痰培養(yǎng)標(biāo)本的采集時(shí)間及頻率

呼吸道標(biāo)本的采集、送檢和接種處理一、痰培養(yǎng)標(biāo)本的采集時(shí)間及頻率是什么? 1、在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本。2、最好在清晨采集痰標(biāo)本。多數(shù)患者在清晨痰較多，且含菌量也多，尤其是對平時(shí)痰量少的患者，清晨采痰相對容易。3、對于肺炎，如果能采集到比較理想的痰液時(shí)，建議一個(gè)檢驗(yàn)周期(4天)內(nèi)只送1次痰標(biāo)本，不必連續(xù)送檢，更不建議24小時(shí)內(nèi)多次采集，除非痰液外觀性狀出現(xiàn)突然改變。4、懷疑分枝桿菌感染者，應(yīng)連續(xù)收集3天清晨痰液送檢。二、痰標(biāo)本的采集方法有哪些？1、自然咳痰法：留取前刷牙，用清水漱口3 次(或硼酸漱口)，以除去口腔內(nèi)大部分雜菌，之后先深吸氣，再用力咳出呼吸道深部的痰液吐至一次性無菌痰懷(痰培養(yǎng)適用)或?qū)Ｓ孟灲〖埡?抗酸桿菌涂片適用)內(nèi)，蓋好蓋子。如果患者痰液較深，或者黏稠難于咳出時(shí)，可采用3%5%的Nacl溶液(氣道刺激高反應(yīng)的患者如哮喘，不宜使用)、氯化銨溶液、N-乙酰-L-半胱氨酸溶液進(jìn)行霧化吸入，以幫助排痰，最佳痰液采集量為210m1，最低不能少于1ml。2、特殊取痰法：由臨床醫(yī)生采集，根據(jù)方法的不同，主要有：纖支鏡抽吸法：纖維支氣管鏡檢查可直接從肺部感染病灶獲取支氣管分泌物，操作較為安全。用支氣管鏡可直接在病灶部位采集高濃度的感染病原菌，但也不能完全避免咽喉部正常菌群污染，防污染保護(hù)套下采集的樣本具有較大價(jià)值，常用的采集方法有：采集支氣管肺泡灌洗(BAL)、經(jīng)支氣管鏡直接吸引或用防污染樣本毛刷采集!在歐美已將該方法采抜的標(biāo)本作為替代金標(biāo)準(zhǔn)力法(肺穿抽吸或活檢)用呼吸道感染的診斷中經(jīng)人氣道吸引分泌物(ETA)：經(jīng)人氣道吸引是目前臨床對不能自然咳痰的患者較為常用的力法。但由于氣管插管等侵入性操作，原有的天然屏障防御機(jī)制受到損害，以及長期平臥后氣道分泌物的墜積損傷氣管局部黏膜造成黏膜的自潔能力喪失，環(huán)境微生物?？谇痪撼Ｏ滦卸ㄖ蚕職夤苤卸辉俦３譄o菌狀態(tài)，所以此方法采集的標(biāo)本同樣會(huì)受到定植菌群的污染，也應(yīng)該在培養(yǎng)前先做合格性篩查。經(jīng)氣管穿刺吸引物(transtrachealaspiration，TTA)：由于采集到的下呼吸道標(biāo)本不受上呼吸道下常菌群的污染，曾較廣泛推薦應(yīng)用于下呼吸道細(xì)菌性感染的病原學(xué)診斷，尤其適合于厭氧菌培養(yǎng)。但此方法屬于侵入性方法，患者比較痛苦，不易接受。經(jīng)胸壁針刺吸引物 (transthoracic needle aspiration, TNA) : 對于感染性疾病，法方法只用于診斷一些原因不明的肺炎(尤其在兒童)和免疫缺陷患者的肺炎，或貼近胸壁的腫塊病灶的標(biāo)本采集；胃內(nèi)采痰法：清晨空腹時(shí)，將胃管插入胃內(nèi)，用注射器抽取胃液。