微生物實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告范文.doc

7微生物實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌革蘭氏染色法及芽孢染色法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 初步掌握細(xì)菌涂片方法及革蘭氏染色的步驟；2. 掌握細(xì)菌芽孢染色的方法。 二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1. 制作細(xì)菌染色裝片。 2. 進(jìn)行革蘭氏染色法操作。 三、實(shí)驗(yàn)材料和用具大腸桿菌(Ecoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)菌液，枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)的斜面菌種。革蘭氏染色液(結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95乙醇、石炭酸復(fù)紅液等)、香柏油、二甲苯和5孔雀綠水溶液。 顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、載玻片、吸水紙、試管、小滴管、酒精燈和燒杯。 四、操作步驟(一) 革蘭氏染色 1涂菌 用無(wú)菌操作方法從試管中沾取菌液一環(huán)，用接種環(huán)在潔凈無(wú)脂的載玻片上做一薄而勻、直徑約1cm的菌膜。涂菌后將接種環(huán)火焰滅菌。2. 干燥 于空氣中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加溫加速干燥(溫度不宜過(guò)高)。3固定 目的是殺死細(xì)菌并使細(xì)菌粘附在玻片上，便于染料著色，常用加熱法即將細(xì)菌涂片向上，通過(guò)火焰3次，以熱而不燙為宜，防止茵體燒焦、變形。此制片可用于染色。4. 初染 于制片上滴加結(jié)晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。5. 媒染 滴加盧戈氏碘液，1min后水洗。6. 脫色 滴加95乙醇脫色，搖動(dòng)玻片至紫色不再為乙醇脫退為止(根據(jù)涂片之厚薄需時(shí)30s至1min水洗。7. 復(fù)染 滴加石炭酸復(fù)紅液復(fù)染1min，水洗。8用濾紙吸干,油鏡鏡檢。 (二)芽孢染色法 1方法1 (1) 取37培養(yǎng)18-24h的枯草芽孢桿菌作涂片，并干燥，固定(參見(jiàn)“細(xì)胞單染色法”) 。(2) 于載片上滴人35滴5孔雀綠水溶液。(3) 用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時(shí)開(kāi)始計(jì)算時(shí)間約4-5min。加熱過(guò)程中切勿使染料蒸干，必要時(shí)可添加少許染料。(4) 傾去染液，待玻片冷卻后，用自來(lái)水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。(5) 用0.5沙黃水溶液(或o05堿性復(fù)紅)復(fù)染1min，水洗。(6) 制片干燥后用油鏡觀察。芽孢呈綠色，菌體紅色。 2方法2 (1) 加1-2滴自來(lái)水于小試管中，用接種環(huán)從斜面上挑取23環(huán)培養(yǎng)1824h的枯草芽孢桿菌菌苔于試管中，并充分期勻打散，制成濃稠的菌液。 (2) 加5孔雀綠水溶液23滴于小試管中用接種環(huán)攪拌使染料與菌液充分混合。 (3) 將此試管浸干沸水浴(燒杯)中，加熱1520min。 (4) 用接種環(huán)從試管底部挑數(shù)環(huán)菌于潔凈的載玻片上，并涂成薄膜，將涂片通過(guò)微火3次固定。 (5) 水洗，至流出的水中無(wú)孔雀綠顏色為比。 (6) 加沙黃水溶液，染23min后，傾去染液，不用水洗。(7) 干燥后用油鏡觀察。芽孢綠色，菌體紅色。(三) 結(jié)果 革蘭氏陽(yáng)性菌染成藍(lán)紫色, 革蘭氏陽(yáng)性菌染成淡紅色。 (四) 檢測(cè)未知菌 用以上方法對(duì)未知菌進(jìn)行革蘭氏染色呵芽孢染色，并繪圖、記錄染色結(jié)果。 五、注意事項(xiàng) 1涂片務(wù)求均勻切忌過(guò)厚。2在染色過(guò)程中，不可使染液干涸。 3脫色時(shí)間十分重要，過(guò)長(zhǎng)，則脫色過(guò)度，會(huì)使陽(yáng)性菌被染成陰性菌。 4老齡菌因體內(nèi)核酸減少，會(huì)使陽(yáng)性菌被染成陰性菌，故不能選用。 5供芽孢染色用的菌種應(yīng)控制菌齡，使大部分芽泡仍保留在菌體上為宜。六、演示1. 無(wú)菌操作取菌、涂片及涂片的固定；2. 制片方法及染色過(guò)程。 七、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(一) 繪圖 大腸桿菌革蘭氏染色視野圖； 金黃色葡萄球菌革蘭氏染色視野圖；枯草芽孢桿菌及巨大芽孢桿菌的菌體及芽孢形態(tài)，芽孢的著生位置。(二) 記錄革蘭氏染色法步驟，并進(jìn)行結(jié)果分析。 (三) 未知菌的檢測(cè)結(jié)果。 七、問(wèn)題和思考 1涂片后為什么要進(jìn)行固定，固定時(shí)應(yīng)注意什么? 2. 什么是革蘭氏染色法?染色過(guò)程應(yīng)注意什么? 3. 試分析革蘭氏染色法在細(xì)菌分類中的意義。 4. 為什么芽孢染色要加熱?為什么芽孢及營(yíng)養(yǎng)體能染成不同的顏色?