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文檔簡介
實驗二 紫外-可見分光光度法測定水中苯酚含量苯酚是工業(yè)廢水中一種有害污染物質(zhì),需對水中酚含量控制。苯酚在 270-295nm波長處有特征吸收峰,其吸光度與苯酚的含量成正比,應用LambertBeer定律可直接測定水中總酚的含量。一、實驗目的1學會使用Cary50型紫外-可見分光光度計2掌握紫外-可見分光光度計的定量分析方法 二、原理簡介紫外-可見吸收光譜是由分子外層電子能級躍遷產(chǎn)生,同時伴隨著分子的振動能級和轉(zhuǎn)動能級的躍遷,因此吸收光譜具有帶寬。紫外-可見吸收光譜的定量分析采用朗伯-比爾定律,被測物質(zhì)的紫外吸收的峰強與其濃度成正比,即:其中A是吸光度,I、分別為透過樣品后光的強度和測試光的強度,為摩爾吸光系數(shù),b為樣品厚度。由于苯酚在酸、堿溶液中吸收波長不一致(見下式),實驗選擇在堿性中測試,選擇測試的波長為288nm左右,取紫外-可見光譜儀波長掃描后的最大吸收波長。Cary50是瓦里安公司的單光束紫外-可見分光光度計。儀器原理是光源發(fā)出光譜,經(jīng)單色器分光,然后單色光通過樣品池,達到檢測器,把光信號轉(zhuǎn)變成電信號,再經(jīng)過信號放大、模/數(shù)轉(zhuǎn)換,數(shù)據(jù)傳輸給計算機,由計算機軟件處理。三、儀器與溶液準備1、Cary50型紫外-可見分光光度計2、1cm石英比色皿一套3、25 ml容量瓶5只,100 ml容量瓶1只,10ml移液管二支配置250 mg/L苯酚的標準溶液:準確稱取 0.0250 g苯酚于 250 mL燒杯中,加入去離子水20 mL使之溶解,加入0.1M NaOH 2mL,混合均勻,移入 100 mL容量瓶,用去離子水稀釋至刻度,搖勻。取5只25 mL容量瓶,分別加入 1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL苯酚標準溶液,用去離子水稀釋至刻度搖勻, 作為標準溶液系列。將溶劑,標準溶液,待測水樣依此裝入石英比色皿。按測試程序的提示,依次放入樣品室中進行測試。四、測試過程1、確認樣品室內(nèi)無樣品2、開電腦進入Window 系統(tǒng)3、點擊進入Cary50 主菜單4、雙擊 Cary-WinUV圖標5、在Win-UV 主顯示窗口下,雙擊所選圖標“SCAN”以掃描測定吸收曲線:取上述標準系列任一溶液裝進 1cm石英比色皿至4/5,以裝有蒸餾水的1cm石英比色皿作為空白參比,設定在 220350 nm波長范圍內(nèi)掃描,獲得波長-吸收曲線,讀取最大吸收的波長數(shù)據(jù)。6、在Win-UV 主顯示窗口下,雙擊圖標“Concentration”進入定量分析主菜單7、設定測試分析步驟:(l)單擊 Setup功能鍵,進入?yún)?shù)設置頁面。在Wavelength處填入由步驟5獲取的波長數(shù)據(jù)。(2)按Cary Control 、Standards、Options、Samples、Reports、Auto store順序,分別設置好菜單中每頁的參數(shù)。按OK回到“Concentration”界面主菜單。(3)單擊View萊單,選擇需要顯示的內(nèi)容。例如基本選項Toolbar,buttons,Graphics,Report。(4)單擊Zero,提示“Load blank press OK to read” (放空白按OK讀),放入空白蒸餾水到樣品室內(nèi),按OK測試,測完取出樣品。(5)單擊 Start, 出現(xiàn)標準樣品選擇頁。選Selected for Analysis(選擇分析的標準和樣品)。此框的內(nèi)容為準備分析的標準和樣品。(6)按OK進行分析測試。依Presentstdl的提示:放入標準1然后按OK鍵進行讀數(shù)。放標準2按OK進行讀數(shù)。直到全部標準讀完。(7)出現(xiàn)“Present Samplel Press OK to read”提示框,根據(jù)提示,放入樣品1按OK開始讀樣品,直到樣品測完。(8)可點擊Save Method AS保存此方法,以后可以從Open Method調(diào)用此方法。從標準曲線讀出水樣中苯酚的含量(gL),測試數(shù)據(jù)采用點擊Save Data AS 保存。五、實驗數(shù)據(jù)處理打印報告,讀取待測樣品的苯酚含量。六、問題與討論1、為什么紫外-可見光譜定量分析的準確度比紅外光譜高?2、為獲得準確數(shù)據(jù),在使用分光光度計時,哪些操作必
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