適用于無自覺癥狀的肺結(jié)核患者尤其是嬰幼兒(由于嬰幼兒不會(huì)咳嗽，常將痰液存入胃中)，由于胃內(nèi)痰液中的大多數(shù)細(xì)菌被胃酸殺死，而結(jié)核桿菌可抵抗胃酸，該樣本比較適合作結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)。小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，用棉拭子伸入咽部，小兒因壓舌刺激咳嗽可噴出痰液黏在拭子上，從而獲得標(biāo)本?；蛘呦攘罨純焊改钙阶跓o扶手椅子上，將患兒頭向左俯臥平放于父母的雙腿上，醫(yī)護(hù)人員用右手輕輕拍打患兒背部，左手打開痰杯蓋子，持握痰杯的同時(shí)用手指輕輕按壓其咽喉部天突穴處，刺激其咳嗽，由于俯臥，患兒無法將痰液吞下，只能從口中吐出，此時(shí)用痰杯順手接住即可完成采樣。三、為什么痰標(biāo)本采集前應(yīng)進(jìn)行口腔清潔因?yàn)槿梭w喉以上呼吸道黏膜表面及唾液中含有大量正常菌群；口腔衛(wèi)生狀態(tài)差者，以及老年、重癥或住院患者的上呼吸道定植菌更多，致使途經(jīng)口咽部咳出的痰常受到正常菌群和定植菌的污染，影響結(jié)果的判定，所以為了減少污染，采集痰液前需進(jìn)行口腔清潔。四、痰標(biāo)本的運(yùn)送、保存、驗(yàn)收和篩選(1)痰標(biāo)本運(yùn)送和保存時(shí)應(yīng)注意什么？1、標(biāo)本采集后需盡快(小于2小叫)送至實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)送延誤可導(dǎo)致肺炎雙球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌由于不適應(yīng)外界環(huán)境和自溶現(xiàn)象而死亡; 2、延遲送檢或待處理標(biāo)本應(yīng)置于10-20“C室溫保存，既可防止苛養(yǎng)菌死亡，也能避免雜菌快速生長，保存時(shí)間不得超過24小時(shí)；3、對可疑烈性呼吸道傳染病(如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等)的患者檢驗(yàn)標(biāo)本，在采集、運(yùn)送或保存過程中必須注意生物安全防護(hù)。(2)如何驗(yàn)收篩選痰標(biāo)本? 1、申請單填寫應(yīng)完整，條碼清晰，標(biāo)識唯一。容器內(nèi)標(biāo)本與申請單相符，采集時(shí)同在規(guī)定范圍內(nèi)。如果超過24小時(shí)應(yīng)拒收。對侵入性操作獲取的標(biāo)本，須與醫(yī)生協(xié)商處理辦法，并作記錄。2、標(biāo)本容器必須符合規(guī)定，密閉無溢漏。否則拒收。3、黃色、灰色、血性、鐵銹色，渾濁、加厚，呈現(xiàn)團(tuán)塊狀的標(biāo)本為合格標(biāo)本；而無色、白色、有黑色小點(diǎn)，不清晰，呈現(xiàn)泡沫狀，有明顯食物渣滓、紙屑灰塵、泥土的為不合格標(biāo)本，應(yīng)拒收。4、顯微鏡篩查，膿細(xì)胞10/HP或復(fù)層鱗狀上皮25/LP的標(biāo)本為不合格標(biāo)本，應(yīng)退回。5、所采集的標(biāo)本類型與申請項(xiàng)不符合(如要求痰液的厭氧培養(yǎng)，未采用穿刺法取痰，未用注射器等厭氧裝置運(yùn)送；要求做痰培養(yǎng)卻使用未滅菌的抗酸桿菌專用痰盒，等等)，應(yīng)拒收。