淺析亮丙瑞林的固相合成分析畢業(yè)論文.doc

畢業(yè)論文淺析亮丙瑞林粗品合成工藝的研究Analysis of leuprolide crude synthesis technology of班 級(jí) 學(xué)生姓名： 學(xué) 號(hào)： 指導(dǎo)教師： 職 稱： 實(shí)習(xí)單位：徐州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 徐州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）任務(wù)書課題名稱淺析亮丙瑞林粗品合成 工藝的研究 課題性質(zhì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)類班 級(jí) 生化102班 指導(dǎo)教師 導(dǎo)師職稱 一選題意義及背景本課題從亮丙瑞林粗品的固相合成實(shí)驗(yàn)方面探索最佳的合成工藝，通過設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，分別以HB、HOBT、TBTU三種縮合劑的合成連接實(shí)驗(yàn)作為依據(jù)，找尋和比較在三種不同條件下的亮丙瑞林合成收率，得出在縮合劑間的最佳合成工藝。二畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）主要內(nèi)容：1 亮丙瑞林藥品的簡要介紹2 早期亮丙瑞林粗品的合成工藝比較和優(yōu)缺點(diǎn)3 設(shè)計(jì)亮丙瑞林粗品的合成對(duì)比實(shí)驗(yàn)4. 亮丙瑞林粗品的HPLC的結(jié)論分析5. 實(shí)驗(yàn)工藝分析三計(jì)劃進(jìn)度：110.18 10.25：利用網(wǎng)絡(luò)查閱課題相關(guān)資料（包括亮丙瑞林的臨床藥物應(yīng)用、亮丙瑞林的肽鏈結(jié)構(gòu)分析、亮丙瑞林常用合成工藝研究、固相合成原理等）。210.26 10.28：根據(jù)所查資料，結(jié)合本課題，設(shè)計(jì)實(shí)施課題的方案，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)。310.29 11.11：按照設(shè)計(jì)方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。411.12 11.19 答辯：完成畢業(yè)論文及答辯。四畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）結(jié)束應(yīng)提交的材料：1、課題實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案； 2、畢業(yè)論文；3、實(shí)驗(yàn)記錄本。指導(dǎo)教師 教研室主任 2012 年 11月 11 日2012 年 11 月 11 日論真實(shí)性承諾及指導(dǎo)教師聲明學(xué)生論文真實(shí)性承諾本人鄭重聲明：所提交的作品是本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，內(nèi)容真實(shí)可靠，不存在抄襲、造假等學(xué)術(shù)不端行為。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含有其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式表明。如被發(fā)現(xiàn)論文中存在抄襲、造假等學(xué)術(shù)不端行為，本人愿承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任和一切后果。 畢業(yè)生簽名： 日期：指導(dǎo)教師關(guān)于學(xué)生論文真實(shí)性審核的聲明本人鄭重聲明：已經(jīng)對(duì)學(xué)生論文所涉及的內(nèi)容進(jìn)行嚴(yán)格審核，確定其內(nèi)容均由學(xué)生在本人指導(dǎo)下取得，對(duì)他人論文及成果的引用已經(jīng)明確注明，不存在抄襲等學(xué)術(shù)不端行為。 