體外診斷試劑分類和常見產(chǎn)品技術(shù)原理及應(yīng)用ppt課件

1 體外診斷試劑的分類和基本原理 2 體外診斷試劑和器械在國(guó)外統(tǒng)一稱為體外診斷醫(yī)療器械 屬于醫(yī)療器械的一部分 在我國(guó) 體外診斷試劑是指 可單獨(dú)使用或與儀器 器具 設(shè)備或系統(tǒng)組合使用 在疾病的預(yù)防 診斷 治療監(jiān)測(cè) 預(yù)后觀察 健康狀態(tài)評(píng)價(jià)以及遺傳性疾病的預(yù)測(cè)過程中 用于對(duì)人體樣本 各種體液 細(xì)胞 組織樣本等 進(jìn)行體外檢測(cè)的試劑 試劑盒 校準(zhǔn)品 物 質(zhì)控品 物 等 概念 3 根據(jù)國(guó)家管理類別 按照產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)程度的高低 體外診斷試劑依次分為第三類 第二類 第一類產(chǎn)品 不同類的產(chǎn)品在審查 批準(zhǔn)后頒發(fā)醫(yī)療器械注冊(cè)證書上由不同的機(jī)構(gòu)進(jìn)行 第三類由國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局審查 批準(zhǔn) 第二類由省級(jí)食品藥品監(jiān)督管理局審查 批準(zhǔn) 第一類由市級(jí)食品藥品監(jiān)督管理局審查 批準(zhǔn) 體外診斷試劑的分類 一 4 第三類產(chǎn)品 1 與致病性病原體抗原 抗體以及核酸等檢測(cè)相關(guān)的試劑 2 與血型 組織配型相關(guān)的試劑 3 與人類基因檢測(cè)相關(guān)的試劑 4 與遺傳性疾病相關(guān)的試劑 5 與麻醉藥品 精神藥品 醫(yī)療用毒性藥品檢測(cè)相關(guān)的試劑 6 與治療藥物作用靶點(diǎn)檢測(cè)相關(guān)的試劑 7 與腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)相關(guān)的試劑 8 與變態(tài)反應(yīng) 過敏原 相關(guān)的試劑 5 除已明確為第三類 第一類的產(chǎn)品 其他為第二類產(chǎn)品 主要包括 1 用于蛋白質(zhì)檢測(cè)的試劑 2 用于糖類檢測(cè)的試劑 3 用于激素檢測(cè)的試劑 4 用于酶類檢測(cè)的試劑 5 用于酯類檢測(cè)的試劑 6 用于維生素檢測(cè)的試劑 7 用于無機(jī)離子檢測(cè)的試劑 8 用于藥物及藥物代謝物檢測(cè)的試劑 9 用于自身抗體檢測(cè)的試劑 10 用于微生物鑒別或藥敏試驗(yàn)的試劑 11 用于其他生理 生化或免疫功能指標(biāo)檢測(cè)的試劑 第二類產(chǎn)品 6 1 微生物培養(yǎng)基 不用于微生物鑒別和藥敏試驗(yàn) 2 樣本處理用產(chǎn)品 如溶血?jiǎng)?稀釋液 染色液等 注 第二類產(chǎn)品中的某些產(chǎn)品 例如蛋白質(zhì) 糖類 激素 酶類等的檢測(cè) 如果用于腫瘤的診斷 輔助診斷 治療過程的監(jiān)測(cè) 或用于遺傳性疾病的診斷 輔助診斷等 則按第三類產(chǎn)品注冊(cè)管理 在藥物及藥物代謝物檢測(cè)的試劑中 如果該藥物屬于麻醉藥品 精神藥品或醫(yī)療用毒性藥品范圍 則按第三類產(chǎn)品注冊(cè)管理 第一類產(chǎn)品 7 按照受理和審評(píng)分為 按照藥品受理和審評(píng)的和按照醫(yī)療器械受理審評(píng)的 一 按藥品受理和審評(píng)的體外診斷試劑 1 ABO血型定型試劑 盒 2 乙型肝炎表面抗原 HBsAg 試劑 盒 3 丙型肝炎病毒 HCV 抗體試劑 盒 4 人類免疫缺陷病毒HIV抗原 抗體診斷試劑 盒 5 梅毒螺旋體抗體試劑 盒 6 放免試劑 盒 注 號(hào)的品種 預(yù)期用途為血源篩查時(shí)按藥品受理和審評(píng) 為臨床診斷時(shí) 按第三類醫(yī)療器械進(jìn)行管理 體外診斷試劑的分類 二 8 二 按醫(yī)療器械受理和審評(píng)的體外診斷試劑 1 臨床血液學(xué)和體液學(xué)檢驗(yàn)試劑2 臨床化學(xué)檢驗(yàn)試劑3 臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)試劑 4 微生物學(xué)檢驗(yàn)試劑5 