6、同一患者同時(shí)送檢多份痰液，或同一天送檢多份申請項(xiàng)目相同的痰液，只選做其中質(zhì)量較好的一份，其余痰液全部退回。7、以培養(yǎng)為申請項(xiàng)目的痰液，當(dāng)標(biāo)本量少于1ml時(shí)，應(yīng)拒收。8、拒收與退回標(biāo)本應(yīng)詳細(xì)填寫拒收記錄和反饋單(或者在信息系統(tǒng)上填寫反饋并提交)。下呼吸道感染標(biāo)本中哪些不適合做厭氧培養(yǎng)哪些標(biāo)本可以用于厭氧培養(yǎng)?為什么? 1、易被口咽部分泌物污染的標(biāo)本如咳痰、導(dǎo)痰、經(jīng)口腔或鼻腔吸引的痰液、經(jīng)人工氣道吸引的分泌物和直接經(jīng)纖支鏡吸引的下呼吸道標(biāo)本由于受到正常菌群中大量厭氧菌的污染，均不可用于厭氧培養(yǎng)。2、防污染毛刷刷出物(PSB)、經(jīng)氣管穿刺吸引物(TTA)、經(jīng)胸壁針刺吸引物(TNA)、開胸肺活檢(0LB)組織標(biāo)本，由于避免了上呼吸道正常菌群的污染和避免與氧氣接觸，可用于厭氧培養(yǎng)。下呼吸道感染合格標(biāo)本的特點(diǎn)有哪些？一般認(rèn)為，來自下呼吸道的合格標(biāo)本應(yīng)該是含膿細(xì)胞和支氣管柱狀上皮細(xì)胞較多，而受唾液污染嚴(yán)重的不合格標(biāo)本則來自頰黏膜的鱗狀上皮細(xì)胞較多。如何進(jìn)行痰標(biāo)本的合格性篩查? 痰標(biāo)本留取后應(yīng)先涂濕片，在不染色的狀態(tài)下即可進(jìn)行。將接種針前端5mm處折彎，曲成直角做成接種鉤，挑取黃豆大小痰塊，在載玻片上涂布開，使成(22)cm2大小的涂膜或者直接加(22)Cm2的蓋玻片，輕壓使痰塊展開，放在顯微鏡下觀察。根據(jù)全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程提供的標(biāo)準(zhǔn)，鱗狀上皮細(xì)胞10/LP，且白細(xì)胞25/LP者為合格痰標(biāo)本。但經(jīng)過實(shí)際觀察對于自然咳痰采集的痰標(biāo)本，白細(xì)胞25/HP(相當(dāng)于100/LP)的痰標(biāo)本與下呼吸道感染具有較高的一致性，可將一些具有滲出的非感染性的肺部疾患排除在外。而如果鱗狀上皮細(xì)胞25/LP，說明標(biāo)本可能僅僅是唾液或者被嚴(yán)重污染，應(yīng)拒收。對于既有膿性成分，又有唾液成分的混合性痰標(biāo)本如何處理? 先進(jìn)行洗凈，分離出膿性成分，再進(jìn)行鏡下篩選。如果膿性成分滿足篩選條件，痰標(biāo)本仍可使用；否則應(yīng)棄去。接種培養(yǎng)痰標(biāo)本的預(yù)處理、涂片、染色、鏡檢，消化與接種培養(yǎng)下呼吸道細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞學(xué)和細(xì)菌學(xué)和顯微鏡檢查的目的是什么？