實(shí)驗(yàn)四 油鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)的觀察一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膹?fù)習(xí)顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用技術(shù)了解油浸系物鏡的基本原理，掌握油浸的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 1學(xué)習(xí)油浸系物鏡的使用方法。 2用油鏡觀察枯草芽抱桿菌和金黃色葡萄球菌染色裝片。 三、實(shí)驗(yàn)材料和用具枯草芽孢桿菌(Bacillus .subtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的染色裝片。 香柏油、二甲苯、 顯微鏡、擦鏡紙 。 四、操作步驟(一) 觀察前的準(zhǔn)備 1將顯微鏡置于平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊沿約為4cm。坐正，練習(xí)用左眼觀察。2調(diào)節(jié)光源：將低倍物鏡轉(zhuǎn)到工作位置，把光圈完全打開(kāi)，聚光器升至與載物臺(tái)相距約1mm左右。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡采集光源，光線較強(qiáng)的天然光源宜用平面鏡，光線較弱的天然光源或人工光源宜用凹面鏡，對(duì)光至視野內(nèi)均勻明亮為止。觀察染色裝片時(shí)，光線宜強(qiáng)；觀察未染色裝片時(shí)，光線不宜太強(qiáng)。 3. 低倍鏡觀察染色裝片 首先下降載物臺(tái)，將枯草芽孢桿菌染色裝片置于載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，將觀察位置移至物鏡正下方，物鏡降至距裝片0.5cm處，適當(dāng)縮小光圈,然后兩眼從目鏡觀察，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使物鏡逐漸上升(或使鏡臺(tái)下降)至發(fā)現(xiàn)物像時(shí)，改用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)到物像清楚為止。移動(dòng)裝片，把合適的觀察部分移至視野中心. 4. 高倍鏡觀察 眼睛離開(kāi)目鏡從側(cè)面觀察，旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換器，將高倍鏡轉(zhuǎn)至正下方，注意避免鏡頭與破片相撞。再用目鏡觀察，仔細(xì)調(diào)節(jié)光圈，使光線的明亮度適宜。用細(xì)調(diào)節(jié)器校正焦距使物鏡清晰為止。將最適宜觀察部分移至視野中心，繪圖。不要移動(dòng)裝片位置，準(zhǔn)備用油鏡觀察。5. 油鏡觀察 (1). 下降載物臺(tái)約2cm，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方。在玻片標(biāo)本的鏡檢部位(鏡頭的正下方)滴香柏油。 (2). 從側(cè)面注視，小心慢慢上升鏡筒，使油鏡浸在油中至油圈不擴(kuò)大為止，鏡頭幾乎與裝片接觸，但不可壓及裝片，以免壓碎玻片，損壞鏡頭。 (3). 將光線調(diào)亮，左眼從目鏡觀察，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺(tái)徐徐下降(切忌反方向旋轉(zhuǎn))，直至視野中有物像為止。（二）細(xì)菌形態(tài)的觀察1. 觀察細(xì)菌的基本形態(tài) 用低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀察革蘭氏染色的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，芽胞染色的蘇去金桿菌，并分別在油鏡下繪圖。五、注意事項(xiàng) 1注意擦鏡頭時(shí)，只能用擦鏡紙。2觀察完畢，必須將鏡筒上升，才能取下裝片放入另一裝片后，要按使用油鏡要求，重新操作不能在油鏡下直接取下和替換裝片，切記。3無(wú)菌操作過(guò)程中，接種環(huán)滅菌后不能觸及其他物品，挑菌不能過(guò)多。六、演示 1細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)裝片示范鏡；2無(wú)菌操作過(guò)程；3怎樣蓋蓋玻片才不產(chǎn)生氣泡。七、實(shí)驗(yàn)報(bào)告（一)繪圖 給出你所觀察到的幾種細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)視野圖。 繪出你所觀察到的細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)視野圖，并注明各部分。 （二)試指出在制備活菌裝片時(shí)，應(yīng)注意什么問(wèn)題? 八、問(wèn)題和思考1. 用明視野顯微鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)時(shí)，你認(rèn)為用染色裝片好還是用非染色裝片好？觀察活體裝片與染色裝片，光線調(diào)節(jié)各有什么不同? 2. 無(wú)菌操作過(guò)程中，可否將棉寒放在桌面上?為什么? 3. 試設(shè)一個(gè)準(zhǔn)備該實(shí)驗(yàn)的工作方案。 實(shí)驗(yàn)五 放線菌、酵母菌和霉菌形態(tài)觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌的代表種類的菌落形態(tài)特征。2放線菌、酵母菌和霉菌的細(xì)胞形態(tài)觀察。二、實(shí)驗(yàn)原理菌落形態(tài)是指某種微生物在一定的培養(yǎng)基上由單個(gè)菌體形成的群體形態(tài)。