遺傳實驗2-2 粗糙鏈孢霉生活史及PPT課件VIP

實驗二粗糙鏈孢霉生活史及雜交 一 實驗原理 粗糙鏈孢霉屬于真菌中的子囊菌綱 粗糙鏈孢霉的菌絲體是單倍體 n 7 每一菌絲細胞中含有幾十個細胞核 由菌絲頂端斷裂形成分生孢子 分生孢子有兩種 小型分生孢子中含有一個核 大型分生孢子中含有幾個核 分生孢子萌發(fā)成菌絲 可再生成分生孢子 周而復(fù)始 這是粗糙鏈孢霉的無性生殖過程 鏈孢霉 Neurosporacrassa 的生活史 圖8 19 粗糙鏈孢霉的菌株有兩種不同的接合型 用A a或mt mt 表示 他們受一對等位基因控制 不同結(jié)合型菌株的細胞接合產(chǎn)生有性孢子 這過程稱為有性生殖 有性生殖可以通過兩種方式進行 一是產(chǎn)生原子囊果 內(nèi)附有產(chǎn)囊體 若另一接合型的分生孢子落在這原子囊果的受精絲上時 分生孢子的細胞核進入受精絲 到達產(chǎn)囊體 形成接合型基因的異核體 二是不同接合型的菌株的菌絲連接 兩種接合型的細胞核發(fā)生融合形成合子 產(chǎn)生子囊果 其中 1和2是未交換的 稱第一次分裂分離子囊 3 6都是發(fā)生交換的 稱第二次分裂分離子囊 因此 統(tǒng)計第二次分裂分離子囊占總子囊數(shù)的比例 乘以0 5 就可決定某一基因與著絲粒之間的重組值 重組值去掉 即乘以100 即為該基因圖距 粗糙鏈孢霉的子囊和子囊型 粗糙鏈孢霉的子囊和子囊型 本實驗用賴氨酸缺陷型 記作Lys 與野生型 記作Lys 雜交 得到的子囊孢子分離為4個黑的 4個是灰的 黑的孢子是野生型 賴氨酸缺陷型孢子成熟遲 所以呈灰色 根據(jù)黑色孢子和灰色孢子在子囊中的排列順序 可有6種子囊類型 子囊型 1 和 2 的產(chǎn)生如圖 第一次減數(shù)分裂 M1 時 帶有Lys 的兩條染色單體移向一極 而帶有Lys 的兩條染色單體移向另一極 Lys Lys 這對基因在第一次減數(shù)分裂時分離 稱第一次分裂分離 第二次減數(shù)分裂 M2 時 每一染色單體相互分開 形成四分體 順序是 或 再經(jīng)過一次有絲分裂 成為 1 和 2 子囊型 形成這兩種子囊型時 在著絲粒和基因?qū)ys Lys 間未發(fā)生過交換 是第一次分裂分離子囊 圖中 3 和 4 的形成 由于Lys基因與著絲粒間發(fā)生了一個交換 Lys Lys 在第一次減數(shù)分離時沒有分離 到第二次減數(shù)分裂 M2 時 帶有Lys 的染色單體才和帶有Lys 的染色單體相互分開 所以稱為第二次分裂分離 然后再經(jīng)一次有絲分裂 形成4個孢子對 順序是 或 這是第二次分裂分離子囊 5 和 6 子囊型的形成與 3 和 4 類似 也是兩個染色單體發(fā)生了交換 不過交換不是發(fā)生在第2條染色單體與第3條染色單體之間 而是發(fā)生在1 3或2 4兩條染色單體之間 粗糙鏈孢霉lys 與lys 雜交子囊孢子的排列順序 1 2 為非交換型 3 4 5 6 為交換型子囊 7 8 9 10 是由轉(zhuǎn)換造成的異常比例 二 實驗?zāi)康?1 掌握粗糙鏈孢霉的雜交技術(shù) 2 統(tǒng)計雜交結(jié)果 計算基因圖距 三 實驗材料 粗糙鏈孢霉野生型菌株 Lys 接合型A 粗糙鏈孢霉賴氨酸缺陷型菌株Lys 接合型a 四 實驗器具和藥品 1 器具 顯微鏡 鐘表鑷 解剖針 接種針 載玻片 試管 培養(yǎng)皿 2 藥品 次氯酸鈉 五 實驗步驟 1 菌種活化 把野生型和缺陷型菌種從冰箱取出 分別接在兩支土豆培養(yǎng)基試管斜面上 28OC溫箱培養(yǎng) 天 培養(yǎng)到菌絲上部有分生孢子產(chǎn)生 雜交 同時在雜交培養(yǎng)基上接種兩親本菌株的分生孢子或菌絲 25OC溫箱進行混合培養(yǎng) 注意要貼好標簽 寫明親本菌株及雜交日期 2 雜交后 天就能看到許多棕色的原子囊果出現(xiàn) 以后原子囊果變黑變成子囊果 3 在 天左右 就可在顯微鏡下觀察 另外一種方法 在雜交培養(yǎng)基上接種一個親本菌株 25OC培養(yǎng) 天后即有原子囊果出現(xiàn) 同時準備好另一親本菌株的分生孢子 懸濁于無菌水中 近于白色的懸濁液 將此懸濁液加到形成原子囊果的培養(yǎng)物表面 使表面基本濕潤 繼續(xù)25OC培養(yǎng) 原子囊果在加進分生孢子一天后即可開始增大變黑成子囊果 天后即成熟 顯微鏡觀察步驟 在長有子囊果的試管中加少量無菌水 搖動片刻 把水倒在空三角瓶中 加熱煮沸 以防止分生孢子飛揚 取一載玻片 滴一滴 次氯酸鈉 然后用接種針挑出子囊果放在載玻片上 用另一載玻片蓋上 用手指壓片 將子囊果壓破 置顯微鏡下 倍 檢查 即可見到 個子囊 3 最后用過的針及玻片要用開水煮過洗凈 4 在顯微鏡下觀察記錄子囊孢子在子囊中的排列順序 將結(jié)果記入下表 紅色鏈孢霉性狀遺傳雜交實驗結(jié)果 鏈孢霉的子囊果和子囊 a 成熟的子囊果 b 散開的子囊 交換型子囊 交換型子囊 未交換型子囊 交換型子囊 未交換型子囊 未交換型子囊 六 作業(yè) 1 記錄每個完整子囊的類型 計算Lys基因的著絲粒距離 2 繪顯微鏡下觀察