指導(dǎo)教師簽名： 日期：摘 要通過對(duì)亮丙瑞林粗品的認(rèn)識(shí)和合成工藝研究，分析以往合成方法的優(yōu)缺點(diǎn)從而探索新的最佳工藝合成條件。利用多肽固相合成法中的Fmoc合成法，根據(jù)氨基酸的脫水縮合的肽鏈延長機(jī)理合成亮丙瑞林粗品。研究氨基酸和氨基酸之間以及氨基酸和之間HProCTC樹脂(CTC樹脂：2-氯三苯甲基氯樹脂)的縮合反應(yīng)。通過使用不同的縮合劑HB,DIC,HOBT之間的對(duì)比反應(yīng)，探索在三種縮合劑之間合成的最佳合成工藝。關(guān)鍵詞 固相多肽Fmoc合成法；亮丙瑞林；縮合反應(yīng)；縮合劑 Abstract The Fmoc synthesis method using the solid phase peptide synthesis method, leuprolide crude product was synthesized according to dehydration condensation of the amino acids in the peptide chain extension mechanism. Between the amino acids and amino acids as well as amino acids and between the H-Pro-CTC resin (CTC resin :2-chloro-trityl chloride resin),a condensation reaction. By using a different condensing agent HB, the contrast between the reaction of DIC, HOBT, Discover synthesis between the three condensing agent in optimum synthesis. Keywords: Solid-phase peptide Fmoc synthesis method; leuprolide ; condensation reaction ;condensing agent目 錄摘 要IAbstractII引 言11.1 亮丙瑞林的介紹11.2 亮丙瑞林的生產(chǎn)方法11.3本文合成方法2第二章 實(shí)驗(yàn)部分32.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料32.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器32.1.2主要材料32.2全保護(hù)肽片段的制備32.2.1制備前的準(zhǔn)備32.2.2全保護(hù)肽片段的制備步驟32.3 全保護(hù)肽片段的切割42.3.1 全保護(hù)切割液的配置42.3.2 全保護(hù)的切割過程52.4 肽片段C-末端的乙胺化4525肽鏈的側(cè)鏈切割52.7粗品分析62.8 HPLC分析6第三章 實(shí)驗(yàn)工藝分析9參考文獻(xiàn)10附錄11一、本文使用的部分英文字母縮寫的中文對(duì)照：11二、二十種常用氨基酸的分子量11致 謝13 引 言1.1 亮丙瑞林的介紹醋酸亮丙瑞林是一種常用的激素類抗惡性腫瘤藥物，為促性腺素釋放激素(LHRH，一種十肽)的九肽合成類似物亮丙瑞林的醋酸鹽，屬LH-RH拮抗劑，LHRH是由下丘腦產(chǎn)生，它能促使垂體前吸釋放促性腺激素及卵泡刺激素 (FSH)和黃體生成激素(LH)。本品因結(jié)構(gòu)類似LHRH，作用于垂體前葉后也具有促使FSH、LH的釋放功能，從而提高睪丸酮和二氫睪丸酮的血清濃度。臨床上用于晚期前列腺癌的維持治療，但在應(yīng)用本品約1周后，有活性的受體數(shù)目就會(huì)減少，促性腺激素的分泌也會(huì)減少。在24周后，睪丸酮和二氫睪丸酮的濃度可降至去勢水平。當(dāng)停藥后，促性腺激素和雄激素可回升至正常濃度。臨床上具有很大的應(yīng)用價(jià)值 1。