槐花米中蘆丁的提取、分離與鑒定.doc

槐花米中蘆丁的提取與鑒定背景知識(shí)蘆?。≧utin）又稱(chēng)蕓香苷，廣泛存在于植物界中，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含蘆丁的植物至少在70種以上，如煙葉、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有。尤以槐花米（為植物Sophora japonica L 的未開(kāi)放的花蕾）和蕎麥中含量最高(含量可達(dá)12-16%)，可作為大量提取蘆丁的原料。蘆丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羥基與蕓香糖（Rutinose）葡萄糖（Glucose）與鼠李糖（Rhamnose）組成的雙糖脫水形成的苷。蘆丁為淺黃色粉末或極細(xì)的針狀結(jié)晶，含有3分子的結(jié)晶水，熔點(diǎn)為174178，無(wú)水物188190。溶解度：冷水中為1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；熱乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于堿而呈黃色。蘆丁分子中具有較多酚羥基，顯弱酸性，易溶于堿液，酸化后又可析出，因此，本實(shí)驗(yàn)采用堿提取酸沉淀法提取蘆丁。蘆丁具有維生素P樣作用。能維持血管的正常通透性，減低血管的脆性，縮短流血時(shí)間，可作為高血壓病的輔助治療劑。亦可用于防治因缺乏蘆丁所致的其他出血癥。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)蘆丁的提取與精制掌握堿-酸法提取黃酮類(lèi)化合物的原理及操作；熟悉蘆丁、槲皮素的結(jié)構(gòu)性質(zhì)和檢識(shí)方法。二、實(shí)驗(yàn)要求獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)，從槐花米中提取出蘆丁并進(jìn)行鑒定。三、實(shí)驗(yàn)原理蘆丁屬黃酮類(lèi)化合物，分子中有較多酚羥基，具弱酸性，易溶于熱堿中，酸化后又析出，因此可以用堿溶酸沉的方法提取蘆丁，又利用蘆丁在冷水和熱水中溶解度相差較大的特性進(jìn)行重結(jié)晶精制。四、實(shí)驗(yàn)材料和器皿【器皿】燒杯（500ml）2個(gè)，試管2個(gè)，布氏漏斗1個(gè)，玻璃棒1根，抽濾瓶1個(gè)，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1個(gè)，濾紙，pH試紙，電熱爐，真空抽濾機(jī)?！静牧稀炕泵谆?0 g，飽和石灰水，0.4%硼砂水溶液，鎂粉，pH試紙，濃鹽酸，95%乙醇，10% 萘酚乙醇溶液，濃硫酸，蒸餾水。 五、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容操作步驟： 稱(chēng)取30g槐花米于研缽中研成粉狀物，置于500mL燒杯中，加入飽和石灰水，加熱至沸，并不斷攪拌，煮沸30分鐘后，趁熱抽濾。然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值為45。放置1-2h，使沉淀完全，抽濾，沉淀用水洗滌23次，得到蘆丁的粗產(chǎn)物。流程圖： 沉淀（精制蘆?。┗被?0g（研碎）置于500 ml燒杯中，加300ml熱水，在攪拌下加飽和石灰水調(diào)pH至8-9，加熱煮沸10-20min，趁熱過(guò)濾。殘?jiān)鼮V液在6070下用濃鹽酸調(diào)pH45，靜置2小時(shí)，抽濾。沉淀用水洗至中性，自然干燥，稱(chēng)重。沉淀（粗制蘆?。┚茟腋∮谡麴s水中（約500ml），加熱煮沸10-20ml，至澄清，趁熱過(guò)濾。 不溶物（棄去）濾液靜置充分冷卻，抽濾，沉淀用蒸餾水洗至中性，自然干燥，稱(chēng)重選做內(nèi)容蘆丁的提取與分離流程圖操作步驟： 稱(chēng)取30g槐花米于研缽中研成粉狀物，置于500mL燒杯中，加入300ml熱水，以飽和石灰水調(diào)pH至8-9，加熱至沸，并不斷攪拌，煮沸10-20分鐘后，趁熱抽濾。然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值為45。放置1-2h，使沉淀完全，抽濾，沉淀用水洗滌23次，得到蘆丁的粗產(chǎn)物。六、實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵及注意事項(xiàng)1、本實(shí)驗(yàn)采用堿溶酸沉法從槐花米中提取蕓香苷，收率穩(wěn)定，且操作簡(jiǎn)便。在提取時(shí)應(yīng)注意將槐花米搗碎，使蕓香苷易于在熱水中溶出?；被字泻写罅空骋嘿|(zhì)，加入石灰乳使生成鈣鹽沉淀除去。pH應(yīng)嚴(yán)格控制在8-9，不得超過(guò)10.因?yàn)樵趶?qiáng)堿條件下煮沸，時(shí)間稍長(zhǎng)可促使蕓香苷水解而破壞，使得收率下降。酸沉淀時(shí)pH應(yīng)為4-5，不宜過(guò)低，否則會(huì)使蕓香苷形成烊鹽溶于水，也降低收率。2、提取過(guò)程中加入硼砂水的作用：既能調(diào)節(jié)堿性水溶液的pH值，又能保護(hù)蕓香苷分子中的鄰二酚羥基不被氧化，亦保護(hù)不與鈣離子絡(luò)合，使蕓香苷不受損失。七、蘆丁的鑒定 蘆丁的定性反應(yīng) 取蘆丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解，分成二份作下述試驗(yàn)： A. 鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取上述溶液1-2ml，加2滴濃鹽酸，再加少許鎂粉，注意觀察顏色變化情況。（紅色） B. Molish反應(yīng)：取上述溶液1-2ml，然后再加入等體積的10% -萘酚乙醇溶液，搖勻，沿管壁滴加濃硫酸，注意觀察兩液面產(chǎn)生的顏色變化（紫紅色）。八、思考