細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌，每一類微生物在一定培養(yǎng)條件下形成的菌落各具有某些相對(duì)的特征，利用觀察這些特征，來(lái)區(qū)分各大類微生物及初步識(shí)別、鑒定微生物，方法簡(jiǎn)便快速，在科研和生產(chǎn)實(shí)踐中常被采用。三、實(shí)驗(yàn)材料和用具圓褐固氮菌，枯草芽孢桿菌，灰色鏈霉菌，釀酒酵母，青霉的單個(gè)菌落平板，白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；Bouin氏固定液，0.01結(jié)晶紫溶液，酒精等。顯微鏡、載玻片、擦鏡紙、蓋玻片、接種環(huán)。四、操作步驟（一）四大菌落的形態(tài)觀察觀察圓褐固氮菌、枯草芽孢桿菌、灰色鏈霉菌、釀酒酵母、青霉的單個(gè)菌落特征，并按實(shí)驗(yàn)菌落特征描述的方法記錄結(jié)果。（二）放線菌的形態(tài)觀察用鑷子小心取出用插片法培養(yǎng)的放線菌培養(yǎng)皿中的一張蓋玻片，將其背面附著的菌絲體擦凈。然后將長(zhǎng)有菌的一面向上放在潔凈的載玻片上，用低倍鏡、高倍鏡觀察。找出3類菌絲及其分生孢子，并繪圖。注意放線菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲的粗細(xì)和色澤差異。（三）霉菌的形態(tài)觀察1粘片觀察：取一滴棉藍(lán)染色液置于載玻片中央，取一段透明膠帶，打開(kāi)霉菌平板培養(yǎng)物，粘取菌體，粘面朝下，放在染液上。鏡檢。2假根觀察：將培養(yǎng)根霉假根的平皿打開(kāi)，取出皿蓋內(nèi)的載玻片標(biāo)本，在附著菌絲體的一面蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。只要用低倍鏡就能觀察到假根及從根節(jié)上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子和兩個(gè)假根間的匍匐菌絲，觀察時(shí)注意調(diào)節(jié)焦距以看清各種構(gòu)造。（四）酵母菌的形態(tài)觀察酵母菌的話體染色觀察及死亡率的測(cè)定1以無(wú)菌水洗下PDA斜面培養(yǎng)的釀酒酵母菌苔，制成菌懸液。2. 取0.05%美藍(lán)染色液1滴，置載玻片中央，并用接種環(huán)取酵母菌懸液與染色液混勻，染色23min，加蓋玻片，在高倍鏡下觀察酵母菌個(gè)體形態(tài)，區(qū)分其母細(xì)胞與芽體，區(qū)分死細(xì)胞(藍(lán)色)與活細(xì)胞(不著色)。3. 在一個(gè)視野里計(jì)數(shù)死細(xì)胞和活細(xì)胞，共計(jì)數(shù)56個(gè)視野。酵母菌死亡率一般用百分?jǐn)?shù)來(lái)表示，以下式來(lái)計(jì)算：死亡率=死細(xì)胞總數(shù)死活細(xì)胞總數(shù)100%五、注意事項(xiàng)1用于活化酵母菌的麥芽汁培養(yǎng)基要新鮮、表面濕潤(rùn)；在產(chǎn)孢培養(yǎng)基上加大移種量，可提高子囊形成率；通過(guò)微加熱增加酵母的死亡率，易于觀察死亡細(xì)胞。2培養(yǎng)放線菌中要注意，放線菌的生長(zhǎng)速度較慢，培養(yǎng)期較長(zhǎng)，在操作中應(yīng)特別注意無(wú)菌操作，嚴(yán)防雜菌污染。3玻璃紙法培養(yǎng)接種時(shí)注意玻璃紙與平板瓊脂培養(yǎng)基間不宜有氣泡，以免影響其表面放線菌的生長(zhǎng)，六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1. 將觀察到的微生物菌落特征填入下表中。2. 計(jì)算酵母菌的死亡率3根霉和青霉形態(tài)圖，示各部。七、問(wèn)題和思考1. 試比較細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌的菌落形態(tài)的差異？ 2酵母菌的假菌絲是怎樣形成的?與霉菌的真菌絲有何區(qū)別?3在高倍鏡或油鏡下如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲?實(shí)驗(yàn)六 微生物顯微計(jì)數(shù)和大小測(cè)量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛢?nèi)容 目的：學(xué)會(huì)測(cè)微尺的使用和計(jì)算方法及對(duì)球菌和桿菌的測(cè)量 內(nèi)容： 1認(rèn)識(shí)測(cè)微尺，學(xué)習(xí)目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定。 2測(cè)定金黃色葡萄球菌和大腸桿菌菌體的大小。3計(jì)數(shù)板直接鏡檢計(jì)數(shù)。 4載玻片直接鏡檢計(jì)數(shù)。 5平板菌落計(jì)數(shù)。二、實(shí)驗(yàn)材料和用具 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)斜面培養(yǎng)物(約培養(yǎng) 10h)、培養(yǎng) 57d 的大腸桿菌(E.coli)菌液。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、美藍(lán)染色液、；結(jié)晶紫染色液、香柏油、二甲苯。 顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、目鏡測(cè)微尺、酒精燈、鏡臺(tái)測(cè)微尺、擦鏡紙、酒精燈、濾紙條、載玻片、蓋玻片、無(wú)菌微量移液管、接種環(huán)、無(wú)菌試管、涂布器、無(wú)菌培養(yǎng)皿。 