1.2 亮丙瑞林的生產(chǎn)方法在亮丙瑞林的生產(chǎn)方法中，主要有固相合成方法、液相合成方法以及固液結(jié)合合成方法。 在液相合成方法中，由于液相合成法中的每一步產(chǎn)物都需純化，所以液相的合成方法相對(duì)來說比較繁瑣，增加多肽合成的生產(chǎn)成本，不太適合生產(chǎn)醋酸亮丙瑞林。由此而產(chǎn)生的固相合成法將多肽羧基端的氨基酸固定在不溶性樹脂上，然后在此樹脂上依次偶聯(lián)氨基酸，延長肽鏈、合成多肽。在固相法中，每步反應(yīng)后只需簡單地洗滌樹脂，便可達(dá)到純化目的。再經(jīng)過有效時(shí)間的研究進(jìn)展后，固相合成法又分為了Fmoc固相合成法和Boc固相合成法，在Boc固相合成法中，反復(fù)地用酸來脫保護(hù)，這種處理帶來了一些問題：如在肽與樹脂的接頭處，當(dāng)每次用50%TFA脫Boc基時(shí)，有約1.4%的肽從樹脂上脫落，合成的肽鏈越長，這樣的損失越嚴(yán)重；此外，酸處理會(huì)引起側(cè)鏈的一些副反應(yīng)，Boc固相合成法尤其不適于合成含有色氨酸等對(duì)酸不穩(wěn)定的肽類。而相對(duì)于含有色氨酸的醋酸亮丙瑞林的合成，恰好含有色氨酸，所以Boc合成法并不適合亮丙瑞林的合成。在Fmoc的合成方法中，由于采用了堿可脫除的Fmoc為-氨基的保護(hù)基，側(cè)鏈的保護(hù)采用TFA可脫除的叔丁氧基等，樹脂采用90%TFA可切除的對(duì)烷氧芐醇型樹脂，最終的脫保護(hù)避免了強(qiáng)酸處理。使得合成含有色氨酸的多肽有了全新的合成方法，同時(shí)減少了生產(chǎn)成本，也提高了這些肽鏈的合成收率，對(duì)于亮丙瑞林的生產(chǎn)合成，也提供了很多的捷徑。對(duì)于新興不久的固液結(jié)合合成的方法中，由于吸收了固相和液相的優(yōu)點(diǎn)和根據(jù)特殊肽鏈的合成需求而產(chǎn)生的技術(shù)有效地改善和彌補(bǔ)了固相和液相合成方法中的不足，對(duì)于多肽合成上的發(fā)展也有了很大方面的精進(jìn)，但是由于成本相對(duì)較高，在合成價(jià)格普通的藥物上面很少使用，而對(duì)于亮丙瑞林的合成，F(xiàn)moc合成方法較為合適1.3本文合成方法本文主要介紹一種Fmoc的合成方法，以CTC樹脂為起始原料，按照固相合成的方法依次連接具有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，獲得保護(hù)九肽樹脂，再通過全保護(hù)切割出去樹脂，獲得全保護(hù)的九肽。然后通過加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基（PyBOP）、二異丙基乙胺(DIEA)和二氯甲烷（DCM）連接C端的NHET，再次通過切割暴露肽鏈的活性基團(tuán)，獲得亮丙瑞林的粗品。第二章 實(shí)驗(yàn)部分本實(shí)驗(yàn)通過采用不同的縮合劑（HBTU、HOBT、TBTU）在相同的工藝條件下進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，了解和探索最佳的亮丙瑞林合成反應(yīng)方法。2.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 實(shí)驗(yàn)所需儀器如表2-1所示。上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司電子天平鄭州長城工貿(mào)SHB-III循環(huán)水式多用真空泵國華TBZ-82A恒溫振蕩器瑞江RJ-TDC-40B低速離心機(jī)（無錫市瑞江分析儀器有限公司）日本SHIMADZU公司LCMS-2020質(zhì)譜儀日本SHIMADZU公司高效液相色譜儀SPD-10AVP紫外可變波長檢測器LC-10AVTP泵表2-1 實(shí)驗(yàn)所需儀器表2.1.2主要材料 CTC樹脂(2-Chlorotrityl chloride resin，2-氯三苯甲基氯樹脂) 2；二異丙基碳二亞胺(DIC)、DIC)、HBTU、HATU、TBTU、HOBt、二異丙基乙胺(DIEA)、三氟乙酸(TFA)、三異丙基硅烷(TIS)(上海吉爾生化公司)；乙胺(Sigma公司)；二甲基甲酰胺(DMF)、吡啶(Py)、哌啶(Pip)； Fmoc氨基酸脯氨酸、精氨酸、亮氨酸、D型亮氨酸、酪氨酸、絲氨酸、色氨酸、組氨酸、焦谷氨酸。