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神經(jīng)干動(dòng)作電位及其速度測(cè)定,蚌埠醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心,坐骨神經(jīng)干不應(yīng)期測(cè)定,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)神經(jīng)干標(biāo)本的制備。觀察坐骨神經(jīng)干的單相、雙相動(dòng)作電位、雙向性傳導(dǎo)并測(cè)定其傳導(dǎo)速度。觀察機(jī)械損傷對(duì)神經(jīng)興奮和傳導(dǎo)的影響學(xué)習(xí)絕對(duì)不應(yīng)期和相對(duì)不應(yīng)期的測(cè)定方法了解蛙類(lèi)坐骨神經(jīng)干產(chǎn)生動(dòng)作電位后其興奮性的規(guī)律性變化,實(shí)驗(yàn)原理,用電刺激神經(jīng),在刺激電極的負(fù)極下神經(jīng)纖維膜內(nèi)產(chǎn)生去極化,當(dāng)去極化達(dá)到閾電位,膜上產(chǎn)生一次可傳導(dǎo)的快速電位反轉(zhuǎn),即動(dòng)作電位;神經(jīng)干由許多神經(jīng)纖維組成。其動(dòng)作電位是以膜外記錄方式記錄到的復(fù)合動(dòng)作電位;如果兩個(gè)引導(dǎo)電極置于興奮性正常的神經(jīng)干表面,興奮波先后通過(guò)兩個(gè)電極處,便引導(dǎo)出兩個(gè)方向相反的電位波形,稱(chēng)雙相動(dòng)作電位。,雙相動(dòng)作電位(BiphasicActionPotential),動(dòng)作電位的傳導(dǎo)(ConductionofAP),動(dòng)作電位以局部電流的形式傳導(dǎo),實(shí)驗(yàn)原理,如果兩個(gè)引導(dǎo)電極之間的神經(jīng)纖維完全損傷,興奮波只通過(guò)第一個(gè)引導(dǎo)電極,不能傳至第二個(gè)引導(dǎo)電極,則只能引導(dǎo)出一個(gè)方向的電位偏向波形,稱(chēng)單向動(dòng)作電位。,單相動(dòng)作電位(MonophasicActionPotential),刺激偽跡(Stimulusartifact),刺激偽跡是刺激電流通過(guò)導(dǎo)電介質(zhì)擴(kuò)散至兩引導(dǎo)電極而形成的電位差信號(hào)。,動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度的測(cè)定MeasurementofConductionVelocityofAP,+,S,t,刺激器,輸入通道,R1-Rr1+R2-R2+,實(shí)驗(yàn)原理,神經(jīng)組織在接受一次刺激產(chǎn)生興奮后,其興奮性將會(huì)發(fā)生規(guī)律性的變化,依次經(jīng)過(guò)絕對(duì)不應(yīng)期、相對(duì)不應(yīng)期、超常期和低常期,然后回到正常水平。采用兩次脈沖,通過(guò)調(diào)節(jié)兩次脈沖間隔,可測(cè)得坐骨神經(jīng)的絕對(duì)不應(yīng)期和相對(duì)不應(yīng)期。,材料和方法材料,蟾蜍或蛙;蛙板、探針、粗剪刀、細(xì)剪刀、尖鑷子、玻璃分針、大頭針、培養(yǎng)皿、滴管、瓷碗、鋅銅弓或鋁銀電極、任氏液、鐵支架,張力換能器,瓷碗,培養(yǎng)皿,微機(jī)生物信號(hào)采集處理儀等。,1.坐骨神經(jīng)干標(biāo)本的制備,1.1毀腦脊髓1.2剪除軀干上部及內(nèi)臟1.3剝皮(之后洗凈雙手和全部手術(shù)器械)1.4完成坐骨神經(jīng)標(biāo)本1.4.1分離兩腿1.4.2游離坐骨神經(jīng)1.4.3完成坐骨神經(jīng)標(biāo)本,材料和方法方法,剪除軀干上部及內(nèi)臟圖4-1-4剝?nèi)テつw,標(biāo)本的制備,坐骨神經(jīng)干制備,蟾蜍毀腦脊髓,去上肢和內(nèi)臟,下肢剝皮浸于任氏液中。,蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上,剪去尾椎;標(biāo)本腹面向上,用玻璃分針?lè)蛛x脊柱兩側(cè)神經(jīng)叢,用線在近脊柱處結(jié)扎,剪斷神經(jīng);將神經(jīng)干從腹面移向背面。標(biāo)本背面向上固定,從大腿至跟腱分離坐骨神經(jīng)。坐骨神經(jīng)標(biāo)本置任氏液中備用。,2.儀器連接,微機(jī)生物信號(hào)處理系統(tǒng),神經(jīng)干標(biāo)本盒。,S+S-ER1-R1+R2-R2+,神經(jīng)干標(biāo)本盒兩對(duì)引導(dǎo)電極分別接微機(jī)生物信號(hào)處理系統(tǒng)1、2通道,采樣頻率,通道模式,掃描速度,靈敏度,濾波頻率,時(shí)間常數(shù),2.1傳導(dǎo)速度的測(cè)定(及參數(shù)設(shè)置),2.2不應(yīng)期的測(cè)定(及參數(shù)設(shè)置),采用雙刺激模式,逐步增加波間隔第二個(gè)動(dòng)作電位出現(xiàn)時(shí)的刺激間隔及第二個(gè)動(dòng)作電位振幅剛開(kāi)始與第一個(gè)相等時(shí)的刺激間隔,3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果,RM6240系統(tǒng)蟾蜍坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位引導(dǎo)實(shí)驗(yàn)界面,單向、雙向動(dòng)作電位的波形特點(diǎn)動(dòng)作電位的傳導(dǎo)速度、神經(jīng)干不應(yīng)期時(shí)程,注意事項(xiàng),神經(jīng)盡可能分離得長(zhǎng)一些標(biāo)本制備時(shí)要注意保持標(biāo)本的濕潤(rùn)標(biāo)本制備時(shí)盡量避免使用尖銳的器械,以免損傷神經(jīng)使用電刺激時(shí),刺激強(qiáng)度不宜太大,否則可能導(dǎo)致神經(jīng)的損傷注意接地,防止干擾,單相、雙相動(dòng)作電位的記錄,1.