醫(yī)療器械產(chǎn)品輻照滅菌劑量驗證方案與報告

XXXXX公司建立醫(yī)用產(chǎn)品滅菌劑量驗證報告送檢單位： 公司日 期： 年 月 日目 錄序言2試驗前準備工作2方法3實施內(nèi)容4結果5結論6附注6參考資料6初始污染菌檢測規(guī)范7確定滅菌劑量9無菌檢查10序言本實驗是對醫(yī)用產(chǎn)品公司的一次性醫(yī)療用品進行了輻射滅菌劑量設定和驗證。實驗原理是基于ISO11137-2：2006的方法，即先對輻照前產(chǎn)品的初始污染菌進行測定，然后選擇驗證劑量。再用驗證劑量對產(chǎn)品進行輻照，并測定輻照后存活微生物的樣品件數(shù)，以此來確定所確定的驗證劑量能夠滿足10-6的滅菌保證水平。本實驗從 年 月 日開始至 年 月 日結束。試驗前準備工作一、樣品1樣品：醫(yī)用產(chǎn)品，三個批號：生產(chǎn)企業(yè)： 公司。2器具及試劑2.1器材試管容量瓶三角燒瓶酒精燈滅菌剪刀、鑷子滅菌平皿（9cm）75乙醇棉滅菌刻度吸管(1ml、5ml)紫外可見分光光度計立式壓力蒸汽滅菌器電熱鼓風干燥箱酸度計恒溫培養(yǎng)箱電熱恒溫水浴鍋生化培養(yǎng)箱電熱恒溫干燥箱2.2培養(yǎng)基及試劑：a)流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基b)改良馬丁培養(yǎng)基c)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2.3稀釋液、沖洗液及其制備方法 a)質量濃度為9g/L的無菌氯化鈉溶液b)0.1蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調節(jié)pH值至7.10.2，分裝，滅菌。c)pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。 二、實驗前準備2.1培養(yǎng)基要求：用于培養(yǎng)需（厭）氣菌和真菌的培養(yǎng)基的制備、培養(yǎng)基靈敏度檢查及其他各項要求應符合中國藥典（二部）附錄中無菌檢查法的規(guī)定。培養(yǎng)基使用按中國藥典方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。制備后采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基保存在225、避光的環(huán)境。2.2器具滅菌：與供試液接觸的所有器具應采用可靠方法滅菌，置壓力蒸氣滅菌器內(nèi)12130min，或置電熱干燥箱內(nèi)1602h。2.3無菌室要求：無菌室操作臺局部符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求。無菌室在消毒處理完畢后，檢查空氣中的菌落數(shù)，方法如下：取直徑約90mm培養(yǎng)皿數(shù)支，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL，在3035培養(yǎng)48h證明無菌后，取3只培養(yǎng)皿在無菌室操作臺或超凈工作臺平均位置打開上蓋，暴露30min后蓋好，置3035培養(yǎng)48h后取出檢查，3只培養(yǎng)皿上生長的菌落數(shù)平均不得超過1個。無菌試驗過程中檢查空氣中的菌落數(shù)，方法同上。在試驗開始進行時打開平皿蓋，至試驗結束蓋好照上法培養(yǎng)，符合上述要求。2.4陽性對照：選擇金黃色葡萄球菌為對照菌，接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)2448小時，將上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液。陽性對照試驗的菌液制備方法驗證試驗，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)4872小時應生長良好。2.5陰性對照：取相同稀釋液、沖洗液同上法操作，作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。方法客戶提供生產(chǎn)的醫(yī)用產(chǎn)品，每件醫(yī)用產(chǎn)品均是一個獨立的單元產(chǎn)品，其樣品份額為1。具體步驟如下：1. 隨機抽取連續(xù)三批常規(guī)生產(chǎn)的產(chǎn)品，每批10件，共30件做生物負載檢測。另從其中一批隨機取5件樣品，做回收率實驗。2. 當每個批平均生物負載都不超過三批總平均生物負載的2倍時，根據(jù)三批的總平均負載的檢測結果，選擇滅菌保證水平為10-2的滅菌劑量作為驗證劑量。3. 對以上三批抽樣產(chǎn)品連續(xù)生產(chǎn)的110件產(chǎn)品實施驗證劑量，實際吸收劑量應在驗證劑量的3%之內(nèi)。4. 對用驗證劑量輻照過的100件產(chǎn)品做無菌實驗，其余的10件產(chǎn)品做無菌試驗的驗證實驗。5. 根據(jù)無菌實驗的結果，確定驗證劑量是否被接受，即確定的驗證劑量是否能夠滿足10-6的滅菌保證水平。實施內(nèi)容一、回收率測定取5ml洗脫液洗脫5支產(chǎn)品，分別洗脫四次，然后將樣品用營養(yǎng)瓊脂做瓊脂覆蓋，于37培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)482h，記錄結果并得出修正系數(shù)。二、初始污染菌測定將隨機抽取的30件樣品中生物負載進行評估，編號后，分別用5ml 洗脫液洗脫，吸取1ml置于9ml稀釋液中，振搖均勻后分別取1ml樣品液于兩個平皿中，記錄編號為101，102，代表五十倍樣，取1ml置于9ml稀釋液，振搖均勻后分別取1ml樣品液于兩個平皿中，記錄編號為1001，1002，代表五百倍樣。依次取第二件樣品，至30件樣品。傾注營養(yǎng)瓊脂，于37培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)482h，記錄結果。三、 確定驗證劑量ISO 11137：2006 醫(yī)療器械滅菌的有效性確認和常規(guī)控制的要求中規(guī)定，若批次平均生物負載的每一個生物負載數(shù)值 總的平均生物負載*2，則用總的平均生物負載，若一批或更多批次的平均生物負載總的平均生物負載*2，則用最高批次。