1、下呼吸道標(biāo)本涂片進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查的主要目的是對送檢標(biāo)本進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，確認(rèn)其是否應(yīng)該進(jìn)入下一步檢驗(yàn)流程；其次，可初步判斷標(biāo)本性質(zhì)屬于感染性還是肺感染性例如單純性未合并細(xì)菌感染的肺癌、硅沉著病(矽肺)、過敏性支氣管炎、哮喘、支氣管擴(kuò)張等肺病的病理性痰液就屬于非染性。分析標(biāo)本是否需要進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。2、下呼吸道標(biāo)本涂片進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢査的主要目的是通過觀察有無細(xì)菌，細(xì)菌的形態(tài)特征和染色特點(diǎn)，細(xì)菌的數(shù)量、分布，以及各種細(xì)菌與炎癥滲出的白細(xì)胞之間的相互作用(吞噬、包裹、伴行)，分析判斷標(biāo)本中與感染相關(guān)的病原菌，將其與正常菌群或定植菌相鑒別，并根據(jù)形態(tài)特征推斷其大致的種類，并有助于形態(tài)特殊微生物的快速診斷、有利于選擇恰當(dāng)?shù)氖状囵B(yǎng)基。最重要的意義是痰涂片顯微鏡檢驗(yàn)對整個(gè)痰培養(yǎng)流程起到?jīng)Q定性的導(dǎo)航作用，次日固體培養(yǎng)基上的菌落觀察相結(jié)合，篩選出有意義的菌落進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)、決定痰培養(yǎng)報(bào)告的最終準(zhǔn)確性和臨床符合率。 (2)痰涂片濕片檢查的目的是什么? 痰或下呼吸道標(biāo)本的濕片檢查可快速提供某些特殊的重要信息，尤其是對下呼吸道真菌感染(侵襲性曲霉菌感染、毛霉菌感染等)的快速診斷具有重要意義。方法：將痰液與10%KOH溶液為增強(qiáng)效果，推薦使用10%甘油水溶液配制)在載玻片混勻，蓋上蓋玻片，放到顯微鏡下暗視野觀察。當(dāng)標(biāo)本中含有大量細(xì)胞碎片時(shí)，載玻片可在火焰上過一下，輕輕按壓蓋玻片使標(biāo)本分散。當(dāng)査見鹿角樣分隔菌絲時(shí)提示曲霉菌感染，査見無分支或分支較少的無隔菌絲時(shí)可能為毛霉菌感染。(3)為什么痰培養(yǎng)標(biāo)本要進(jìn)行洗凈的預(yù)處理？如何處理? 由于于上呼吸道有大量正常菌群定植，除了侵入性操作采集的標(biāo)本(如PSB、TNA或TTA可避開上呼吸道正常菌群外，其他呼吸道標(biāo)本如自然咳痰、支氣管沖洗液、氣道吸引痰等均不可避免地被口腔菌群污染，為避免太多菌群干擾檢驗(yàn)，所與有必要對痰標(biāo)本進(jìn)行洗凈處理。方法：在一次性痰杯中加入1520ml滅菌生理鹽水，劇烈振蕩510秒(可使用振蕩器的強(qiáng)擋)，然后用接種鉤挑選出癥液中的膿性部分，或?qū)⒊恋碛诒椎哪撎敌∑^出放入另一個(gè)無菌杯中，重復(fù)上述步驟，如此洗滌2 3次，即可達(dá)到要求。(4)如何制備一張標(biāo)準(zhǔn)的痰涂片? 痰涂片對于痰培養(yǎng)的最終價(jià)值具有決定性意義，而制備好一張優(yōu)秀的痰涂片對于染色，鏡檢都具有非常大的幫助。1、革蘭染色：采用壓片法制備薄涂片。