《動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫學(xué)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱

動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱1實(shí)驗(yàn)課程號(hào)：20710BO SY2課程屬性：必修3實(shí)驗(yàn)屬性：非獨(dú)立設(shè)課4學(xué)時(shí)學(xué)分：總學(xué)時(shí)54、總學(xué)分3、實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)185實(shí)驗(yàn)應(yīng)開學(xué)期：與理論課同時(shí)或稍后開設(shè)6先修課程：食品微生物學(xué)；食品微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)；食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)；食品分析技術(shù)；食品現(xiàn)代分析與檢測(cè)。一、 課程的性質(zhì)與任務(wù)1通過進(jìn)行各項(xiàng)檢驗(yàn)檢疫診斷操作，具體觀察不同標(biāo)本，分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，完成實(shí)驗(yàn)作業(yè)各環(huán)節(jié)，使學(xué)生鞏固動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫學(xué)課程所學(xué)的理論知識(shí)。2指導(dǎo)學(xué)生熟練掌握檢疫診斷檢疫性動(dòng)物疫病和植物有害生物的最基本操作技能。培養(yǎng)分析問題和解決問題的能力。3培養(yǎng)學(xué)生樹立嚴(yán)謹(jǐn)、細(xì)致、一絲不茍的工作作風(fēng)，養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。二、實(shí)驗(yàn)的目的和基本要求1了解動(dòng)物檢疫性重要疫病的病源特性，臨床癥狀與病理變化特征、掌握其診斷與檢疫操作技術(shù)。掌握重要植物檢疫性害蟲的基本特征，掌握主要植物檢疫性病源微生物的鑒定特征及生物學(xué)特性，在植物果實(shí)上的癥狀特點(diǎn)和檢驗(yàn)方法。2要求學(xué)生做到課前預(yù)習(xí)。明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、?nèi)容及操作中注意事項(xiàng)，以保證實(shí)驗(yàn)的進(jìn)度和效果。正確進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，得出可靠的結(jié)果，寫出詳盡、規(guī)范、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。三、 實(shí)驗(yàn)考核方式及辦法1實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)老師根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況給出實(shí)驗(yàn)成績，包括：出勤、預(yù)習(xí)提問、完成情況、實(shí)驗(yàn)效果、打掃衛(wèi)生情況、實(shí)驗(yàn)報(bào)告等。2實(shí)驗(yàn)成績按20-30%比例記入課程成績。3缺做實(shí)驗(yàn)兩次或缺交實(shí)驗(yàn)報(bào)告三次者，實(shí)驗(yàn)成績已不及格論處，實(shí)驗(yàn)成績不及格者， 不得參加理論課考試。四、 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一覽表動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫學(xué)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一覽表序號(hào) 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱 實(shí)驗(yàn)類型 實(shí)驗(yàn)要求 適應(yīng)專業(yè) 學(xué)時(shí)1 布氏桿菌的實(shí)驗(yàn)室診斷（凝集反應(yīng)） 驗(yàn)證性 必作 食品質(zhì)量與安全 32 炭疽的實(shí)驗(yàn)室診斷（沉淀反應(yīng)） 驗(yàn)證性 必作 食品質(zhì)量與安全 33 雞新城疫的診斷及抗體水平檢測(cè) 綜合性 必作 食品質(zhì)量與安全 44 真菌一般形態(tài)觀察和臨時(shí)玻片的制備實(shí)驗(yàn) 綜合性 必作 食品質(zhì)量與安全 4 5 檢疫性植物害蟲的形態(tài)觀察 驗(yàn)證性 選作 食品質(zhì)量與安全 46 雞馬立克氏病病毒的分離與初步鑒定 綜合性 選作 食品質(zhì)量與安全 4五、 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的具體內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)一 布氏桿菌的實(shí)驗(yàn)室診斷實(shí)驗(yàn)1目的和要求熟悉布氏桿菌的特點(diǎn)及其實(shí)驗(yàn)室診斷方法。