風(fēng)濕病自身抗體熒光模式.ppt

風(fēng)濕病自身抗體熒光模式及臨床意義 風(fēng)濕性疾病相關(guān)自身抗體1 抗核抗體譜 ANA 抗組蛋白抗體 抗非組蛋白抗體 抗DNA抗體 抗DNA組蛋白復(fù)合物抗體 抗核仁抗體 抗其他細(xì)胞成分抗體2 抗磷脂抗體 ALP 抗心磷脂抗體 ACL 抗 2 糖蛋白1 2 GP1 抗體3 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體譜 ANCA anti PR3 anti MPO 4 早期診斷相關(guān)抗體 抗角質(zhì)蛋白抗體 AKA 抗Sa抗體 抗核周因子 APF 抗RA33抗體 抗CCP抗體 抗聚角蛋白微絲蛋白抗體 AFA 抗核抗體 ANA 的概念傳統(tǒng)定義 是以細(xì)胞核內(nèi)成份為靶抗原的器官非特異性自身抗體總稱 現(xiàn)代定義 是指抗細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱 對(duì)ANA的理解已不再局限于核成分 而是指抗核酸 nucleicacid 和核蛋白 nucleoprotein 抗體的總稱 靶抗原分布 細(xì)胞核 細(xì)胞漿 細(xì)胞骨架 細(xì)胞分裂周期 ANA篩選實(shí)驗(yàn)基本原理患者血清中存在的ANA 第一抗體 能與相應(yīng)細(xì)胞核 漿 抗原成分結(jié)合 再用熒光標(biāo)記的抗人球蛋白抗體 第二抗體 復(fù)染 經(jīng)過(guò)熒光顯微鏡觀察即能反映ANA的存在 而且通過(guò)對(duì)患者血清做一定稀釋后的檢測(cè)還可以對(duì)抗體含量作半定量 滴度 測(cè)定 ANA陽(yáng)性的定義 一般將超過(guò)95 正常人群ANA水平數(shù)值定義為ANA陽(yáng)性 對(duì)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室而言 通常認(rèn)為IFANA滴度 1 80為陽(yáng)性 原因 在低稀釋倍數(shù)時(shí)多種自身抗體可能相互掩蓋 1 1000 1 1000 ANA核均質(zhì)型和著絲點(diǎn)型 1 100 1 100 ANA核均質(zhì)型和核仁型 推薦一個(gè)標(biāo)本平行作兩個(gè)稀釋度1 100和1 1000 整個(gè)細(xì)胞核呈現(xiàn)一片模糊而均勻的熒光 有時(shí)核仁部位也可見(jiàn)到熒光 分裂期細(xì)胞的染色體區(qū)也出現(xiàn)熒光 以HEp 2細(xì)胞為基質(zhì)檢測(cè)ANA免疫熒光模式 抗組蛋白抗體 AHA 靶抗原 組蛋白亞單位H1 H2A H2B H3 H4及其復(fù)合物抗體 主要抗原H1和H2B 功能 組蛋白 DNA 核小體相關(guān)性 藥物 普魯卡因胺 肼屈嗪等 誘導(dǎo)性的紅斑狼瘡 100 唯一的標(biāo)志抗體 SLE 56 4 EUROIMMUN研究 40 80 其它風(fēng)濕性疾病 少見(jiàn) 抗非組蛋白抗體 抗ENA抗體 Sm SSA SSB抗染色體抗體 抗著絲點(diǎn) 核顆粒型核內(nèi)熒光呈斑點(diǎn)或顆粒狀 核膜存在 分裂期細(xì)胞的染色體區(qū)無(wú)熒光 此型多與可溶性核抗原 ENA 有關(guān) 抗Sm抗體靶抗原 與U1 U2 U4 U5 或U6 nRNA連接的6種不同蛋白分子 coreproteinsB B D E F G 功能 切割pre mRNA相關(guān)性 SLE 6 3 EUROIMMUN研究 5 30 核粗顆粒型 RNP Sm類型 抗核糖核蛋白抗體 抗U1 nRNP 靶抗原 與U1 nRNA連接的3個(gè)顆粒特異性蛋白 70K A和C 功能 切割pre mRNA相關(guān)性 MCTD 95 100 SLE 17 5 EUROIMMUN研究 15 40 抗SS A抗體 抗Ro抗體靶抗原 與Y1 Y3 Y4或Y5型RNA連接的2個(gè)蛋白 