三、操作步驟 (一)計(jì)數(shù)板直接鏡檢計(jì)數(shù) 1血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板由四條平行槽構(gòu)成 3個(gè)平臺(tái)，中間的平臺(tái)較窄，其中間又被一短槽隔成兩半，每邊平臺(tái)面各有一個(gè)含 9 個(gè)大格的方格網(wǎng)，中間大格為計(jì)數(shù)室。計(jì)數(shù)室的長(zhǎng)和寬各為l mm，中間平臺(tái)下陷 0.01 mm，故蓋上蓋玻片后計(jì)數(shù)室的總?cè)莘e為 0.1 mm3。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造見(jiàn)圖 16. 常見(jiàn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室有兩種規(guī)格。一種是 16x 25 型，稱為麥?zhǔn)涎?xì)胞計(jì)數(shù)板共有 16個(gè)小格，每個(gè)小格分為 25 個(gè)小格。另一種是 25x16 型，稱為希里格式血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，共有 25 個(gè)中格，每個(gè)中格又分成 16 個(gè)小格。但是不管哪種規(guī)格的血細(xì)胞計(jì)板其計(jì)數(shù)室的小格均由 400 個(gè)小方格組成。應(yīng)用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)算微生物細(xì)胞的數(shù)量，方法是先測(cè)定若干個(gè)方格中的微生物細(xì)胞，再換算成每 m1 菌液(或每 g 樣品)中微生物細(xì)胞數(shù)量。 2細(xì)菌數(shù)量的測(cè)定 (1) 稀釋加樣：取枯草芽孢桿菌斜面少量菌體至 100mL無(wú)菌水中，稀釋混勻后待用(濃度約為 104 - 105mL)。先將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，用吸管吸取以上稀釋液滴于蓋玻片的邊緣，讓菌液自行滲人，多余菌液用濾紙吸去，稍待片刻，待細(xì)菌細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)室底部，將計(jì)數(shù)板放于載物臺(tái)的中央，按下列步驟尋找計(jì)數(shù)室并計(jì)數(shù)。(2) 找計(jì)數(shù)室：先在低倍鏡下尋找計(jì)數(shù)板大方格網(wǎng)的位置，轉(zhuǎn)換高倍鏡后調(diào)節(jié)光亮度至菌體和計(jì)數(shù)室線條清晰為止，再將計(jì)數(shù)室一角的小格移至視野中。順著大方格線移動(dòng)計(jì)數(shù)板，使計(jì)數(shù)室位于視野中間。 (3) 計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)時(shí)，如用 16x 25 則計(jì)數(shù)板則按對(duì)角線方位，取左上、右上、左下、右下 4 個(gè)大格(共4 個(gè)大格，100 個(gè)小格)內(nèi)的細(xì)胞逐一進(jìn)行計(jì)數(shù)；如使用規(guī)格為 2516 型的計(jì)數(shù)板，則除取左上、右上、左下、右下 4 個(gè)大格外，還需加中央的一個(gè)大格(共 5 個(gè)大格，80 個(gè)小格)內(nèi)的細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)當(dāng)遇到大格線上的細(xì)菌時(shí)，一般只計(jì)此大格的上方及右方線上的細(xì)胞(或只計(jì)下方及左方線上的細(xì)胞)，將計(jì)得的細(xì)胞數(shù)填人結(jié)果表中對(duì)每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù) 3 次，取具平均值，按下列公式計(jì)算每 mL 菌液中所含的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)。(二)載玻片直接鏡檢計(jì)數(shù) 1搖動(dòng)菌液使其混合均勻，用無(wú)菌微量移液管取菌液 0.01mL于載玻片上并用無(wú)菌接種環(huán)均勻地涂布 1cm2的面積上。風(fēng)干，固定，結(jié)晶紫染色lmin，沖洗干燥備用。 2用物鏡測(cè)微尺，測(cè)量顯微鏡油鏡觀察時(shí)的視野直徑，并以S=r2公式，計(jì)算出視野面積。 3將涂片置于載物臺(tái)，滴香柏油，以油鏡觀察，不斷變化視野共觀察 N 個(gè)視野，計(jì)數(shù)每一視野中細(xì)菌個(gè)數(shù)。以下列公式計(jì)算每毫升菌液中的含菌數(shù)量： (三)平板菌落計(jì)數(shù) 另取滅菌移液管吸取上述枯草芽孢桿菌稀釋液 1mL，放人已滅菌的培養(yǎng)皿中，再倒人融化而冷卻到 50左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,同時(shí)制作 3 個(gè)平板皿中鋪成薄層，并使平皿作前后和左右滑動(dòng)，使樣品和培養(yǎng)基混勻待其凝固后倒置，37培養(yǎng) 24 h 后汁算菌落數(shù)，并計(jì)算其每 mL的含菌量。（四）細(xì)菌大小測(cè)定l測(cè)微尺的構(gòu)造 顯微鏡測(cè)微尺是由目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)接物測(cè)微尺組成，目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻璃片，其中有精確的等分刻度，在 5mm 刻尺上分 50 份(圖 151B)。目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際代表的長(zhǎng)度隨使用接目鏡和接物鏡的放大倍數(shù)而改變，因此在使用前必須用鏡臺(tái)測(cè)微尺進(jìn)行標(biāo)定。