實(shí)驗(yàn)步驟,1.3單相動(dòng)作電位參數(shù)測(cè)定,1.1末梢引導(dǎo),條件:刺激電壓1.2,刺激波寬0.1ms,1.2刺激強(qiáng)度(U)與動(dòng)作電位振幅(A)的關(guān)系,條件:刺激電壓0.22V,刺激波寬0.1ms,2.1中樞端引導(dǎo),2.觀察(observations),條件:刺激電壓1.2V,刺激波寬0.1ms,2.2末梢端引導(dǎo),條件:刺激電壓1.2V,刺激波寬0.1ms,Dp1,Dp2,Ap1,Ap2,Ap1,Ap2,2.3傳導(dǎo)速度測(cè)定,條件:刺激電壓1.2V,刺激波寬0.1ms,SR1-R2-,t,2.4單相動(dòng)作電位參數(shù)測(cè)定,Dm,Am,Am,Dm,2.5刺激強(qiáng)度(U)與動(dòng)作電位振幅(A)的關(guān)系,刺激強(qiáng)度與動(dòng)作電位振幅的關(guān)系,Maximalstimulus,Thresholdstimulus,要求:測(cè)定閾強(qiáng)度和最大刺激強(qiáng)度,刺激強(qiáng)度與動(dòng)作電位振幅的關(guān)系曲線,條件:刺激電壓0.12,刺激波寬0.1ms,神經(jīng)干引導(dǎo)所獲得復(fù)合動(dòng)作電位(compoundactionpotential(CAP)與單神經(jīng)纖維引導(dǎo)的動(dòng)作電位的性質(zhì)有所不同。,3.結(jié)果(results),3.2刺激電壓1.2V,波寬0.1ms時(shí),動(dòng)作電位正相振幅Ap1smV大于負(fù)相振幅Ap2smV,兩者有顯著性差異(p0.05);動(dòng)作電位正相時(shí)程Dp1sms顯著短于負(fù)相時(shí)程Dp2sms,兩者有顯著性差異(p0.05);單相動(dòng)作時(shí)程Dmsms顯著長(zhǎng)于雙相動(dòng)作電位正相Dp1sms,兩者有顯著性差異(p0.05),見(jiàn)圖1、圖2和表1。,3.4在刺激電壓低于Uthreshold時(shí),測(cè)不到動(dòng)作電位;刺激電壓從Uthreshold增加至Umaximal,動(dòng)作電位振幅呈曲線增長(zhǎng),刺激電壓高于Umaximal動(dòng)作電位振幅不再增長(zhǎng),見(jiàn)圖3。,3.5刺激電壓1.2V,3molKCl處理前,動(dòng)作電位振幅為Ac1smV,處理后5min,動(dòng)作電位振幅為At1smV,與處理前比有顯著性差異(p0.05),見(jiàn)表3。,4.討論,刺激電壓從Uth增加至Umax,神經(jīng)干動(dòng)作電位振幅隨刺激電壓增加而增高。神經(jīng)干動(dòng)作電位為什么不具有“全或無(wú)”特點(diǎn)。,單相、雙相動(dòng)作電位的形成動(dòng)作電位傳導(dǎo)的速度測(cè)定的原理和常見(jiàn)的影響因素絕對(duì)不應(yīng)期和相對(duì)不應(yīng)期形成的原因影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主要干擾因素,在一定范圍內(nèi),神經(jīng)干動(dòng)作電位幅度隨刺激強(qiáng)度增大而增大,是否與動(dòng)作電位的“全或無(wú)”矛盾?刺激神經(jīng)干時(shí),由于任氏液是導(dǎo)電液,刺激電流可沿神經(jīng)干表面的任氏液傳導(dǎo)而被記錄,如何與神經(jīng)干動(dòng)作電位區(qū)別?什么叫刺激偽跡,是怎樣發(fā)生的?怎樣鑒別刺激偽跡和神經(jīng)干動(dòng)作電位?神經(jīng)被夾傷或經(jīng)KCl溶液處理后,動(dòng)作電位的第二相為何消失?引導(dǎo)電極調(diào)換位置后,動(dòng)作電位波形有無(wú)變化?為什么?能否用從刺激電極的陰極到第一個(gè)引導(dǎo)電極的距離測(cè)算神經(jīng)動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度?如何測(cè)得?,5.思考題,6.根據(jù)你的結(jié)果推測(cè)蛙的坐骨神經(jīng)干中的神經(jīng)纖維主要屬于那種類(lèi)型的纖維?7.將神經(jīng)干標(biāo)本置于4的任氏液中浸泡后,神經(jīng)沖動(dòng)的傳導(dǎo)速度有何改變?為什么?什么是絕對(duì)不應(yīng)期和相對(duì)不應(yīng)期?刺激落到相對(duì)不應(yīng)期內(nèi)時(shí),其動(dòng)作電位

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