組織細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)試劑6 變態(tài)反應(yīng) 自身免疫診斷檢驗(yàn)試劑 盒 7 遺傳性疾病檢驗(yàn)試劑8 分子生物學(xué)檢驗(yàn)試劑9 其它檢驗(yàn)試劑 盒 體外診斷試劑的分類 二 9 按照技術(shù)方法分 1 比色法 顏色反應(yīng) 2 分光光度法 3 凝集法 4 散射法 沉淀反應(yīng) 5 透射比濁法 沉淀反應(yīng) 6 速率法 終點(diǎn)法 產(chǎn)物或底物量 7 標(biāo)記技術(shù) 8 生物親和 9 免疫技術(shù) 10 發(fā)光技術(shù) 11 熒光技術(shù) 12 放射技術(shù) 13 形態(tài)分析 14 流式細(xì)胞 15 電泳技術(shù) 體外診斷試劑的分類 三 10 按照技術(shù)方法分 16 克隆技術(shù) 17 酶技術(shù) 18 基因技術(shù) 19 聚合酶鏈反應(yīng) PCR 分子生物技術(shù) 20 雜交技術(shù) 分子生物技術(shù) 21 印跡技術(shù) 22 層析技術(shù) 23 色譜技術(shù) 24 質(zhì)譜技術(shù) 25 溶出法 26 伏安法 27 多技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用 如 酶聯(lián)免疫 免疫比濁 放射免疫 免疫化學(xué)發(fā)光 免疫層析 熒光雜交 免疫組化 流式熒光 電極溶出伏安法等 體外診斷試劑的分類 三 11 在實(shí)際應(yīng)用中 單一技術(shù)往往不能滿足檢測(cè)需要 因此 診斷試劑會(huì)聯(lián)合使用多種技術(shù) 常見的體外診斷產(chǎn)品 1 生化分析儀 生化試劑 2 酶標(biāo)儀 酶免試劑 3 免疫化學(xué)發(fā)光儀及試劑 4 膠體金 乳膠 熒光 免疫層析試劑 5 血細(xì)胞分析儀 細(xì)胞檢測(cè)試劑 6 尿液分析儀 尿液檢測(cè)試劑 試紙 7 血?dú)?電解質(zhì)分析儀 電解質(zhì)試劑 8 細(xì)菌 微生物培養(yǎng)及鑒定試劑 9 免疫組化染色液 液基細(xì)胞試劑 免疫印跡試劑10 PCR儀及試劑 11 血型試劑 12 流式細(xì)胞儀 12 微量元素 原子吸收法 常見的體外診斷產(chǎn)品技術(shù)原理及應(yīng)用 12 生化分析儀 生化試劑 全自動(dòng)生化分析儀 肝功類 腎功類等比色法 比濁法 散射法 速率法 終點(diǎn)法 13 酶標(biāo)儀 酶免試劑 酶標(biāo)儀 比色計(jì) 酶免試劑 酶聯(lián)免疫法比色法抗原抗體特異性結(jié)合 酶作為標(biāo)記物和催化物 加入底物產(chǎn)生顏色反應(yīng) 放入比色計(jì)進(jìn)行比色 14 化學(xué)發(fā)光儀及試劑 以酶為催化劑 通過氧化反應(yīng) 使底物發(fā)光 過氧化物酶 HRP 促發(fā)光 底物 魯米諾堿性磷酸酶 AP 促發(fā)光 底物 螺旋金剛烷環(huán)氧化物苯磷酸酯 AMPPD 15 非酶促化學(xué)發(fā)光及電化學(xué)發(fā)光 非酶促化學(xué)發(fā)光 以吖啶酯 過氧化氫為發(fā)光系統(tǒng) 不需要酶的催化 儀器成本高 技術(shù)復(fù)雜 尚未國(guó)產(chǎn)化 Abbott 電化學(xué)發(fā)光 氧化反應(yīng)是通過電極上的電化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生 標(biāo)記物為三氯聯(lián)吡啶釕 儀器成本高 技術(shù)復(fù)雜 尚未國(guó)產(chǎn)化 Roche 16 膠體金 乳膠 熒光 層析試劑 膠體金免疫層析法 將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上 膠體金標(biāo)記試劑 抗體或單克隆抗體 吸附在結(jié)合墊上 當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后 通過毛細(xì)作用向前移動(dòng) 溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng) 當(dāng)移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí) 