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第1節(jié)培養(yǎng)基對微生物的選擇作用 1 能說出培養(yǎng)基的類型 用途和基本成分 2 比較消毒和滅菌的區(qū)別 3 舉例說明常用的消毒與滅菌的方法 4 能記住培養(yǎng)基的配制方法 5 研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用 一 二 一 培養(yǎng)基的制備1 培養(yǎng)基 1 概念培養(yǎng)基是人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì) 用以培養(yǎng) 分離 鑒定和保存各種微生物 2 成分一般包括水分 碳源 氮源 微量元素和無機鹽等 3 種類培養(yǎng)基按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基 后者常用瓊脂做凝固劑 一 二 2 培養(yǎng)基的配制和滅菌 1 培養(yǎng)基的制備包括配制和滅菌兩大步驟 2 配制關(guān)鍵 準確稱量 調(diào)準ph 規(guī)范制作棉塞 徹底滅菌 3 主要制作流程 稱量 溶化 調(diào)ph 分裝 加塞和包扎 滅菌 擺斜面及倒平板 4 由于配制培養(yǎng)基的各類營養(yǎng)物質(zhì)和容器等含有多種不同的微生物 配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌 及時殺滅培養(yǎng)基中的微生物 同時防止微生物大量繁殖造成的培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的改變 5 常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法 通過高壓 高溫蒸汽使菌體蛋白質(zhì)凝固變性以達到滅菌的目的 一 二 思考 日常生活中的牛奶在進入市場銷售前要進行消毒 可采用哪種消毒方法呢 提示 用巴氏消毒法對牛奶進行消毒 可以殺死牛奶中的微生物 同時使牛奶的營養(yǎng)成分不會被破壞 一 二 二 培養(yǎng)基對微生物的選擇作用1 菌落微生物通過某種方法接種到適于生長的固體培養(yǎng)基表面上 在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時間后 單個的菌體或孢子就可以生長繁殖成一個個肉眼可見的細胞群體 稱為菌落 2 培養(yǎng)基對微生物的選擇作用的原理不同種微生物對營養(yǎng)要求不一樣 通過選擇不同的培養(yǎng)基 人為控制培養(yǎng)基的ph 碳源 氮源 滲透壓等條件 使選擇的培養(yǎng)基利于某類或某種微生物的生長 而不利于其他微生物的生存 可以達到分離 培養(yǎng)不同微生物的目的 例如 細菌生長需要的氮源高 ph中性或微堿性 因此培養(yǎng)細菌常采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 酵母菌和霉菌生長所需的碳源含量高 ph偏酸性 因此分離真菌常采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 一 二 3 培養(yǎng)基對微生物的選擇作用的意義在科研和生產(chǎn)實踐中具有重要意義 它是分離和純化不同類型微生物的基礎(chǔ) 1 培養(yǎng)基的成分與微生物生長所需的營養(yǎng) 2 培養(yǎng)基的類型及其應(yīng)用 3 配制培養(yǎng)基的原則 1 目的要明確 2 營養(yǎng)要協(xié)調(diào) 3 ph要適宜4 消毒與滅菌的比較 二者的區(qū)別 前者去除的是部分微生物 后者去除的是所有微生物 5 三種常用滅菌方法的比較 6 倒平板的注意事項 1 培養(yǎng)基滅菌后 需要冷卻到50 60 后 才能用來倒平板 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶 感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時 就可以進行倒平板了 2 倒平板前 要將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶瓶口通過火焰灼燒 以防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基 3 平板冷凝后 需將平板倒置 平板冷凝后 皿蓋上會凝結(jié)水珠 凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高 將平板倒置 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā) 又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基 造成污染 4 倒平板過程中 如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位 空氣中的微生物可能會在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生 因此不要再繼續(xù)使用這個平板培養(yǎng)微生物 題型一 題型二 題型三 題型四 微生物的營養(yǎng) 例題1 下列關(guān)于微生物的營養(yǎng)的說法 正確的是 a 同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源b 凡是碳源都能提供能量c 除水以外的無機物僅提供無機鹽d 無機氮源也可能提供能量解析 對某些微生物來說 含c h o n的化合物既可以作為碳源 又可以作為氮源 co2可以作為光能自養(yǎng)微生物的碳源 但不能提供能量 co2和n2是無機物 也可以分別作為微生物的碳源和氮源 硝化細菌所利用的氮源是無機氮源氨 同時氨也為硝化細菌提供用以化能合成作用的能量 答案 d 題型一 題型二 題型三 題型四 易錯警示含c h o n的化合物既可以作為一部分微生物的碳源 又可以作為氮源 有機碳源能提供能量 無機碳源不能提供能量 