鏡臺(tái)測(cè)微尺為專用中央有精確等分線的載玻片(圖 151A)，一般將長(zhǎng)為 1mm的直線等分 100個(gè)小格，每格長(zhǎng) 0.01mm, 即 10um，是專用于校正目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度的。2目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定 把目鏡的上透鏡旋開(kāi)，將目鏡測(cè)微尺輕輕放入目鏡的隔板上使有刻度的一面朝下。將鏡臺(tái)測(cè)微尺放在顯微鏡的載物臺(tái)上，使有刻度的一面朝上。先用低倍鏡觀察，調(diào)焦距，待看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺的刻度與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度相平行并使兩尺左邊的一條線重合，向右另外一條兩尺相重合的直線(圖 151B)、 3計(jì)算方法 ： 例如，目鏡測(cè)微尺 20 個(gè)小格等于鏡臺(tái)測(cè)微尺 3 個(gè)小格，已知鏡臺(tái)測(cè)微尺每格為 10um，則 3 小格的長(zhǎng)度為 31030um，那么相應(yīng)地在目鏡測(cè)微尺上每小格長(zhǎng)度為 3X10201.5(um)。用以上計(jì)算方法分別校正低倍鏡,高倍鏡及油鏡下目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際長(zhǎng)度。4菌體大小的測(cè)定 將鏡臺(tái)測(cè)微尺取下，分別換上大腸桿菌及金黃色葡萄球菌玻片標(biāo)本，先在低倍鏡和高倍鏡下找到目的物，然后在油鏡下用目鏡測(cè)微尺測(cè)量菌體的大小。先量出菌體的長(zhǎng)和寬占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)，再以目鏡測(cè)微尺每格的長(zhǎng)度計(jì)算出菌體的長(zhǎng)和寬。并詳細(xì)記錄于表中。 例如目鏡測(cè)微尺在這架顯微鏡下，每格相當(dāng)于 1.5 um，測(cè)量的結(jié)果，若菌體的平均長(zhǎng)度相當(dāng)于目鏡測(cè)微尺的 2 格則菌體長(zhǎng)應(yīng)為 21.5 um3.0um。 一般測(cè)量菌體的大小應(yīng)測(cè)定 10 - 20 個(gè)菌體求出平均值才能代表該菌的大小。 四、注意事項(xiàng) 1鏡臺(tái)測(cè)微尺的玻片很薄，在標(biāo)定油鏡頭時(shí)，要格外注意，以免壓碎鏡臺(tái)測(cè)微尺或損壞鏡頭。 2標(biāo)定目鏡測(cè)微尺時(shí)要注意淮確對(duì)正目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的重合線。3直接鏡檢計(jì)數(shù)完畢，用蒸餾水沖洗計(jì)數(shù)板。絕不能用硬物洗刷。洗后待自行晾干或用濾紙沾干。最后用擦鏡紙擦干凈。若計(jì)數(shù)是病原微生物，則需先浸泡在 5的石炭酸溶液中進(jìn)行消毒，然后再進(jìn)行清洗。五、演示 1目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺的顯微鏡下示教 2.標(biāo)定及測(cè)量方法示范4平板菌落計(jì)數(shù)操作過(guò)程。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1. 目鏡測(cè)微尺標(biāo)定結(jié)果： 低倍鏡下 倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是 高倍鏡下 倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度為 油鏡下 倍目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度是 2菌體大小測(cè)定結(jié)果：試與已知的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的大小作一比較是否一致，為何? 3. 計(jì)數(shù)板直接鏡檢計(jì)數(shù)結(jié)果：4. 涂片直接鏡檢計(jì)數(shù)結(jié)果：5. 平板菌落計(jì)數(shù)結(jié)果七、問(wèn)題和思考 1 根據(jù)你的體會(huì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)算的誤差主要來(lái)自哪些方面?應(yīng)如何減少誤差? 2比較各種計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。 3設(shè)計(jì)一個(gè)方案如何計(jì)數(shù)市售酸奶或三株口服液或菌肥制品的單位含菌數(shù)。4. 為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡和物鏡時(shí)必須重新用鏡臺(tái)測(cè)微尺對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)行標(biāo)定? 5. 若目鏡不變，目鏡測(cè)微尺也不變，只改變物鏡，那么目鏡測(cè)微尺每格所測(cè)量的鏡臺(tái)上的菌體細(xì)胞的實(shí)際長(zhǎng)度(或?qū)挾?是否相同?為什么? 