洋蔥根尖染色體觀察.doc

洋蔥根尖染色體有絲分裂觀察與多倍體誘導(dǎo) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握洋蔥培養(yǎng)的方法，掌握利用秋水仙素誘導(dǎo)植物多倍體的方法。2、掌握洋蔥根尖制片的方法，復(fù)習(xí)染色、壓片的基本操作。3、通過對(duì)于有絲分裂相的觀察，統(tǒng)計(jì)洋蔥染色體數(shù)目，加深對(duì)于細(xì)胞有絲分裂過程的理解。4、對(duì)比進(jìn)行多倍體誘導(dǎo)前后的洋蔥根尖，理解四倍體與二倍體的區(qū)別。二、實(shí)驗(yàn)原理（一）有絲分裂 完整的有絲分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合稱間期，細(xì)胞完成DNA的復(fù)制以及有絲分裂的準(zhǔn)備，而M期又可以分為前期、中期、后期和末期，為了形態(tài)觀察的方便，本實(shí)驗(yàn)采用后一種分法。 觀察有絲分裂，重點(diǎn)在于觀察染色體的形態(tài)。在細(xì)胞分裂前期，細(xì)胞核解體，染色質(zhì)凝聚顯現(xiàn)出染色體的形態(tài)；在前中期，染色體散亂地分布于細(xì)胞的中部；在中期，紡錘體形成，染色體受到微管的牽引，著絲粒成行排列于赤道板上；在后期，染色體受到動(dòng)粒微管的牽引，向細(xì)胞兩級(jí)運(yùn)動(dòng)；在末期，染色體重新解螺旋，細(xì)胞核重新形成。（二）洋蔥的根尖 洋蔥根尖的整體結(jié)構(gòu)如右圖，其中只有分生區(qū)的初生分生組織由于細(xì)胞始終處于持久而強(qiáng)烈的有絲分裂之中而作為我們的觀察對(duì)象，其余部分在制片時(shí)都應(yīng)當(dāng)盡量剔除來保證觀察效果。（三）多倍體的誘導(dǎo) 多倍體的誘導(dǎo)使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，從而使有絲分裂中期紡錘體不能正常形成，但是姐妹染色單體照常想成，只是沒有被拉向兩級(jí)，于是染色體數(shù)目加倍。（四）各步驟的作用 1.固定液可以迅速殺死細(xì)胞，保持細(xì)胞形態(tài)在有絲分裂相。 2.解離可以破壞細(xì)胞的胞間層（果膠），使細(xì)胞之間的聯(lián)系變松散，有利于壓片和染色。 3.漂洗可以洗去過量的鹽酸，防止解離過度破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)或影響染色效果（鹽酸是酸性，而醋酸洋紅是堿性染料）。三、實(shí)驗(yàn)材料新鮮、健康的洋蔥鱗莖一個(gè)；0.02%秋水仙素、1M HCl、醋酸洋紅染液、卡諾氏固定液實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、試管、燒杯、小塑料管、濾紙、刀片、解剖針等四、實(shí)驗(yàn)步驟（一）材料的培養(yǎng)1.選擇新鮮、健康、根原基發(fā)育較為完整的洋蔥鱗莖，用刀片適當(dāng)削去根部的木栓組織，置于清水中培養(yǎng)（水的高度要求與洋蔥底部正好接觸），每天換一次水，保證水的清潔2.待根尖長(zhǎng)度達(dá)到1.5-2.0cm時(shí)，若要觀察二倍體，則直接于正午12:00左右剪下根尖投入固定液中，之后換0.02%秋水仙素，繼續(xù)培養(yǎng)約24h3.秋水仙素培養(yǎng)完成，根尖部位脹大后，與正午12:00左右剪下洋蔥根尖，投入固定液中固定2-72h（二）裝片的制作與觀察4.從固定液中取出洋蔥根尖，清水沖洗干凈，取一支試管，加入適量1M HCl，投入根尖，在60恒溫水浴下解離510min，此時(shí)根尖整體應(yīng)呈半透明狀，僅分生區(qū)部分為白色。5.解離完成后，轉(zhuǎn)移根尖至盛有清水的小燒杯中，漂洗23次。6.將根尖置于載玻片上，只留分生組織，去除其余部分，滴加醋酸洋紅染液染色10min，同時(shí)用刀片將根尖盡量切碎。7.蓋上蓋玻片（若切得足夠碎此時(shí)蓋玻片應(yīng)能輕松蓋上），用濾紙吸去多余的染液，在有濾紙覆蓋的情況下，用大拇指按壓進(jìn)行壓片，也可以用解剖針柄輕輕敲打相應(yīng)部位進(jìn)行輔助。8.將裝片置于顯微鏡下進(jìn)行觀察，比較二倍體與四倍體細(xì)胞的不同，尋找合適的有絲分裂相，統(tǒng)計(jì)染色體數(shù)目。五、實(shí)驗(yàn)記錄1.多倍體2.二倍體六、注意事項(xiàng)（1）培養(yǎng)洋蔥根尖時(shí)，水不可放多，待根尖長(zhǎng)出后，使根尖分生區(qū)接觸到水面即可；水至少一天一換，若有渾濁，立即更換。（2）剪下洋蔥根尖時(shí)注意時(shí)間，正午時(shí)分最合適，因?yàn)榇藭r(shí)洋蔥根尖分生區(qū)有絲分裂最為活躍，此時(shí)固定，可以觀察到最多的分裂相。（3）解離時(shí)間要控制好，時(shí)間太短，效果不夠；時(shí)間太長(zhǎng)，解離過度破壞細(xì)胞。（4）漂洗不能少，染色時(shí)間要足夠，否