方法：從洗滌后的痰液中挑取最具有代表性的膿痰小片或從膿痰塊中最典型的部分切下一小塊用于制片大小如綠豆，置于一張潔凈載玻片的此側(cè)端，左手持玻片于火焰或滅菌紅外燈前微微加熱，此時(shí)右手取另一張冷的載玻片“十”字交叉，將痰塊夾在兩張玻片中間，按壓使之充分展開，壓住不要松開，向右側(cè)緩慢勻速地拖動(dòng)，即可完成一張?zhí)低科?。如此，制備的涂片，薄而均勻，便于染色脫色，由于?xì)胞充分展開，便于觀察胞內(nèi)吞噬現(xiàn)象。2、抗酸染色：采用抹片法制備厚涂片。方法：使用去掉棉頭的棉簽斷端挑取痰液的膿性部分在載玻片中央作畫圓狀涂抹，厚度以能透過涂膜，看清背面的文字為宜。(5)如何染片和閱片? 1、經(jīng)典染色方法各種教科書和各個(gè)版本的規(guī)程上都詳細(xì)敘述。這里介紹經(jīng)過本章節(jié)作者改良后的革蘭染色方法，試劑使用書籍上介紹的經(jīng)典革蘭染色液，將碘液改為Albert碘液對倍稀釋，脫色液使用3：7(v/v)的丙酮酒精溶液，復(fù)染液改為1：5(v/v)稀釋的碳酸復(fù)紅。染色過程：滴加結(jié)晶紫染色液覆蓋涂片染色1分鐘，蒸餾水沖洗；甩掉多余水滴，滴加碘液覆蓋涂片12分鐘媒染(室溫低于20時(shí)作相應(yīng)延長)，蒸餾水沖洗；甩掉多余水滴，滴加丙酮酒精液脫色時(shí)，需不斷晃動(dòng)玻片，使液體迅速均勻覆蓋涂片，12秒后倒掉，不沖洗，再次滴加脫色液，晃動(dòng)覆蓋，脫色34秒后倒掉，仍不沖洗，又滴加脫色液進(jìn)行第三次脫色，此時(shí)緩慢晃動(dòng)玻片，脫色46秒后蒸餾水沖洗；甩掉多余水滴，滴加稀釋復(fù)紅，晃動(dòng)玻片混勻染液后覆蓋涂片復(fù)染1分鐘用蒸餾水沖洗，自然干燥或?yàn)V紙吸干后上油鏡。目前，各種商品化染色液層出不窮，質(zhì)量良莠不齊，配方均進(jìn)行了不同程度的改動(dòng)，其說明書要求的染色操作流程各不相同。然而，為了達(dá)到最佳染色效果，使用新廠家的染色液時(shí)多必須進(jìn)行流程摸索。除了使用混合菌進(jìn)行質(zhì)控以外，還應(yīng)該使用痰涂片、膿液涂片、血涂片，以及糞便涂片進(jìn)行實(shí)際染色效果驗(yàn)證，找出一個(gè)最佳染色流程。流程確定后，微生物室所有成員必須嚴(yán)格執(zhí)行該流程，不允許任意改動(dòng)。2、痰涂片閱片能力的培養(yǎng)，是一項(xiàng)逐漸積累的過程，需要經(jīng)過長年累月反復(fù)的強(qiáng)化訓(xùn)練才能造就。良好的訓(xùn)練方案應(yīng)將閱片與次日的菌落觀察相結(jié)合，逐漸建立起理性認(rèn)識。另外，由于痰涂片中的細(xì)菌經(jīng)過抗生素和人體免疫因子(白細(xì)胞溶酶、補(bǔ)體、抗體)的影響后，其形態(tài)與對數(shù)期純培養(yǎng)物不太一致，需要總結(jié)各種常見細(xì)菌的形態(tài)變異特點(diǎn)。使用藥敏試驗(yàn)中出于亞抑制狀態(tài)下的細(xì)菌涂片染色鏡檢能快速總結(jié)經(jīng)驗(yàn)。所謂亞抑制狀態(tài)細(xì)菌即是指，處于抑菌環(huán)邊緣或比MIC低一個(gè)梯度濃度孔中的細(xì)菌。閱片技巧：1、先在低倍鏡下尋找適合閱片的區(qū)域，該區(qū)域膿細(xì)胞呈團(tuán)塊狀分布，集中而不稠密，且周圍無鱗狀上皮細(xì)胞或無大量呈團(tuán)狀分布的細(xì)菌球。