2.2全保護(hù)肽片段的制備2.2.1制備前的準(zhǔn)備（1）取三支反應(yīng)器用甲醇洗凈，放入烘箱烘干待用；（2）連好反應(yīng)裝置，保持裝置的氣密性，檢查橡膠管的老化情況；（3）取氮?dú)庖黄?，連通好真空泵和抽濾瓶，用來收取廢液 2.2.2全保護(hù)肽片段的制備步驟 （1）確定要制備的亮丙瑞林的數(shù)量，本次實(shí)驗(yàn)以0.3mmol為例，根據(jù)氨基酸：縮合劑：堿試劑=3:2.85:6的比例確定每次需要加入的反應(yīng)物的量；（2）取已制備好的CTC樹脂（取代度為0.45）3，按照所要制備的亮丙瑞林粗品的量確定要稱取的樹脂質(zhì)量（根據(jù)樹脂質(zhì)量=粗品的mmol數(shù)/樹脂取代度）為0.67g，稱取3份，分別裝入三支反應(yīng)器內(nèi)，貼上標(biāo)簽編號(hào)1 2 3；（3）將三支反應(yīng)器放到裝置上，用DCM浸泡20-30min，使樹脂膨脹，方便后續(xù)氨基酸的連接，通入少量氮?dú)鈹嚢瑁ㄏ挛耐舛际侵傅氖峭ㄈ氲獨(dú)猓厥饬碜髡f明）；（4） 三個(gè)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)分別用不同的堿和縮合劑連接,1號(hào)反應(yīng)器用HB、NMM連接，2號(hào)反應(yīng)器用HOBT、DIC連接，3號(hào)反應(yīng)器用HOBT、TBTU、DIEA連接；（5） 根據(jù)第一步確定的縮合劑、氨基酸量用天平稱取所需質(zhì)量（誤差0.004g）（6） 樹脂浸泡的時(shí)間滿足條件后，抽出DCM，加入哌啶對(duì)載體樹脂進(jìn)行去保護(hù)，時(shí)間約為30min；（7） 去保護(hù)后抽出哌啶，用DMF洗滌6次后，按照反應(yīng)器的順序分別加入各個(gè)的反應(yīng)物，加入堿試劑，通入氮?dú)膺M(jìn)行反應(yīng)，一號(hào)反應(yīng)器NMM反應(yīng)30min，二號(hào)反應(yīng)器DIC反應(yīng)2h，三號(hào)反應(yīng)器DIEA反應(yīng)2h；（8） 反應(yīng)時(shí)間到后用DMF洗滌三次后用檢測管取少量樹脂用檢測液進(jìn)行檢測，待檢測通過后（樹脂呈現(xiàn)透明，檢測溶液為淡黃色）方可進(jìn)行下一步的去保護(hù)，不過的話則需重新稱料加入反應(yīng)器反應(yīng)，在相同的反應(yīng)條件下繼續(xù)反應(yīng)，直至通過；（9）對(duì)反應(yīng)通過的進(jìn)行去保護(hù)，條件和上述的去保護(hù)條件相同，按照肽鏈的氨基酸順序重復(fù)上面的7和8步驟，直至全部連接上該條肽鏈的氨基酸，對(duì)最后一個(gè)連接上的氨基酸進(jìn)行去保護(hù)；（10）對(duì)已經(jīng)去保護(hù)的肽鏈先用甲醇洗一遍，再用DCM洗滌三次，然后再用甲醇洗滌兩次后抽干；（11）將抽干后的粉末稱重，放入離心管貼上標(biāo)簽和重量。2.3 全保護(hù)肽片段的切割2.3.1 全保護(hù)切割液的配置根據(jù)所稱量的樹脂的重量配置全保護(hù)切割液（樹脂的重g：切割液ml=1:10），全保護(hù)切割液的配置為2TFA+98DCM 。本次由于樹脂質(zhì)量較少，配置切割液時(shí)較難配置準(zhǔn)確，所以本次配置采取5倍量配置。切割時(shí)采取多次重復(fù)切割，減短切割時(shí)間。2.3.2 全保護(hù)的切割過程（1）將配置好的切割液按照所需要的量加入三支分別裝有全保護(hù)肽片段的離心管中，用塑膠手套包扎好，放入搖床里振蕩（20min），通過沙星漏斗收集濾液，待樹脂抽干后裝入離心管中加入切割液，繼續(xù)包扎好放入搖床振蕩，如此重復(fù)5次，最后棄去濾渣（被切割下來的樹脂），收集好濾液；（2）將收集好的濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，待到旋干時(shí)從旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀取出，加入自來水析出切割后的全保護(hù)肽鏈，放入離心機(jī)離心，重復(fù)用自來水析三次，離心后倒出上清液，得到沉淀物；（3）將沉淀物凍干后重新裝管，稱重，貼上標(biāo)簽。