用活布氏桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守個(gè)人防護(hù)規(guī)則。2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理2.1布氏桿菌的形態(tài)和染色特性取新鮮的布氏桿菌病料制成涂片，用鑒別染色法進(jìn)行著染，如標(biāo)本中含有布氏桿菌時(shí)，菌體可被染成紅色，而其他細(xì)菌則被染成綠色或藍(lán)色，便于區(qū)別。2.2平板凝集反應(yīng)和乳汁環(huán)狀反應(yīng)取待檢血清與平板凝集抗原以及待檢乳汁與乳汁環(huán)狀反應(yīng)抗原（藍(lán)色或紅色）進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，并作對(duì)照，觀察凝集反應(yīng)的凝集片大小以及乳汁環(huán)狀反應(yīng)顏色的變化來進(jìn)行診斷。3需用的儀器和試劑等顯微鏡、培養(yǎng)箱、水浴鍋、移液槍、載波片、指形管、吸管等布氏桿菌平板凝集抗原、環(huán)狀乳汁反應(yīng)抗原、布氏桿菌血清、布氏桿菌乳汁、改良萋尼氏法染色液4實(shí)驗(yàn)步驟樣品涂片干燥固定改良萋尼氏法染色干燥鏡檢待檢血清分別置玻片上加布氏桿菌平板凝集抗原室溫下混合30作用3-5min記錄反應(yīng)結(jié)果。另設(shè)陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。待檢乳汁1ml分別置反應(yīng)管中加環(huán)狀乳汁反應(yīng)抗原0.05ml充分混合置37水浴1h立即判定結(jié)果。另設(shè)陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。5教學(xué)方式準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)器材，先介紹實(shí)驗(yàn)方法并演示，然后每個(gè)學(xué)生單獨(dú)操作、觀察、記錄報(bào)告結(jié)果。6考核要求觀察實(shí)驗(yàn)步驟和方法的掌握程度，評(píng)閱實(shí)驗(yàn)報(bào)告，綜合評(píng)分。7實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括題目、目的要求和原理、操作步驟、注意事項(xiàng)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論。實(shí)驗(yàn)二 炭疽桿菌的檢出和鑒定實(shí)驗(yàn)1目的和要求掌握炭疽病組織涂片診斷的要點(diǎn)，學(xué)會(huì)診斷炭疽病的實(shí)驗(yàn)方法。用活炭疽桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守個(gè)人防護(hù)規(guī)則。2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理2.1炭疽桿菌的涂片標(biāo)本觀察炭疽桿菌在組織中表現(xiàn)為單個(gè)磚頭狀或2-5個(gè)短鏈的竹節(jié)狀桿菌，用美藍(lán)染色可以觀察。2.2串珠試驗(yàn)炭疽桿菌遇有微量青霉素存在時(shí)，可生長成L型，菌體成串珠狀，而類炭疽桿菌由于對(duì)青霉素不敏感，則不具有此特性。因此可鑒定診斷。2.3Ascoli氏沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)將炭疽桿菌可疑檢樣制備成抗原，與已知高效價(jià)炭疽沉淀血清反應(yīng)，根據(jù)其沉淀環(huán)的有無可進(jìn)行鑒定。3需用的儀器和試劑等顯微鏡、培養(yǎng)箱、水浴鍋、移液槍、載波片、指形管、吸管等高效價(jià)炭疽沉淀血清、炭疽桿菌病理組織、青霉素、美藍(lán)染色液、革蘭氏染色液等4實(shí)驗(yàn)步驟病理組織涂片美藍(lán)染色液染色鏡檢繪圖取2ml37孵育3-18h的待檢菌肉湯培養(yǎng)液加入0.1-0.2單位青霉素溶液混合均勻37孵育90-120min涂片革蘭氏染色鏡檢繪圖制備抗原加入到含有高效價(jià)炭疽沉淀血清沉淀管中37放置15-30min觀察結(jié)果。