2、認(rèn)真搜尋膿細(xì)胞胞質(zhì)中有無吞噬的細(xì)菌或真菌孢子，注意細(xì)菌/真菌的染色排列特征(如成雙、鏈狀、并行、分枝、葡萄狀、放射狀、文字形、柵欄狀、條索狀等)，菌體特征(如大小、粗細(xì)、長短、扭曲)；有無真菌菌絲團(tuán)塊或者放線菌菌絲被結(jié)節(jié)狀分布的炎性細(xì)胞包裹。3、區(qū)別吞噬與黏附的方法：位于細(xì)胞核上的細(xì)菌為黏附；細(xì)菌與細(xì)胞核不在同一層面上的為黏附；多種不同形態(tài)和染色特征的細(xì)菌糾結(jié)成球狀者為黏附；鏈球菌同一條鏈，部分在細(xì)胞上，部分在細(xì)胞外時(shí)為黏附；真菌在膿細(xì)胞中未產(chǎn)生占位現(xiàn)象的為黏附；革蘭陽性細(xì)菌染色深淺與胞外菌完全相同時(shí)考慮為黏附。胞內(nèi)菌體周圍有一圈微弱狹窄淡染區(qū)的為吞噬；由于細(xì)胞的位阻效應(yīng)導(dǎo)致胞內(nèi)菌染色相對于胞外角偏淡，加之受溶酶體的破壞，胞內(nèi)G細(xì)菌染色呈現(xiàn)斑駁不均現(xiàn)象；胞內(nèi)G桿菌菌體具有膨大趨勢；真菌孢子會(huì)將細(xì)胞核擠到細(xì)胞的邊緣，形成月牙形。4、觀察細(xì)菌與細(xì)胞分布的相關(guān)性，假如某種形態(tài)的細(xì)菌在片中，細(xì)菌多的地方細(xì)胞少，而細(xì)胞多的地方細(xì)菌少，那么這種形態(tài)的細(xì)菌多為定植菌；反之即使沒有吞噬，也應(yīng)考慮為感染菌；對于產(chǎn)莢膜的細(xì)菌，吞噬現(xiàn)象的觀察比較困難，采用分布相關(guān)性(即伴行行為)比較容易找到感染菌。另外，對于產(chǎn)生莢膜的細(xì)菌，只要認(rèn)真搜尋，莢膜低表達(dá)或莢膜丟失的菌體，也能在胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)。5、絲狀真菌和諾卡菌以及其他放線菌由于菌體較大，其產(chǎn)生的炎性反應(yīng)為包裹顯現(xiàn)，即真菌菌絲團(tuán)塊或者丁放線菌菌絲被結(jié)節(jié)狀分布的大量炎性細(xì)胞包裹。6、特殊細(xì)菌的辨認(rèn)：流感桿菌在膿細(xì)胞內(nèi)為G-細(xì)小桿菌，灰塵樣分布，往往一個(gè)細(xì)胞中吞噬大量的細(xì)菌；卡他莫拉菌(以及其他莫拉菌)為G-雙球菌，胞外細(xì)菌量大，而胞外菌分布較少，且無莢膜；鮑曼不動(dòng)桿菌為G-球桿菌，眼鏡形，由于產(chǎn)莢膜，其分布特點(diǎn)是胞內(nèi)菌較胞外菌少；金黃色葡萄球菌在痰涂片中容易辨認(rèn)，胞內(nèi)成對或葡萄狀排列，染色比胞外菌偏淡；銅綠假單胞菌為G-細(xì)而剛直的桿菌，散在排列；黏液性銅綠則在胞外形成明顯淡染的黏液層，大量細(xì)菌聚集成片狀分布；肺炎克雷伯菌為G-粗大桿菌，成對排列，胞外菌多有厚重莢膜；其他腸桿菌科細(xì)菌及氣單胞菌為G-規(guī)則桿菌，形態(tài)與大腸埃希菌類似；肺炎鏈球菌為G-矛尖狀雙球菌，胞外菌有厚重莢膜，而胞內(nèi)菌染色偏淡且斑駁不清，容易漏診；嗜麥芽寡養(yǎng)単胞菌為G-細(xì)長桿菌，并行排列形成筷子樣，菌體往往有彎曲；化膿性鏈球菌在涂片中為G+長鏈狀排列的球菌，菌體為正圓形，比葡萄球菌小，咆內(nèi)菌染色偏淡，易出現(xiàn)斑駁。