實(shí)驗(yàn)七 E.coli生長(zhǎng)曲線的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 了解細(xì)菌生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)及測(cè)定原理；2 學(xué)習(xí)用比濁法測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。二、基本原理 三、器材 1菌種：大腸桿菌 2培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基3儀器和器具： 四、方法與步驟 1標(biāo)記編號(hào) 取11支無(wú)菌試管，分別用記號(hào)筆標(biāo)明培養(yǎng)時(shí)間，分別編號(hào)為0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20 h。2接種用5.0 mL無(wú)菌吸管分別準(zhǔn)確吸取2.5 mL種子液加入盛有50 mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的三角瓶中，混合均勻后分別取5.0 mL混合液放入上述標(biāo)記的11支無(wú)菌試管中。3 培養(yǎng)于37下振蕩培養(yǎng)250 r/min，分別培養(yǎng)0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h，將標(biāo)記有相應(yīng)時(shí)間的試管取出，立即放冰箱中貯存，待培養(yǎng)結(jié)束時(shí)一同測(cè)定OD值。 4生長(zhǎng)量測(cè)定 將未接種的肉膏蛋白胨培養(yǎng)基傾倒入比色杯中，選用600nm波長(zhǎng)進(jìn)行比濁測(cè)定。并對(duì)不同時(shí)間培養(yǎng)液從0h起依次進(jìn)行測(cè)定，對(duì)濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定，使其OD值在0.10.0.65以內(nèi)，經(jīng)稀釋后測(cè)得的OD值要乘以稀釋倍數(shù)，才是培養(yǎng)液實(shí)際的OD值。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1 將測(cè)定的OD值填入下表： 2 以上述表格中的時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD600 值為縱坐標(biāo)，繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。3思考：（1）用本實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定微生物生長(zhǎng)曲線，有何優(yōu)點(diǎn)？ (2) 細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所經(jīng)歷的四個(gè)時(shí)期中，哪個(gè)時(shí)期其代時(shí)最短？若細(xì)胞密度為103/ml，培養(yǎng)4.5h后，其密度高達(dá)2108/ml，計(jì)計(jì)算出其代時(shí)。實(shí)驗(yàn)八 細(xì)菌的生理生化反應(yīng)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 證明不同微生物對(duì)各種有機(jī)大分子物質(zhì)的水解能力不同，從而說(shuō)明不同的微生物有著不同的酶系統(tǒng)；2. 掌握進(jìn)行微生物大分子物質(zhì)水解實(shí)驗(yàn)的原理和方法 3. 掌握通過(guò)糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法；4. 了解IMViC反應(yīng)的原理及其在腸道細(xì)菌鑒定中的意義和方法。二、 實(shí)驗(yàn)原理 （請(qǐng)補(bǔ)充）三、 實(shí)驗(yàn)器材 （請(qǐng)補(bǔ)充）四、 實(shí)驗(yàn)步驟淀粉水解試驗(yàn)：1. 用記號(hào)筆在淀粉培養(yǎng)基平板底部劃分4部分。2. 將Bacillus subtilis, Escherichia coli, Enterobacter aerogenes，staphylococcus aureus分別在不同的部分劃線接種，在平板的反面分別寫上菌名。3. 將平板倒置37生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（A-509），24 h后觀察各種細(xì)菌生長(zhǎng)情況：打開(kāi)蓋子，滴入少量盧戈氏碘液，輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘液均勻鋪面整個(gè)平板。糖發(fā)酵試驗(yàn)：1. 用記號(hào)筆在試管外壁上分別表明表明發(fā)酵培養(yǎng)基的名稱和所接種的細(xì)菌菌名。2. 取3支含糖發(fā)酵培養(yǎng)基的試管，其中2支分別接種Escherichia coli，Enterobacter aerogenes，另外1支保留不接種的培養(yǎng)基為對(duì)照。3. 37恒溫培養(yǎng)24 - 48 h后觀察，如指示劑變黃，表示產(chǎn)酸，為陽(yáng)性，不變或變藍(lán)為陰性；倒立德漢氏小管中如有氣泡，表示代謝產(chǎn)氣。4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：產(chǎn)酸產(chǎn)氣用“”表示，只產(chǎn)酸的用“+”表示，不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的用“”表示。吲哚試驗(yàn)1. 將Escherichia coli，Enterobacter aerogenes，分別接種于2支蛋白胨水培養(yǎng)基中，37恒溫培養(yǎng)24 h。