2.4 肽片段C-末端的乙胺化4（1）取出凍干后的全保護(hù)肽片段粉末，放入50ml的燒瓶中，加入少量DCM溶解肽片段，以完全溶解為止；（2）按照1.2倍量的比例關(guān)系，確定要稱取的NHET的量，乙胺化采取用Pybop作為縮合劑，用DIEA作為堿，以HB連接好的全保護(hù)肽為例，稱取的Pybop為0.17784g，NHET0.29358g，所需要的DIEA為0.126ml；（3）將NHET、Pybop加入到燒瓶中，加入DIEA，用塑膠手套封好，放入搖床里面振蕩2h，充分反應(yīng)；（4）反應(yīng)時(shí)間到后將其從搖床里面取出，放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上面旋干，待得旋干后取出。25肽鏈的側(cè)鏈切割（1）切割液的配置，本次的切割液用的是E液，具體配置按照下列配置：87.5的TFA、2.5的苯酚、2.5的水、2.5的EDT、5的苯甲硫醚，將配置好的切割液振蕩均勻；（2）將配置好的切割液加入到盛有肽鏈粉末的燒瓶中，包扎好，放入搖床中振蕩切割1.5h；（3）將切割好的溶液取出，經(jīng)過沙星漏斗得到濾取液，用乙醚稀釋放入離心機(jī)離心（轉(zhuǎn)速為2500r/min，時(shí)間為1min），倒出上清液再用乙醚洗滌三次，分別離心，最后得到沉淀物，抽干（4）裝管，稱重 2.7粗品分析（如圖2-1所示）圖2-1 粗品檢測分析圖 由上圖可以看出制備出來的亮丙瑞林粗品的分子量符合亮丙瑞林粗品的理論分子量，可以說明該實(shí)驗(yàn)成功的制備合成出了亮丙瑞林粗品。2.8 HPLC分析（如圖2-2，圖2-3和圖2-4所示）圖2-2 HB成品 HPLC REPORTRankTimeName Conc.Area111.9586.251663219212.05054.765809479312.41629.843165471413.2239.16971836Total 100 10610005通過上圖的HPLC檢測出的結(jié)果可以看出在HB縮合劑的連接下，合成得到的亮丙瑞林粗品（成品）的純度為54.76。 圖2-3 DIEA半成品 HPLC REPORTRankTimeName Conc.Area17.76996.383892211.3922.4122101312.3161.2821116Total 100 87109通過上圖可以看出的在DIEA縮合劑的連接下，合成的亮丙瑞林粗品（半成品）的純度為96.3。圖2-4 DIC半成品 HPLC REPORTRankTimeName Conc.Area17.7641.2141945227.82096.45154494837.9982.32937310Total 100 1601710通過分析，得到的亮丙瑞林粗品在DIC的連接條件下的純度為96.45從上述的三張HPLC圖分析不難看出，DIC分析得出的亮丙瑞林的純度最高，在上述的HB、DIC、DIEA的縮合劑連接后，DIC得到的亮丙瑞林粗品的純度最高，在相同的反應(yīng)條件下面，DIC的縮合效果最好，在Fmoc合成亮丙瑞林的工藝上面，用DIC能夠有效地提高收率，較多的獲得亮丙瑞林粗品。收率較高，有一定的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。2.9實(shí)驗(yàn)工藝分析上述亮丙瑞林的合成方法雖然能夠很好的合成出粗品，但是由于醋酸亮丙瑞林的序列中存在Arg-Pro5，在常規(guī)條件下縮合需要大量氨基酸，而且縮合效率很低。在除去生產(chǎn)成本外，得到的利潤較低。而微波輻射6可大幅加快化學(xué)反應(yīng)速率、提高產(chǎn)率7，在固相肽合成中已經(jīng)得到運(yùn)用，可能是一種新興的多肽合成方法，可以提高收率降低生產(chǎn)成本8-9。