題型一 題型二 題型三 題型四 無菌操作相關(guān)技術(shù) 例題2 細菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽 酒精 火焰灼燒等幾種不同的處理方法 這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌 a 接種針 手 培養(yǎng)基b 高壓鍋 手 接種針c 培養(yǎng)基 手 接種針d 接種針 手 高壓鍋解析 高壓蒸汽滅菌鍋通常用于培養(yǎng)基的滅菌 用酒精擦拭雙手可以進行消毒 火焰灼燒可以迅速徹底地滅菌 適用于微生物的接種工具 如接種針 答案 c 題型一 題型二 題型三 題型四 反思領(lǐng)悟微生物培養(yǎng)過程中的無菌操作包括消毒和滅菌兩大類 各自具有不同的方法 應(yīng)對實驗操作的空間 操作者的衣著和手進行清潔和消毒 對用于培養(yǎng)微生物的器皿 接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌 題型一 題型二 題型三 題型四 培養(yǎng)基的制備 例題3 下列關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述 錯誤的是 a 操作順序為稱量 溶化 分裝 調(diào)ph 加塞和包扎 滅菌 擺斜面及倒平板b 將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或錐形瓶內(nèi)c 待培養(yǎng)基冷卻至50 60 后 制成斜面或平板后備用d 配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌解析 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作順序是稱量 溶化 調(diào)ph 分裝 加塞和包扎 滅菌 擺斜面及倒平板 答案 a 題型一 題型二 題型三 題型四 選擇培養(yǎng)基的特點與應(yīng)用 例題4 氯苯化合物是重要的有機化工原料 不易降解 會污染環(huán)境 某研究小組依照下列實驗方案 圖甲 篩選出能高效降解氯苯化合物的微生物sp1菌 培養(yǎng)基配方如下表 題型一 題型二 題型三 題型四 1 配制 號固體培養(yǎng)基時 除添加 號液體培養(yǎng)基成分外 還應(yīng)添加1 的 2 培養(yǎng)基配制時 滅菌與調(diào)ph的先后順序是 3 從用途上來說 號培養(yǎng)基和 號培養(yǎng)基分別屬于培養(yǎng)基和培養(yǎng)基 在 號培養(yǎng)基中 為sp1菌提供氮源的成分是 4 在營養(yǎng)缺乏或環(huán)境惡劣時 sp1的菌體會變成一個圓形的休眠體 這種休眠體被稱為 題型一 題型二 題型三 題型四 5 將sp1菌接種在含不同濃度氯苯的 號培養(yǎng)液中培養(yǎng) 得到生長曲線 圖乙 從圖乙可知 sp1菌在的培養(yǎng)條件下最早停止生長 其原因是 題型一 題型二 題型三 題型四 解析 1 固體培養(yǎng)基必須含有適量的瓊脂 2 配制培養(yǎng)基時應(yīng)先調(diào)ph 后滅菌 3 號培養(yǎng)基是為了獲得更多的菌株 屬于通用培養(yǎng)基 號培養(yǎng)基是為了選擇出sp1菌株 屬于選擇培養(yǎng)基 號培養(yǎng)基成分中含n物質(zhì)為硝酸銨 則應(yīng)由它為sp1菌株提供氮源 4 在惡劣環(huán)境下 一些菌體會形成芽孢休眠體 以抵抗不良環(huán)境的影響 5 sp1菌株以氯苯為碳源 當氯苯耗盡時 菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)生存 故氯苯含量越少 sp1菌株越早停止生長 答案 1 瓊脂 2 先調(diào)ph 后滅菌 3 通用選擇硝酸銨 4 芽孢 5 20mg l氯苯碳源最早耗盡 1 2 3 4 5 1 下列敘述錯誤的是 a 微生物學(xué)實驗一般都要求在無菌條件下進行b 細菌生長只需要氮源c 培養(yǎng)基的配制包括配制和滅菌兩大步驟d 不同培養(yǎng)基對微生物的選擇作用是分離和純化不同類型微生物的基礎(chǔ)答案 b 1 2 3 4 5 2 在微生物培養(yǎng)過程中 需要對培養(yǎng)基等進行滅菌 其標準是 a 殺死所有的病原微生物b 殺死所有的微生物c 殺死所有微生物的細胞 芽孢和孢子d 使病原菌不生長答案 c 1 2 3 4 5 3 下列有關(guān)培養(yǎng)基配制的敘述 正確的是 a 任何培養(yǎng)基都必須含有碳源 氮源 礦質(zhì)元素 水b 碳源和氮源必須具有一定比例 碳元素的含量最多 其次為氮元素c 微生物的生長除受營養(yǎng)因素影響外 還受到溫度 ph 氧 滲透壓等的影響d 營養(yǎng)物質(zhì)的濃度越高越好答案 c解析 自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不需要加碳源 自生固氮菌的培養(yǎng)基不需要加氮源 培養(yǎng)基中碳源和氮源必須具有一定比例 但含量最多的元素是氧 營養(yǎng)物質(zhì)的濃度并不是越多越好 濃度過高會導(dǎo)致培養(yǎng)物細胞失水 1 2 3 4 5 4 無菌技術(shù)常圍繞著如何避免雜菌的污染展開 下列常見的無菌技術(shù)中 屬于滅菌處理的是 a 操作者的雙手用酒精擦拭b 實驗室用紫外線照射c 對接種環(huán)進行灼燒處理d 水源用氯氣處理答案 c解析 滅菌是用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物 包括芽孢和孢子 常用的滅菌方法有灼燒滅菌 干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌法 1 2 3 4 5 5 微生物培養(yǎng)過程中 肉眼鑒別金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的重要依據(jù)是 a 細菌的大小 形狀
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