2. 在培養(yǎng)基中加入乙醚1.0 mL ,充分振蕩使吲哚溶于乙醚中，靜置2 min，待乙醚層浮于培養(yǎng)液上面后，再沿試管壁慢慢加入吲哚試劑10滴。乙醚層呈玫瑰紅色的為陽(yáng)性。注意：加入試劑后，不許搖動(dòng)，否則無(wú)紅色或紅色不明顯。甲基紅（M. R.）試驗(yàn)和伏-普（V. P.）試驗(yàn)1. 將Escherichia coli，Enterobacter aerogenes，分別接種于2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，37恒溫培養(yǎng)24 h。2. M. R.試驗(yàn)：各取出1支培養(yǎng)好的試管，取沿管壁加入M. R. 試劑3 4滴，觀察，培養(yǎng)基由原來(lái)的橘黃色變?yōu)榧t色的為陽(yáng)性反應(yīng)。3. V. P.試驗(yàn)：各取1支培養(yǎng)好的試管，加入10滴40%的KOH，然后加入等量的5%的-萘酚溶液，用力振蕩，37恒溫15 - 30 min，培養(yǎng)物呈紅色的為陽(yáng)性反應(yīng)。五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表格見(jiàn)黑板）六、 結(jié)果分析（對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行總結(jié)與分析）實(shí)驗(yàn)九 環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 學(xué)會(huì)自己設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)測(cè)試一些環(huán)境因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響的方法與步驟。2、 掌握物理因素、化學(xué)因素、生物因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響的原理。3、 掌握培養(yǎng)基的配置及滅菌方法。4、 了解并會(huì)使用微生物實(shí)驗(yàn)室的基本儀器及常用滅菌方法。二、實(shí)驗(yàn)原理微生物的生命活動(dòng)是由其細(xì)胞內(nèi)外一系列物化環(huán)境系統(tǒng)統(tǒng)一體所構(gòu)成的，除營(yíng)養(yǎng)條件外，影響微生物生長(zhǎng)的環(huán)境因素，包括物理因素、化學(xué)因素和生物因素對(duì)微生物的生長(zhǎng)繁殖、生理生化過(guò)程均能產(chǎn)生很大影響，總之一切不良的環(huán)境條件均能使微生物的生長(zhǎng)受抑制，甚至導(dǎo)致菌體死亡。1、 物理因素pHPH通過(guò)影響細(xì)胞質(zhì)膜的通透性，膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和物質(zhì)的溶解性或電離性來(lái)影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而影響微生物的生長(zhǎng)速率。2、化學(xué)因素消毒劑（碘酒） 通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞裂解的方式殺死細(xì)胞。2、 生物因素抗生素（青霉素）能抑制微生物生長(zhǎng)或殺死微生物的化合物，它們主要通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成，破壞細(xì)胞質(zhì)膜，作用于呼吸鏈以干擾氧化磷酸化，抑制蛋白質(zhì)和核酸合成等方式來(lái)抑制微生物的生長(zhǎng)或殺死微生物。三、實(shí)驗(yàn)材料菌種：3號(hào)金黃色葡萄球菌、5號(hào)大腸桿菌儀器：高壓滅菌鍋、電子天平、電熱爐、恒溫培養(yǎng)箱、紫外分光光度計(jì)、移液槍、打孔器器皿：玻璃棒、大燒杯、錐形瓶、試管和培養(yǎng)皿（使用時(shí)滅菌）、接種環(huán)、涂布棒槍頭試劑：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（牛肉膏，蛋白胨，NaCl,瓊脂粉，水，PH7.27.4） 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液（同上，不加瓊脂粉） 無(wú)菌水 1mol/L HCL 1mol/L NaOH四、實(shí)驗(yàn)步驟1. pH對(duì)微生物的影響（1） 配置不同PH值得培養(yǎng)基，0.3克 牛肉膏、1克蛋白胨、0.5克氯化鈉、100毫升的水。從最低PH 值開(kāi)始調(diào)：3.5、5.5、7.5、9.5、11.5五個(gè)PH濃度各5毫升分裝十支試管，即每個(gè)梯度做兩管。進(jìn)行標(biāo)記后滅菌。（2） 制備菌液，取37攝氏度培養(yǎng)了15小時(shí)的大腸桿菌斜面一支，挑取兩環(huán)菌群至4毫升的無(wú)菌水中，混勻后待用。（3） 滴加菌液，用移液搶向第一步中準(zhǔn)備好的十支試管中分別加200微升的菌懸液，混勻后在37攝氏度下培養(yǎng)24小時(shí)。（4） OD值得測(cè)定，將培養(yǎng)好的菌液混勻后用721光電比濁法測(cè)各試管的OD值并做記錄。2. 碘酒試驗(yàn)（1）. 配置固體培養(yǎng)基，取0.6克牛肉膏、2克蛋白胨、1克氯化鈉、3克瓊脂、200毫升水。加熱溶化瓊脂后，將PH調(diào)至7.5，裝入錐形瓶中封口滅菌備用。（2）倒平板，將第一步制好的培養(yǎng)基溶化后冷卻到50至60攝氏度后倒平板，每個(gè)培養(yǎng)皿15毫升，共倒10個(gè)平板，其中四個(gè)做碘酒試驗(yàn)，對(duì)這四個(gè)平皿做碘酒和接種菌的標(biāo)記。