待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留 聚集在檢測(cè)帶上 可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果 該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條 使用十分方便 17 膠體金免疫層析法反應(yīng)示意圖 18 HIV膠體金類快速診斷試劑檢測(cè)結(jié)果 19 第三類 免疫印跡試劑 免疫印跡試劑盒 風(fēng)濕病自身抗體檢測(cè)試劑盒 免疫印跡法 20 免疫印跡法示意圖 21 第四類 蛋白芯片 微陣列 類試劑 蛋白芯片 微陣列 丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒 蛋白芯片法 多腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑盒 蛋白芯片法 22 第五類 單抗類試劑 血型定型類試劑 血型定型試劑盒 單克隆抗體 免疫組化 ImmuChem免疫組化試劑盒 單抗 免疫比濁 血清載脂蛋白A1免疫比濁試劑盒乳膠凝集 D dimer二聚體乳膠凝集試劑盒 23 第六類 多抗類試劑 血型定型類試劑 血型定型試劑盒 人血清 馬血清 免疫組化 癌胚抗原檢測(cè)試劑盒 多抗 免疫比濁 微球蛋白測(cè)定試劑盒 免疫比濁法 乳膠凝集 沙門氏菌乳膠凝集試劑盒 24 抗原 抗原 指進(jìn)入有免疫活性的組織 宿主 而引發(fā)免疫應(yīng)答的物質(zhì) 或雖不能引發(fā)免疫 但可以同抗體結(jié)合的物質(zhì) 蛋白質(zhì) 多糖 核酸 糖脂 青霉素全抗原性具有多個(gè)抗原決定族 25 抗體 宿主對(duì)體內(nèi)存在的外來分子 微生物或其他因子的應(yīng)答而產(chǎn)生的蛋白質(zhì) 免疫球蛋白 丙種球蛋白 根據(jù)抗體性質(zhì) 多克隆抗體 單克隆抗體根據(jù)抗體分子結(jié)構(gòu) IgA D E G M 26 IgG IgM 抗體模式圖 27 單克隆抗體 由一株淋巴細(xì)胞產(chǎn)生 針對(duì)一種抗原決定族抗原免疫小鼠 取脾臟 與瘤細(xì)胞融合 克隆篩選 單克隆抗體細(xì)胞株擴(kuò)增細(xì)胞 注射入小鼠腹腔 采腹水 純化抗體 28 流程 雜交瘤技術(shù) 29 多克隆抗體 針對(duì)多個(gè)抗原決定族抗原免疫動(dòng)物 采集動(dòng)物血清純化抗體 30 第七類 診斷血清 菌液 診斷血清 侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬四種混合多價(jià)血清診斷菌液 傷寒沙門菌菌體 O 抗原 鞭毛 H 抗原診斷菌液 31 第八類 血球凝集類試劑 抗體致敏血球 破傷風(fēng)抗體診斷試劑 血凝法 白喉抗體診斷試劑 血凝法 32 第九類 核酸擴(kuò)增類試劑 熒光PCR 乙型肝炎病毒核酸定量測(cè)定試劑盒PCR ELISA 結(jié)核分支桿菌檢測(cè)試劑盒 核酸擴(kuò)增酶聯(lián)免疫法 PCR 毛細(xì)管電泳 性染色體多倍體 分型與突變 檢測(cè)試劑盒 PCR 電泳 地中海貧血基因診斷試劑盒 gap PCR法 轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增 TMA 沙眼衣原體與結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)試劑盒 33 PCR基本原理示意圖 34 PCR 過氧化物酶聯(lián)物 96孔酶標(biāo)法 加樣 分析 觀察數(shù)據(jù) PCR產(chǎn)物的檢測(cè)96孔酶標(biāo)法 35 第十類 基因芯片 微陣列 類試劑 基因芯片 微陣列 地中海貧血基因芯片診斷試劑盒PCR 雜交 人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒 PCR 反向雜交法 36 第十一類 探針放大 原位雜交 類試劑 bDNA類 HIV 1bDNA檢測(cè)試劑盒 mRNA檢測(cè)試劑盒 生物素原位雜交法 37 探針放大類試劑 支鏈DNA技術(shù) 病毒的RNA釋放后加入微孔板中 板孔中包被有可與病毒特異結(jié)合的一系列靶探針 TargetProbe 另一系列靶探針的一端可標(biāo)記在游離的病毒核酸鏈上 另一端可與bDNA結(jié)合 