(zhì)控品時(shí)，需新舊質(zhì)控品同時(shí)做，連續(xù)兩天，舊批號(hào)質(zhì)控品在控，新批號(hào)質(zhì)控品質(zhì)控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時(shí)，需新舊批號(hào)試劑同時(shí)做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā?陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出現(xiàn)超過(guò)1+凝集強(qiáng)度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛枯斞嗳菪詸z測(cè)室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表SXK-JL65輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控登記表SXK-JL66輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表SXK-JL67注意事項(xiàng)1. 室內(nèi)質(zhì)控品、抗篩細(xì)胞、保存在28，嚴(yán)禁在室溫長(zhǎng)期存放。2. 用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號(hào)質(zhì)控品不得混用。3. 質(zhì)控血清：出現(xiàn)渾濁或沉淀時(shí)，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)離心，去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用。參考資料1. 長(zhǎng)春愽迅生物技術(shù)有限公司不規(guī)則抗體篩檢質(zhì)控品說(shuō)明書(shū)2. 長(zhǎng)春愽迅生物技術(shù)有限公司抗人球蛋白檢測(cè)卡不規(guī)則抗體篩檢操作說(shuō)明書(shū)3. 長(zhǎng)春愽徳生物技術(shù)有限責(zé)任公司不規(guī)則抗體檢測(cè)試劑（人紅細(xì)胞）使用說(shuō)明書(shū)（三）交叉配血室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【檢驗(yàn)原理】 凝聚胺介質(zhì)法：紅細(xì)胞表面帶有大量的負(fù)電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚集，其懸浮在電解質(zhì)中形成Zeta電位，Zeta電位決定紅細(xì)胞之間的排斥作用。而凝聚胺介質(zhì)法則是首先利用低離子溶液降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周?chē)年?yáng)離子云，以促進(jìn)紅細(xì)胞和血清（血漿）中的抗體結(jié)合，其后加入凝聚胺溶液（Polybrene，為高價(jià)陽(yáng)離子多聚物、肝素中和劑），以中和紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞Zeta電位降低，縮短紅細(xì)胞之間的距離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝聚，最后加入懸浮液（Resuspending），中和凝聚胺（Polybrene）陽(yáng)離子作用，使正常的紅細(xì)胞非特異性凝聚散開(kāi)，試驗(yàn)結(jié)果為陰性，但如果紅細(xì)胞被相應(yīng)的抗體致敏，則會(huì)被凝聚胺凝結(jié)，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。 微柱凝膠法：選擇已知的血清和相應(yīng)的細(xì)胞，標(biāo)本其與在用試劑抗人球蛋白檢測(cè)卡（微柱凝膠）中的陽(yáng)性及陰性結(jié)果，通過(guò)每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測(cè)，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行交叉配血過(guò)程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性?！局饕噭┙M成】1. 質(zhì)控品：樣本1 AB型RhD（+）紅細(xì)胞 樣本2 O型RhD（+）紅細(xì)胞 樣本3 RhD（-）紅細(xì)胞 樣本4 O血清 樣本5 IgG抗DAB血清 2. 交叉配血檢測(cè)試劑： 凝聚胺介質(zhì)試劑：低離子溶液（LIM）、凝聚胺（Polybrene）、懸浮液（Resuspending） 抗人球蛋白交叉配血檢測(cè)卡（微柱凝膠）【主要儀器】 卡式專(zhuān)用離心機(jī)【檢驗(yàn)方法】首先將質(zhì)控品、凝聚胺介質(zhì)從冰箱取出后平衡至室溫。操作步驟按不同檢驗(yàn)方法（試管法、微柱凝膠法）進(jìn)行。1. 凝聚胺介質(zhì)法 為試管法，操作步驟如下：1.1 取4支（95mm12mm或75mm12mm）試管做好標(biāo)記.1.2 按照組合1（樣本4+樣本1）、組合2（樣本4+樣本2）、組合3（樣本5+樣本1）、組合4（樣本5+樣本3）分別加入各管，各1滴（50ul）。1.3 各管加入低離子溶液（LIM）0.65ml，混合均勻后，各管加入凝聚胺（Polybrene）溶液2滴（100ul），并混合均勻。1.4 用離心機(jī)3400rpm時(shí)間10秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。1.5 輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無(wú)凝聚，如無(wú)凝聚，則必須重做。1.6 最后加入懸浮液（Resuspending）2滴（100ul），輕輕搖動(dòng)試管混合并同時(shí)觀(guān)察結(jié)果。如凝聚散開(kāi)，表示由Polybrene引起的非特異性凝集，抗體篩檢結(jié)果為陰性。如果凝集不散開(kāi)，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)果的特異性反應(yīng)，抗體篩檢結(jié)果為陽(yáng)性，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定。2、微柱凝膠法 操作步驟如下：2.1 取1張待檢抗人球蛋白交叉配血檢測(cè)卡（微柱凝膠）做好標(biāo)記。2.2 交叉配血實(shí)驗(yàn)按照組合1（樣本4+樣本1）、組合2（樣本4+樣本2）、組合3（樣本5+樣本1）、組合4（樣本5+樣本3）加樣，各50ul。2.3 將檢測(cè)卡置37 孵育器中15分鐘。2.4即刻使用卡式專(zhuān)用離心機(jī)離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄。【結(jié)果解釋】 交叉配血室內(nèi)質(zhì)控根據(jù)其檢測(cè)作用可分為IgG組和IgM組如表2。表2 交叉配血室內(nèi)質(zhì)控IgG、IgM分組表組合質(zhì)控品組合檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)作用組合1樣本4 + 樣本1+檢測(cè)IgM類(lèi)抗原抗體反應(yīng)組合2樣本4 + 樣本2-檢測(cè)IgM類(lèi)抗原抗體反應(yīng)組合3樣本5 + 樣本1+檢測(cè)IgG類(lèi)抗原抗體反應(yīng)組合4樣本5 + 樣本3-檢測(cè)IgG類(lèi)抗原抗體反應(yīng)【建立參考值】首次使用質(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí)，需要連續(xù)做三天試驗(yàn)，結(jié)果一致，方可定為參考值；更換不同批號(hào)質(zhì)控品時(shí)，需新舊質(zhì)控品同時(shí)做，連續(xù)兩天，舊批號(hào)質(zhì)控品在控，新批號(hào)質(zhì)控品質(zhì)控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時(shí)，需新舊批號(hào)試劑同時(shí)做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā?陽(yáng)性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出現(xiàn)超過(guò)1+凝集強(qiáng)度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛枯斞嗳菪詸z測(cè)室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表SXK-JL65輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控登記表SXK-JL66輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表SXK-JL67【注意事項(xiàng)】1. 室內(nèi)質(zhì)控品保存在28，嚴(yán)禁在室溫長(zhǎng)期存放。2. 用后