隱球菌在校涂片中為G-大球形真菌孢子，周圍向不著色的莢膜，在涂片中染色較淡，易漏診，咆內(nèi)菌著色斑駁，或形成不看色的球形空泡，在細(xì)胞內(nèi)具明顯的占位，細(xì)胞核被排擠到邊緣形成月牙形。(6)為什么痰培養(yǎng)標(biāo)本要進(jìn)行均質(zhì)化的預(yù)處理？如何處理? 答：一般情況下病原菌感染肺部，其部位在下呼吸道深部，炎性滲出物為了將炎癥局限，病原菌被包裹在其中，由于肺屬于與外界環(huán)境單向相通的臟器，滲出的病理產(chǎn)物不易及時(shí)排出，感染灶中炎癥滲出物反復(fù)包裹，層層疊疊，病原菌往往位于包裹物的最里層，位于膿細(xì)胞胞質(zhì)中。若直接接種于培養(yǎng)基上，包裹物中有價(jià)值的細(xì)菌很難突破包裹在培養(yǎng)基上生長，而痰的均質(zhì)化有助于包裹物內(nèi)部細(xì)菌的暴露，可提高感染菌的陽性檢出率。方法：痰均質(zhì)化法以胰酶均質(zhì)化為多見。其方法為：在盛裝痰標(biāo)本的容器中加入等量用無菌P7.6的磷酸鹽緩沖液(PBS)配制的l%的胰蛋白酶溶液，放置35培養(yǎng)箱內(nèi)消化90分鐘即能使痰液均質(zhì)化，而對細(xì)菌培養(yǎng)無影響。另外，可使用無菌生理鹽水代替滅菌PBS，但消化效能較低，需要延長消化時(shí)間至120分鐘。此外，還可用玻璃組織研磨器。(7)痰標(biāo)本培養(yǎng)是否可用肉湯增菌或高選擇性培養(yǎng)基?為什么? 答：不主張采用肉湯増菌或高選擇性培養(yǎng)基等極端的方法。因?yàn)槿鉁珘埦笈c感染不相關(guān)的細(xì)菌也一同增殖，很多時(shí)候與感染不相關(guān)的污染菌生長速度大于H標(biāo)細(xì)菌，導(dǎo)致目標(biāo)細(xì)菌由于競爭抑制而無法分離。再則，增菌后標(biāo)本的原始狀態(tài)發(fā)生改變，最終導(dǎo)致培養(yǎng)結(jié)果無法代表患者體內(nèi)的真實(shí)狀態(tài)，使痰培養(yǎng)失去應(yīng)有的診斷價(jià)值。而高選擇性培養(yǎng)基則又是另一個(gè)極端。由于導(dǎo)致肺部感染的細(xì)菌多種多樣，目的菌常常未知，進(jìn)行痰培養(yǎng)時(shí)，我們的分離目的并不明確，采用高選擇性培養(yǎng)基將會(huì)因?yàn)榕囵B(yǎng)基的選擇性過強(qiáng)而抑制真正有價(jià)值的微生物，導(dǎo)致嚴(yán)重的漏診。因而高選擇性培養(yǎng)基在痰培養(yǎng)中不常使用。除非是有目的性地選擇分離某些特定的微生，例如嗜肺軍團(tuán)菌。 (8)痰標(biāo)本分離培養(yǎng)基的選擇、接種及培養(yǎng)結(jié)果分析(菌落觀察)如何進(jìn)行? 答：1、一般細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)同時(shí)劃區(qū)接種：血平板：適用于分離肺炎鏈球菌和其他細(xì)菌。加抗生素的巧克力平板：適用于分離嗜血桿菌。麥康凱/中國藍(lán)平板：適用于分離革蘭陰性桿菌；CHROMagar或含抗毒素的SDA：適合于分離曲毒菌、毛霉菌或者罕見感染的酵母樣真菌，如隱球菌。2、分離培養(yǎng)：血平板和巧克力平板置于5%CO2環(huán)境，麥康凱平板中國藍(lán)平板置大氣環(huán)境，于35孵育；而CHROMagar