在反應(yīng)的過程中，經(jīng)常會(huì)有一些影響合成反應(yīng)的外界因素，例如溫度，通入氮?dú)獾乃俾实?，在合成的儀器中,可以設(shè)置自動(dòng)化的設(shè)備，使得反應(yīng)條件能夠更好的調(diào)控，在保證合成的有序進(jìn)行的同時(shí)，還能夠保持縮合效率和產(chǎn)品收率10。 參考文獻(xiàn)1 林碧蓮醋酸亮丙瑞林臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)J中國處方藥，2005，9(3)：232 Hoekstra W J111e 2-Chlorotrityl Resin：a worthy addition to the medical chemist s toolbopxJCurrent MedicalChemlsu3,，200l，(8)：715719。3 China C，Vilaseca M ，Giralt E，et a1An HPLCESMS stud) on the solid-phase assembly of C-terminal proline peptidesJJ Peptide Sci1999，(5)：131-1404 李佩華， 王衛(wèi)國，等。應(yīng)用2-氯三苯甲基氯樹脂固相合成C-末端N-烷基化肽酰胺(南京工業(yè)大學(xué)制藥與生命科學(xué)學(xué)院，江蘇南京21000)。5 王德心，固相有機(jī)合成原理及應(yīng)用指南M。北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004:116-117.6 張俊，岑濤等。微波作用下醋酸亮丙瑞林的固相合成。研究報(bào)告與簡報(bào)，化學(xué)試劑，2009,31（6），401-404.7 蔡漢成，方云，夏詠梅，等一種新的催化方法：微波輻射酶縮合催化有機(jī)合成J有機(jī)化學(xué)，2003，23(3)：2983048 YU Hui-ming，CHEN Shui-tein，WANG Kung-tsungEnhanced coupling eficiency in solidphase peptide synthesi bymicrowave irradiationJJOrgChem，1992，57：4 7814 7849 沈樹寶，王衛(wèi)國，李佩華，等多肽微波固相合成法：中國，1 699 404Pj200511-2310 符友偉，吳蕾。多肽固相合成法中的3個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，化學(xué)工業(yè)與工程Jul.2010第27卷第4期。附錄一、本文使用的部分英文字母縮寫的中文對(duì)照：DMF：N,N-二甲基酰胺DCM：二氯甲烷DIC：N,N-二異丙基碳二亞胺DIEA：二異丙基乙胺NMM：N-甲基嗎啡啉HATU：0-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N,N,N,N四甲基脲六氟磷酸酯HBTU：苯并三唑-1-四甲基六氟磷酸酯HOBT：1-羥基苯駢三唑TBTU：O-苯并三氮唑- N,N,N,N-四甲基脲四氟硼酸酯HMBA：對(duì)羥基苯甲酸DMAP：4-二甲氨基吡啶TFA：三氟乙酸EDT：乙二硫醇Oall：烯丙基Alloc：烯丙氧羰基Fmoc：芴甲氧羰基Boc：叔丁氧羰基Pbf：2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺?；鵗rt：三苯甲基Nle：正亮氨酸Kaiser Test：茚三酮檢測Pd(PPh3) 4：四（三苯基膦）鈀 二、二十種常用氨基酸的分子量英文簡寫英文縮寫中文名分子量帶保護(hù)基分子量AAla丙氨酸89.1311.38CCys(Trt)半胱氨酸121.2585.7DAsp(But)天冬氨酸133.1411.46EGlu(But)谷氨酸147.1425.48FPhe苯丙氨酸165.2387.4GGly甘氨酸75.1297.3HHis(Trt)組氨酸155.2619.7IIle異亮氨酸131.2353.4KLys(Boc)賴氨酸146.2468.55LLeu亮氨酸131.2353.4MMet甲硫氨酸(蛋氨酸)149.2371.5NAsn(Trt)天冬酰胺132.1596.7PPro脯氨酸115.1337.4QGln(Trt)谷氨酰胺146.2610.7RArg(Pbf)精氨酸174.2648.77SSer(But)絲氨酸105.1383.4TThr(But)蘇氨酸119.1397.5VVal纈氨酸117.1339.4WTrp(Boc)色氨酸204.2526.5YTyr(But) 酪氨酸 181.2459.5致 謝首先要感謝化學(xué)學(xué)院趙琪、韓組長的精心指導(dǎo)。