另六個(gè)培養(yǎng)皿是為下一個(gè)實(shí)驗(yàn)抗生素實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備的。（3）菌懸液制備，取37攝氏度培養(yǎng)了15小時(shí)的活化菌種，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，分別挑取3環(huán)分別加入兩個(gè)4毫升的無(wú)菌水中混勻備用。（4）碘液梯度稀釋，取2.5%的碘酒1毫升加入4毫升自來(lái)水混勻，依次稀釋制備成0.5%、0.1%、0.02%、0.004%的碘酒梯度。（5）涂布平板并加濾紙片，用移液搶吸取200微升菌懸液至培養(yǎng)皿中均勻涂布（兩種菌每個(gè)涂?jī)蓚€(gè)平板），將濾紙片分別在不同濃度的碘酒液中浸濕后輕輕放在對(duì)應(yīng)標(biāo)記濃度和菌樣的培養(yǎng)皿中，一個(gè)培養(yǎng)皿做兩個(gè)梯度，每個(gè)梯度放3個(gè)濾紙片。（6）將培養(yǎng)皿在37攝氏度下恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后測(cè)量每個(gè)濾紙片的抑菌斑大小并做記錄。3、青霉素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響（1）制備菌懸液，取37攝氏度下培養(yǎng)了15小時(shí)的活化菌種（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的斜面各一支）分別挑取3環(huán)分別加到4毫升無(wú)菌水中，制成兩種菌的菌懸液。（2）梯度稀釋青霉素，將40萬(wàn)單位的青霉素依次稀釋為5萬(wàn)、1.25萬(wàn)、0.312萬(wàn)、0.078萬(wàn)、0.015萬(wàn)單位。（3）涂布，用移液搶吸取200微升菌懸液至培養(yǎng)皿中（碘酒試驗(yàn)已經(jīng)備好），兩種菌各涂3個(gè)平板。用標(biāo)記筆將六個(gè)平板從中間劃線，以備加六種濃度的濾紙。（4）加濾紙片，將濾紙片在分別不同濃度的青霉素液浸濕輕放于對(duì)應(yīng)濃度的平皿中，每個(gè)濃度放3個(gè)濾紙片，一個(gè)平板做兩個(gè)濃度，然后在37攝氏度下恒溫培養(yǎng)24小時(shí)。（5）測(cè)量，將各濃度下的濾紙片的抑菌斑直徑測(cè)量出來(lái)，并做記錄。、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析1. PH值對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響PH值試管1試管2平均值2. 碘酒對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響菌種濃度（%）直徑（cm）平均值大腸桿菌金黃色葡萄球菌注：濾紙片直徑0.5cm3.青霉素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響菌種濃度（%）直徑（cm）平均值大腸桿菌金黃色葡萄球菌日本發(fā)動(dòng)了蓄謀已久的侵華戰(zhàn)爭(zhēng).這場(chǎng)侵略戰(zhàn)爭(zhēng)給中國(guó)人民帶來(lái)了空前的災(zāi)難和損失,也給后人留下了深刻的歷史血鑒of support and hanger. Cable hole plugging gaps should use qualified fireproof materials, block surface should have sufficient strength, surface appearance. When cables pass through the firewall, of lax structure of local fire safety clamps. Thermoplastics production, to comply with the process, no bubbles in the thermoplastics pipes, linear nose consistent with the core wire specifications, contact is good, no cracks, break. Tinned copper nose clean solder full exterior surface is smooth without burrs. Control cable Assembly should be fastened, dense, solid, clean, and beautiful. Secondary wiring the cable terminations should be arranged by the actual location of the device line cards, the wiring from the upper to the lower, from left to right in the order. Fixed to maintain consistent spacing between lines, flat, should be around the corner in the same location, same shape, to ensure that the wiring process neater and more elegant. 5 thermal process control measures for quality problems 5.1 control thermal duct system leakage measure to ensure that the use of electric door and actuator