另設(shè)陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。5教學(xué)方式準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)器材，先介紹實(shí)驗(yàn)方法并演示，然后每個(gè)學(xué)生單獨(dú)操作、觀察、記錄報(bào)告結(jié)果。6考核要求觀察實(shí)驗(yàn)步驟和方法的掌握程度，評(píng)閱實(shí)驗(yàn)報(bào)告，綜合評(píng)分。7實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括題目、目的要求和原理、操作步驟、注意事項(xiàng)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論。實(shí)驗(yàn)三 雞新城疫的診斷及抗體水平檢測(cè)實(shí)驗(yàn)1目的和要求掌握病毒血球凝集和血球凝集抑制試驗(yàn)的原理和操作要點(diǎn)。2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理雞新城疫血球凝集和血球凝集抑制試驗(yàn)有些病毒能凝集某種動(dòng)物的紅血球，其凝集性可為相應(yīng)的特異性抗體所抑制。根據(jù)病毒的血球凝集和血球凝集抑制反應(yīng)，可用已知病毒來檢查被檢血清中的相應(yīng)抗體，也可用已知血清來檢定未知病毒。3需用的儀器和試劑等玻璃儀器、病毒、已知陽性血清、被檢血清、雞血球4實(shí)驗(yàn)步驟被檢血清梯度稀釋（10管）分別加入適量雞血球充分混勻室溫靜置15min后每過5min觀察結(jié)果，至60min時(shí)結(jié)束記錄血球凝集價(jià)已知陽性血清、已知陰性血清梯度稀釋（各10管）分別加入病毒被檢血清和雞血球室溫靜置15min后每過5min觀察結(jié)果，至60min時(shí)結(jié)束記錄血清抑制價(jià)5教學(xué)方式準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)器材并作介紹，講解實(shí)驗(yàn)方法并演示，然后每個(gè)學(xué)生單獨(dú)操作、觀察、記錄報(bào)告結(jié)果。6考核要求將操作和結(jié)果記錄下來，評(píng)價(jià)學(xué)生是否達(dá)到了預(yù)期效果。7實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括題目、目的要求和原理、操作步驟、注意事項(xiàng)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論。實(shí)驗(yàn)四 真菌一般形態(tài)觀察和臨時(shí)玻片的制備實(shí)驗(yàn)1目的和要求通過觀察，認(rèn)識(shí)植物病源真菌的營養(yǎng)體及其變態(tài)，認(rèn)識(shí)真菌的菌絲體、有性繁殖、無性繁殖產(chǎn)生的各類孢子。2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理病源真菌的營養(yǎng)體、有性繁殖、無性繁殖產(chǎn)生的各類孢子的制片及鏡檢。真菌種類很多，其菌絲有無隔及顏色的變化，菌絲異型化結(jié)構(gòu)的有無，有性繁殖、無性繁殖產(chǎn)生的孢子形態(tài)是進(jìn)行分類鑒定的依據(jù)。3需用的儀器和試劑等挑針、刀片、木板、酒精燈、火柴、載玻片、蓋玻片、紗布、乳酚油、二甲苯、顯微鏡病源真菌培養(yǎng)無及病理組織。4實(shí)驗(yàn)步驟用挑針挑起培養(yǎng)皿內(nèi)的瓜果腐霉病菌和立枯絲核病菌或鐮刀菌的菌絲體，用蒸餾水或乳酚油作浮載劑，制臨時(shí)玻片鏡檢，觀察菌絲有無隔或顏色。取小麥矮腥黑穗病小麥粒50g，用無菌水吐溫20或其他表面活性劑處理后，離心沉淀收集沉淀液，制片鏡檢，觀察冬孢子形態(tài)。取玉米霜霉病病組織作徒手切片，挑幾塊切片置滴加了乳酚油的載玻片上，在酒精燈火焰上微微加熱，使病組織透明，蓋上蓋玻片、鏡檢，觀察卵孢子形態(tài)。5教學(xué)方式試驗(yàn)前分別接種好待檢病源真菌和準(zhǔn)備好病組織，首先讓學(xué)生觀察記錄真菌形態(tài)和病組織特征，在按要求制備各種標(biāo)本片進(jìn)行鏡檢，記錄結(jié)果，寫出報(bào)告。6考核要求觀察學(xué)生操作，評(píng)閱實(shí)驗(yàn)報(bào)告，恰當(dāng)評(píng)分。7實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括題目、目的要求、操作步驟、注意事項(xiàng)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論。實(shí)驗(yàn)五 檢疫性植物害蟲的形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)1目的和要求了解不同類群檢疫性害蟲的形態(tài)特征，危害方式，掌握重要檢疫性害蟲的特點(diǎn)并能夠進(jìn)行區(qū)別。