本次試驗采用總平均初始污染菌120（cfu/SIP）確定驗證劑量。查ISO11137：2006 表格得出對應的驗證劑量為8.2kGy，該試驗劑量下的無菌保證水平SAL為10-2。四、驗證劑量輻照結果從產(chǎn)品的單個批次中選出110個單元產(chǎn)品的樣本，暴露在XXXXX公司的電子加速器傳送帶上輻照，使輻射劑量落在8.25% kGy 范圍內(nèi)。輻照后進行無菌試驗。五、無菌試驗5.1供試液制備及接種取樣品按容器內(nèi)表面積每10cm2加入浸提介質1ml的比例，振搖數(shù)次。收集上述沖洗液或浸提介質于無菌容器中。5.2無菌檢驗培養(yǎng)溫度硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，置3035培養(yǎng)。改良馬丁培養(yǎng)基，置2328培養(yǎng)。5.3接種采用直接接種法每管培養(yǎng)基的最低用量硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml，改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10 ml。5.4培養(yǎng)、觀察上述含培養(yǎng)基的容器分別置規(guī)定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中，除陽性對照管和陰性對照管培養(yǎng)4872小時外，其余管培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應逐日觀察并記錄是否有菌生長。結果對三批醫(yī)用產(chǎn)品進行初始污染菌測試后，修正系數(shù)為1.08，結果如下：批 號初始污染菌平均數(shù)（cfu/件）總平均數(shù)因此，根據(jù)ISO11137-2：2006建立滅菌劑量的規(guī)定，選用總平均生物負載為120（cfu/件）來確定驗證劑量。根據(jù)以上數(shù)據(jù)查表得驗證劑量為 kGy,對以上 批次110件，實測劑量為 kGy（見輻照證明書）。經(jīng)觀察，100件樣品經(jīng)驗證劑量輻照后的無菌檢查陽性數(shù)為零。結論依據(jù)ISO 11137 ：2006 規(guī)定，當SAL=10-6時，醫(yī)用產(chǎn)品的滅菌劑量為 kGy。在隨后的常規(guī)輻照滅菌過程中，應通過劑量計監(jiān)測，證明每一個產(chǎn)品的最小吸收劑量能夠達到 kGy 的滅菌劑量，使滅菌保證水平為10-6SAL。依據(jù)ISO 11137 ：2006 標準，為了確保作為10-6SAL的滅菌劑量持續(xù)有效，必須按照規(guī)定的周期進行驗證劑量審核，通常每三個月進行一次。附注1、 試驗樣品不可替代批量產(chǎn)品。2、 當批量產(chǎn)品輻照時的劑量確定，必須隨機抽取該批量部分產(chǎn)品作初始污染菌驗證。參考資料1、 ISO11137-1：2006醫(yī)療保健產(chǎn)品的滅菌-輻照-第一部分：醫(yī)療器械滅菌過程的發(fā)展、確認和常規(guī)控制要求2、 ISO11137-2：2006醫(yī)療保健產(chǎn)品的滅菌-輻照-第二部分：建立滅菌劑量3、 ISO11137-3：2006醫(yī)療保健產(chǎn)品的滅菌-輻照-第三部分：劑量指南4、 ISO11737-1：1995醫(yī)用器材滅菌-微生物學方法-第1部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)量的測定5、 ISO11737-2：1998醫(yī)用器材滅菌-微生物學方法-第2部分：滅菌過程確認中的無菌試驗初始污染菌檢測規(guī)范試驗方法：1、初始污染菌檢測按ISO11737-2006醫(yī)療器械的滅菌-微生物方法第一部分產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測定-MRC初始污染菌的測定2、菌落總數(shù)回收率的測定方法同（一）回收率測定結果樣品名稱： 醫(yī)用產(chǎn)品 生產(chǎn)企業(yè)： 生產(chǎn)批號： 型號規(guī)格： 樣品數(shù)量： 樣本號洗脫次數(shù)每次洗脫的細菌數(shù)（cfu/SIP）平均菌落數(shù)123451234瓊脂覆蓋全部菌落數(shù)回收率%平均回收率修正系數(shù)初始污染菌檢測生產(chǎn)批號： 型號規(guī)格： 樣品數(shù)量： 樣本號批號樣本號批號樣本號批號需氧菌（cfu/SIP）需氧菌（cfu/SIP）需氧菌（cfu/SIP）111212122231323414245152561626717278182891929102030SIP 平均初始污染菌SIP 平均初始污染菌SIP 平均初始污染菌校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后平均初始污染菌確定滅菌劑量每批產(chǎn)品初始污染菌如下：批號平均初始污染菌數(shù)（cfu/件）總平均數(shù)劑量確定：按照ISO11137-2：2006中關于建立滅菌劑量驗證方式1查得120cfu/件的驗證劑量為 kGy。再按要求對A03批次110件醫(yī)用產(chǎn)品采用 kGy的驗證劑量進行輻照處理，經(jīng)無菌檢查，陽性數(shù)為零。這表明， kGy能夠滿足醫(yī)用產(chǎn)品10-6的滅菌保證水平。無菌檢查試驗方法:1、樣品接種均應按無菌操作法進行；2、無菌打開包裝用滅菌剪刀、鑷子，將產(chǎn)品轉移至胰酪胨大豆肉湯中；3、將置有樣品的培養(yǎng)基放30+0.5的培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)14天；觀察有無細菌生長；結果：無菌試驗的驗證試驗檢驗結果生產(chǎn)批號試驗樣品數(shù)量培養(yǎng)基溫度（）培養(yǎng)天數(shù)陽性數(shù)陰性數(shù)110胰胳蛋白胨大豆肉湯300.521010結論：經(jīng)測