光激化學發(fā)光技術介紹

LightInitiatedChemiluminescenceAssay 光激化學發(fā)光 LiCA 光激化學發(fā)光 LiCA 介紹 以高分子微粒為基礎兩種微粒近距離離子氧能量傳遞主要特點 高靈敏度低本底穩(wěn)定均相免洗廣泛應用于生物分子間的相互作用 微粒的組成 感光微粒內含感光化合物發(fā)光微粒內含發(fā)光化合物和鑭系元素微粒直徑188nm 表面覆蓋水凝膠共價連接增大的表面積成百上千個生物分子 捕獲目標分子 LiCA發(fā)光原理 核心原理是能量的近距離轉移轉移的介質是高能態(tài)離子氧紅色激光680nm照射 感光微粒釋放離子氧 4微秒 傳播直徑200nm 發(fā)光微粒 520 618nm 高能級的光反應的基礎有賴于兩種微粒的相互接近反應體系中 微粒的濃度很低 碰撞機率很低 本底信號微弱 原理 1 原理 2 LiCA的技術特點 一 高靈敏度信號產生逐級放大的結果每個感光微粒釋放出近6萬個離子氧離子氧作用于二甲基噻吩 產生大量紫外光紫外光激發(fā)鑭系元素實際檢測能力為10 15摩爾理論檢測能力為10 18摩爾 LiCA的技術特點 二 低本底時間分辨模式采集光信號 延遲150ms 天然熒光的壽命小于100ns采用680nm紅光激發(fā) 生物樣品中的熒光物質不敏感發(fā)射光的波長比激發(fā)光的波長短 能量更高 有別于熒光 有效避免熒光物質干擾 穩(wěn)定均相環(huán)境使反應更充分免洗操作杜絕隨機誤差和交叉污染感光和發(fā)光的有機分子受到微粒的保護 環(huán)境穩(wěn)定和安全溶液中的氧濃度是一個常數不易受到pH值 離子強度和溫度的影響 LiCA的技術特點 三 臨床免疫的各項檢測生命科學的基礎研究新藥的篩選標記簡便檢測過程簡單 廣泛應用 基本包被模式 GG Streptavidin SA FG Antibody Ab 基本反應模式 biotin antigen primaryAb secondaryAb orproteinA G LA 應用類型 配體 受體激酶蛋白 蛋白免疫蛋白酶蛋白 DNA 配體 受體 1 TNFa sTNFR1 Biotin anti TNFR1IgG FG TNFa ProteinA sTNFR1 配體 受體 1 TNFa sTNFR1 GG SA Biotin anti TNFR1IgG FG TNFa ProteinA sTNFR1 配體 受體 1 TNFa sTNFR1 GG SA Biotin anti TNFR1IgG FG TNFa ProteinA sTNFR1 配體 受體 2 環(huán)磷酸腺苷cAMP Biotin FG cAMP anti cAMP 配體 受體 2 環(huán)磷酸腺苷cAMP GG SA Biotin FG cAMP anti cAMP 激酶 Akt Biotin anti Gsk3IgG FG Gsk3 ProteinA 激酶 Akt Biotin anti Gsk3IgG FG Gsk3 ProteinA 激酶 Akt GG SA Biotin anti Gsk3IgG FG Gsk3 ProteinA Akt 磷酸化 激酶 Akt GG SA Biotin anti Gsk3IgG FG Gsk3 ProteinA Akt 蛋白 蛋白 Biotin FG p53 Anti GST p53 HDM2 HDM2 GST 蛋白 蛋白 GG SA Biotin FG p53 Anti GST p53 HDM2 HDM2 GST 免疫 1 腫瘤壞死因子TNFa Biotin FG anti TNFa anti TNFa TNFa 免疫 1 腫瘤壞死因子TNFa GG SA Biotin FG anti TNFa anti TNFa TNFa 免疫 2 Biotin anti TNFa FG anti TNFa ProteinA TNFa 腫瘤壞死因子TNFa GG SA 免疫 2 GG SA Biotin anti TNFa FG anti TNFa ProteinA TNFa 腫瘤壞死因子TNFa 蛋白酶 1 GG SA Biotin FG substrate anti digoxigenin 組織蛋白酶CathepsinD digoxigenin CathepsinD 水解 蛋白酶 2 ACE Biotin FG angiotensinI anti angiotensinII ACE 切割 蛋白酶 2 ACE GG SA Biotin FG angiotensinII anti angiotensinII 蛋白 DNA ERa DNA Biotin FG ERa anti digoxigenin digoxigenin DNA 蛋白 DNA ERa ERE GG SA Biotin FG ERa anti digoxigenin digoxigenin DNA 當前成功應用實例 HBsAg GG SA Anti HBs FG HBsAg Anti HBs GG SA Biotin HBsAg Anti HBs HBeAg GG SA Biotin FG Anti HBe Anti HBe HBeAg Anti HBe GG SA Biotin FG Anti HBe Anti HBe 中和HBeAg Anti HBc GG SA An