2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理觀察不同類群害蟲的標(biāo)本檢疫性害蟲主要包括昆蟲、螨類和軟體動(dòng)物，其中昆蟲中的實(shí)蠅甲蟲蛾類等均為重要的類群，他們的形態(tài)特征、分布、生物學(xué)特性及危害方式各有不同。3需用的儀器和試劑等昆蟲、螨類和軟體動(dòng)物的標(biāo)本及幻燈片。4實(shí)驗(yàn)步驟鞘翅目檢疫性害蟲、雙翅目檢疫性害蟲、同翅目檢疫性害蟲、鱗翅目檢疫性害蟲、檢疫性植物寄生線蟲觀察，描述及繪圖。5教學(xué)方式講解各類害蟲的基本知識(shí)，指導(dǎo)學(xué)生觀察標(biāo)本及幻燈片，鑒別種類，完成作業(yè)。6考核要求根據(jù)學(xué)生的觀察和掌握程度以及實(shí)驗(yàn)報(bào)告綜合評(píng)分。7實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括題目、目的要求，代表性害蟲的描述及繪圖。實(shí)驗(yàn)六 雞馬立克氏病的診斷1目的和要求熟悉雞馬立克氏病病毒的采集及瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)初步鑒定方法。以雞馬立克氏病為例，熟悉雙向瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)的操作技術(shù)，對(duì)沉淀反應(yīng)結(jié)果紀(jì)錄，陽性的判斷有一個(gè)較明確的印象。2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理從雞馬立克氏病病雞拔取羽毛根，經(jīng)適當(dāng)處理后作為抗原，與相應(yīng)的已知的雞馬立克氏病病毒抗體在制備的瓊脂板上進(jìn)行雙向瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)，如有沉淀線出現(xiàn)，則證明抗原為雞馬立克氏病病毒，病雞患有雞馬立克氏病。3需用的儀器和試劑等可疑馬立克氏病病雞、已知馬立克氏病抗原及抗體培養(yǎng)箱、水浴鍋、移液槍、平皿、 瓊脂粉、打孔器、注射器4實(shí)驗(yàn)步驟4.1病料的處理拔取病雞的幼嫩羽毛，剪下羽髓豐富的毛根， 備用。4.2瓊脂板的制備用含有80 g/L氯化鈉的0.01 mol/L pH 7.2的PBS配制的10 g/L瓊脂溶液，置水浴中加溫，使其充分融化后，經(jīng)脫脂棉濾過，倒入平皿中，厚度為3 mm4 mm，凝固后移入冰箱中備用。4.3打孔用打孔器在瓊脂平板上打7個(gè)孔，其中央孔1個(gè)，孔徑為4 mm，外周6個(gè)孔，孔徑為3 mm，孔與孔之間為4 mm，用注射器或移液槍吸取抗體于中央孔中，用另一個(gè)注射器或移液槍吸取抗原于1孔6孔中，加抗原、抗體時(shí)，以加滿不溢出為度，將加完樣的瓊脂平板加蓋后，在室溫靜置片刻，待抗原稍微擴(kuò)散而液面下陷后，平放于帶蓋的濕盤中，置于37 的溫箱中，于24 h觀察并記錄結(jié)果。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)在分離物的待測(cè)孔和陽性抗體孔之間出現(xiàn)了明顯的白色沉淀線，并且完全融合,說明分離物中含有馬立克氏病毒。5教學(xué)方式準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)器材，先介紹實(shí)驗(yàn)方法并演示，然后每個(gè)學(xué)生單獨(dú)操作、觀察、記錄報(bào)告結(jié)果。6考核要求觀察實(shí)驗(yàn)步驟和方法的掌握程度，評(píng)閱實(shí)驗(yàn)報(bào)告，綜合評(píng)分。7實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告包括題目、目的要求和原理、操作步驟、注意事項(xiàng)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論。六、實(shí)驗(yàn)教材和主要參考資料1實(shí)驗(yàn)教材本課程為新開課程，內(nèi)容涉及面廣，課時(shí)少，未見有出版的合適教材，申請(qǐng)自編教材。2主要參考資料1.1.許偉琦主編，畜禽檢疫檢驗(yàn)手冊(cè)，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2000年 1.2.北京植物保護(hù)站主編，植物醫(yī)生手冊(cè)，中國農(nóng)業(yè)出版社，1998年 1.3.徐志剛主編，普通植物病理學(xué)試驗(yàn)指導(dǎo)，中國農(nóng)業(yè)出版社，1997年 七、教改說明及其他1本大綱偏重于動(dòng)植物微生物源疫病的檢疫檢驗(yàn)，植物蟲害稍有涉及，這主要是由于學(xué)時(shí)和實(shí)驗(yàn)