趙老師，韓組長豐富的專業(yè)知識(shí)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、精益求精的工作作風(fēng)，將對(duì)我產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。在實(shí)驗(yàn)開始的前期，組長就為我們的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)積極的準(zhǔn)備材料，以保證我們的實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚣皶r(shí)的完成，并且督促我們?nèi)ニ阉飨嚓P(guān)的資料來學(xué)習(xí)，讓我們?cè)趯?shí)驗(yàn)前就做好了充分的預(yù)習(xí)準(zhǔn)備，這也為我們實(shí)驗(yàn)的順利完成奠定了基礎(chǔ)；在論文的初稿階段，趙老師認(rèn)真的幫助我多次修改，耐心的幫我指出其中的不足之處，所有這些，我都將銘記在心。在實(shí)驗(yàn)期間，感謝韓組長對(duì)我的精心指導(dǎo)，幫助我解決難題，幫助我能夠更好地了解工藝過程，促成了我很好的完成了畢業(yè)專題。由衷的感謝韓士永組長，感謝他的精心指導(dǎo)，感謝他能夠給我們提供這么大的一個(gè)舞臺(tái)，由衷的感謝吉爾多肽公司對(duì)畢業(yè)專題的積極配合。還要感謝和我一起努力的小組成員，即孫文華，易翔等。經(jīng)過我們的共同努力和共同探索，一個(gè)又一個(gè)的難題在我們的面前都迎刃而解；通過共同的分析與討論，我們的實(shí)驗(yàn)才能順利的完成。在此真誠的向你們道一聲：謝謝！最后再次感謝在大學(xué)生活中給予我關(guān)心和幫助的所有老師和親愛的同學(xué)們，感謝家人這么多年對(duì)我的養(yǎng)育，感謝徐州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院給我提供了那么多的舞臺(tái)讓我鍛煉自己各方面的能力，祝愿學(xué)院的明天更輝煌！ 襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羈莀蒈羃膇芆蕆蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃蠆羆艿薃袁節(jié)膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肅芅蕿袈羋膁蚈羀肁蒀蚇蝕襖莆蚇螂肀莂蚆羅袂羋蚅蚄膈膄蚄螇羈蒂蚃衿膆莈螞羈罿芄螁蟻膄膀螁螃羇葿螀裊膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃螞肂莈蒂螄羋芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆薂螆裊肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羈膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿節(jié)衿羈腿莄螞襖羋蕆袇螀芇蕿蝕聿芆艿蒃肅芅蒁螈羈芄薃薁袆芃芃螆螂芃蒞蕿肁節(jié)蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈螞螂羂薁袈肀肁芀蟻羆肁莃袆袂肀薅蠆袈聿蚇蒂膇肈莇螇肅肇葿薀罿肆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