梅毒血清學檢測的操作規(guī)范

梅毒血清學檢測的操作規(guī)范,主要內(nèi)容,梅毒概述梅毒血清學檢測方法梅毒檢測技術(shù)規(guī)范,梅毒是一種幾乎可以侵犯全身所有器官，而產(chǎn)生多種癥狀和體征的慢性傳染性疾病。十六世紀初由歐洲傳入亞洲，后蔓延我國。梅毒又稱為楊梅瘡、廣東瘡、疳瘡、下疳、霉瘡等。,梅毒概述,梅毒螺旋體生物學特征,病原體為蒼白密螺旋體蒼白亞種,不易著色直徑 0.100.15m，有814個致密而規(guī)則的 小螺旋，兩端尖直，運動活躍，運動方式多樣抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感對青抗生素敏感,梅毒傳播途徑性傳播,性接觸是主要傳染途徑未經(jīng)治療的患者在感染后1年內(nèi)具有傳染性隨著病期的延長，傳染性越來越小感染后2年，通過性接觸一般無傳染性,梅毒傳播途徑母嬰傳播,妊娠7周時，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳播未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期2年），但妊娠時仍可傳染胎兒，病期越長，傳染性越小,梅毒傳播途徑其他途徑,輸血傳播接觸傳播 接觸部位附有梅毒螺旋體日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑,梅毒的分期,一期梅毒硬下疳和/或腹股溝淋巴結(jié)腫大二期梅毒病期在2年內(nèi)有多形性皮疹等三期梅毒病期在2年以上，可有皮膚黏膜損害等隱性（潛伏）梅毒胎傳（先天）梅毒,梅毒的診斷,病史癥狀實驗室檢查梅毒的實驗室檢查對診斷有重要意義,梅毒實驗室檢測技術(shù),病原學檢測血清學檢測,梅毒實驗室檢測的特點,臨床表現(xiàn) 取材部位 檢查方法一期梅毒 潰瘍 淋巴結(jié) 病原學檢查 血液 血清學檢查二期梅毒 皮損 淋巴結(jié) 病原學檢查 血液 血清學檢查 潛伏梅毒 血液 血清學檢查三期梅毒 血液 血清學檢查 神經(jīng)梅毒 血液 血清學檢查 腦脊液 細胞、蛋白量檢查VDRL等,梅毒的病原學檢測-顯微鏡檢測法,暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色檢查,暗視野顯微鏡檢查,標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液,鍍銀染色檢查,基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結(jié)果：棕褐色的梅毒螺旋體,非梅毒螺旋體抗原血清學檢測（非特異性梅毒抗體）梅毒螺旋體抗原血清學檢測（特異性梅毒抗體）,梅毒血清學檢測分類,非梅毒螺旋體抗原血清學檢測,原理人感染梅毒螺旋體后，組織受到破壞釋放一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機體在34周時產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）?？贵w的作用治療監(jiān)測和療效監(jiān)測無保護作用,VDRL(性病研究實驗室試驗)USR（不加熱血清反應(yīng)素試驗）RPR(加速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗)TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗),非梅毒螺旋體抗原血清學檢測方法,抗原基本成分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體集合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀肉眼可見的沉淀顆粒試驗方法敏感性和特異性基本相似操作簡單，價格便宜可定量檢測,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗,四種非特異性試驗方法比較,非梅毒螺旋體抗原血清試驗,RPR/TRUST基本原理：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入活性炭/甲苯胺紅，與待檢血清中的反應(yīng)素結(jié)合，形成肉眼可見的紅色絮狀物。,試驗所需儀器,測速要求：1002轉(zhuǎn)/分鐘,試驗操作定性檢測,(1)加樣：吸取50L血清/漿放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈中 (2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原（16.7ul） (3)反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果,結(jié)果判讀,RPR,TRUST,TRUST凝集反應(yīng)強度分級,+：抗原顆粒呈粗大團塊，凝結(jié)+：抗原顆粒中等團塊、凝結(jié)+：顆粒凝結(jié)，與清亮液體呈明顯反差+：抗原顆粒凝結(jié)、均勻肉眼可見：抗原顆粒細小凝結(jié)，肉眼可辨：圓圈內(nèi)僅見紅色集中于中央一點或均勻分散。,試驗操作定量檢測,（1）稀釋液準備：在圈內(nèi)加入50L生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。 （2）加樣：吸取50L血清與各圈中生理鹽水做系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。 （3）余同定性試驗中。,孔 號 1 2 3 4 5 6 7 8 稀釋倍數(shù) 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 陽性K 陰性K生理鹽水(ul) - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -樣 品(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0棄50.0 - -陽性血清(ul) - - - - - - 50.0 -陰性血清(ul) - - - - - - - 50.0抗原懸液(ul) 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7,定量檢測操作步驟,非梅毒螺旋體抗原檢測意義,早期梅毒硬下疳出現(xiàn)12周后，血清學可呈陽性梅毒患者經(jīng)治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征為什么要做定量檢測？滴度常與病情活動相關(guān)，滴度改變4倍具有臨床意義,技術(shù)性標本的污染溶血操作失誤生物學假陽性患者有其他疾病，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性生理機能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學假陽性,梅毒血清試驗假陽性因素：,急性生物學假陽性反應(yīng)的疾病,麻疹、風疹、水痘、牛痘疹傳染性單核細胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染、猩紅熱肺炎鏈球菌肺炎、病毒性肺炎其他，如亞急性心內(nèi)膜炎、斑疹傷寒等,急性生物學假陽性的特點,滴度低，一般低于1:8持續(xù)時間短，多在疾病消退后6日內(nèi)轉(zhuǎn)陰用梅毒螺旋體抗原血清試驗檢測陰性,慢性生物學假陽性反應(yīng)的疾病,系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡干燥綜合征、類風濕性關(guān)節(jié)炎自身免疫學溶血性貧血、橋本氏甲狀腺炎風濕性心臟病、慢性腎炎、肝硬化系統(tǒng)性硬化癥、毒品癮者孕婦、老年人,慢性生物學假陽性特點,可持續(xù)6個月以上，甚至終身滴度低，一般低于1:8用梅毒螺旋體抗原血清試驗檢測呈陰性,梅毒血清反應(yīng)假陰性,前帶現(xiàn)象：在非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，二期梅毒患者血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性或陰性反應(yīng)的結(jié)果。若將血清稀釋后再進行試驗即可出現(xiàn)陽性結(jié)果合并HIV感染的梅毒患者，梅毒血清試驗可呈陰性技術(shù)操作,血清固定（耐血清性）,指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)性梅毒有一定的關(guān)系,FTA-ABSTPPA/ TPHATP-ELISA發(fā)光法膠體金法,梅毒螺旋體抗原血清學檢測,TPPA基本原理,TPPA稱為梅毒螺旋體明膠凝集實驗用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結(jié)合產(chǎn)生肉眼可見的凝集。,TPPA操作步驟,試劑準備：恢復(fù)室溫加稀釋液：每份樣本做4孔，加標本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100L，第24孔各25L樣本稀釋：取血清25L加至第1孔，混勻后取25L至第2孔，混勻后取25L至第3孔，混勻后取25L至第4孔，混勻后棄去25L加對照液：第3孔加未致敏顆粒25L，第4孔加致敏 顆粒25L混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩30秒反應(yīng)：孵育2h觀察結(jié)果,TPPA結(jié)果判讀,觀察第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗,TPPA結(jié)果判斷,觀察凝集反應(yīng)強度：分級如下 4+3+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊 2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán) 1+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán) ：顆粒模糊覆蓋，邊緣有明顯的小環(huán) 一：顆粒緊密沉積孔底中央或形成一小點,梅毒螺旋體抗原檢測意義,優(yōu)點敏感性高，特異性強對非特異性試驗進行證實缺點通常終身持續(xù)陽性不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染不能作為療效觀察指標,梅毒血清學試驗結(jié)果解釋,先天梅毒的實驗室診斷,暗視