bDNA信號(hào)放大 加入酶標(biāo)記物對(duì)結(jié)合的bDNA進(jìn)行標(biāo)記 經(jīng)過清洗后加入底物進(jìn)行反應(yīng) 測(cè)定反應(yīng)強(qiáng)度 38 第十二類 普通生化類試劑 十萬級(jí)要求 包括酶類化學(xué)試劑 凝血試劑類等試劑 酶類化學(xué)試劑 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 ALT 測(cè)定試劑盒 堿性磷酸酶 ALP 測(cè)定試劑盒凝血試劑 凝血酶原時(shí)間 PT 測(cè)定試劑盒 組織纖溶酶原激活物 t PT 測(cè)定試劑盒 39 普通生化類試劑 十萬級(jí)要求 1 原理 臨床普通生化類試劑是一類用于測(cè)定人血液 尿液等中各項(xiàng)生化指標(biāo)的試劑 含有各種非特異性蛋白成分 要求在十萬級(jí)潔凈環(huán)境中生產(chǎn) 檢測(cè)方法均為比色法 方法學(xué)原理均為顯色反應(yīng) 產(chǎn)品涉及 1 酶類 含酶 輔酶與牛血清白蛋白等 劑型為干粉或液體 2 血凝類 試劑組分中含有其他活性類組分 如兔腦粉等 生產(chǎn)工藝 原材料稱量 溶解 定容 中試 分裝 組裝 成品檢驗(yàn) 關(guān)鍵控制點(diǎn) 原料稱量 配制 物料平衡 細(xì)則 要求 應(yīng)在10萬級(jí)凈化環(huán)境中進(jìn)行生產(chǎn)操作 40 第十三類 普通生化類試劑 清潔環(huán)境 包括一般化學(xué)試劑 血?dú)怆娊赓|(zhì)類 血液分析儀用試劑類等 一般化學(xué)試劑 無機(jī)離子 鋁 鎘等 測(cè)定試劑盒 白蛋白測(cè)定試劑盒 BCG法 總膽固醇測(cè)定試劑盒 COD CE PAP法 血?dú)怆娊赓|(zhì) 電解質(zhì)分析儀隨機(jī)試劑 生化分析儀用稀釋液 沖洗液血液分析儀用試劑 血液分析儀用稀釋液 溶血?jiǎng)?41 普通生化類試劑 清潔環(huán)境 原理 與普通生化試劑 十萬級(jí)要求 類相同 產(chǎn)品涉及 無機(jī)離子檢測(cè) 血?dú)怆娊赓|(zhì)類 血液分析儀用試劑類等試劑 工藝要求 除生產(chǎn)可在清潔環(huán)境中進(jìn)行操作外 生產(chǎn)工藝和關(guān)鍵控制點(diǎn)與普通生化試劑 十萬級(jí)要求 類相同 42 第十四類 干化學(xué)類試劑 干化學(xué)試劑 條 卡或盒 干化學(xué)尿液分析試紙條 尿微量白蛋白 UALB 測(cè)試卡 43 干化學(xué)類試劑 原理 以濾紙為載體 將各種試劑組分浸漬后干燥 作為試劑層 固定在支持物上 試紙上的各測(cè)試塊與被測(cè)樣品中的成分發(fā)生酶化學(xué)反應(yīng) 使試紙塊發(fā)生不同的顏色變化 顏色深淺與樣品中的成份含量成正比 再由光電耦合元件對(duì)測(cè)試塊的顏色進(jìn)行判讀 達(dá)到測(cè)定樣品中化學(xué)成分含量的目的 生產(chǎn)工藝主要環(huán)節(jié) 特定試劑的配制 試劑條的浸潤(rùn) 干燥 切割 分包裝等 44 第十五類 藥敏類試劑 藥敏紙片 卡 抗生素藥敏紙片 隨機(jī)專用藥敏試劑 盒 卡 45 藥敏類試劑 原理 是將抗菌藥物吸收到特定的紙片中 然后置于已接種待測(cè)定菌的固體培養(yǎng)基上 抗菌藥物通過向培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散 抑制敏感細(xì)菌的生長(zhǎng) 從而出現(xiàn)抑菌環(huán) 帶 由于藥物擴(kuò)散的距離越遠(yuǎn) 達(dá)到該距離的藥物濃度越低 故可以根據(jù)抑菌環(huán)的大小 判斷細(xì)菌對(duì)藥物的敏感度 通過藥物敏感試驗(yàn) 我們可以找出針對(duì)于某些致病菌的敏感藥物 從而對(duì)臨床中的細(xì)菌性疾病的治療提供指導(dǎo) 工藝 配抗生素溶液浸泡干燥 凍干或烘干 分包裝紙打孔 藥敏紙片的關(guān)鍵工藝是紙片的浸泡 它直接影響產(chǎn)品質(zhì)量 46 第十六類 培養(yǎng)基類 馬丁干粉培養(yǎng)基 人胚胎干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 47 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基 Medium 是供微生物