52kDa和60kDa 功能 調(diào)節(jié)mRNA的轉(zhuǎn)譯活性相關(guān)性 干燥綜合征 40 95 SLE 34 7 EUROIMMUN研究 20 60 抗SS B抗體 抗La抗體靶抗原 與小分子RNA U6 RNA pre tRNA 結(jié)合的磷脂蛋白 48kDa 功能 RNA多聚酶III的輔助蛋白相關(guān)性 干燥綜合征 40 95 SLE 13 3 EUROIMMUN研究 10 20 核細(xì)顆粒型 SS A SS B類型 抗著絲點(diǎn)抗體靶抗原 連接動(dòng)粒 著絲點(diǎn) 上的4個(gè)蛋白分子 A B C D 蛋白 分子量 17 80 140 50kDa 主要的靶抗原 著絲點(diǎn)B蛋白 與IIFT相關(guān)性 100 相關(guān)性 對(duì)系統(tǒng)性硬化診癥局限型 CREST綜合征 有確診意義 80 95 ANA 著絲點(diǎn)型 抗DNA抗體 ssDNA dsDNA 靶抗原 單鏈 非天然 變形 DNA 嘌呤和嘧啶堿基對(duì) 雙鏈 天然DNA 脫氧核糖核酸結(jié)構(gòu) 相關(guān)性 ssDNA類風(fēng)濕80 8 EUROIMMUN研究 SLE40 0 EUROIMMUN研究 干燥綜合征44 0 EUROIMMUN研究 皮肌炎12 3 EUROIMMUN研究 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎51 7 EUROIMMUN研究 獻(xiàn)血員6 8 EUROIMMUN研究 dsDNASLE30 90 抗ds DNA 綠蠅短膜蟲(chóng) 抗DNA組蛋白復(fù)合物抗體狼瘡細(xì)胞抗DNP抗體抗核小體抗體 抗核仁抗體抗RNA多聚酶 原纖維蛋白NOR 90和Th To等抗體 RNA多聚酶I II和III靶抗原 多個(gè)蛋白亞單位組成的核仁酶復(fù)合物功能 多聚酶I 轉(zhuǎn)錄rRNA基因多聚酶II 轉(zhuǎn)錄mRNA基因多聚酶III 轉(zhuǎn)錄tRNA基因相關(guān)性 硬皮病 4 核仁顆粒型 抗RNA多聚酶 抗體 核仁均質(zhì)型 Scl 70類型 抗Scl 70抗體靶抗原 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I降解產(chǎn)物 100kDa 功能 DNA復(fù)制和翻譯過(guò)程的輔助蛋白相關(guān)性 系統(tǒng)性硬化癥 79 7 EUROIMMUN研究 25 75 抗Scl 70抗體陽(yáng)性患者肺間質(zhì)纖維化的危險(xiǎn)性明顯增加 并且提示預(yù)后不良 抗PM Scl抗體靶抗原 多個(gè)蛋白分子的復(fù)合物主要的靶抗原100kDa 與DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I不同 功能 未知相關(guān)性 硬皮病 2 5 皮肌炎 8 重疊綜合征 24 核仁均質(zhì)型 PM Scl類型 抗原纖維蛋白 U3 nRNP 抗體 AFA 靶抗原 與基礎(chǔ)蛋白 34kDa 連接的U3 nRNA和其它5個(gè)蛋白功能 分離pre rRNA相關(guān)性 硬皮病 5 10 核仁顆粒型 抗原纖維蛋白抗體 抗增殖性細(xì)胞核抗原抗體靶抗原 PCNA功能 DNA聚合酶的輔助蛋白相關(guān)性 SLE的特異性抗體3 抗周期蛋白I抗體 抗周期蛋白II抗體 抗核點(diǎn)型抗體主要有兩種熒光模型少核點(diǎn)型 p80卷曲蛋白抗體 1 5個(gè)點(diǎn) SLE 干燥綜合癥 原發(fā)性膽汁性肝硬化多核點(diǎn)型 Sp100 5 20個(gè)點(diǎn) 常與線粒體抗體同時(shí)出現(xiàn) 原發(fā)性膽汁性肝硬化 進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥 SLE 重疊綜合癥 ANA 核點(diǎn)型 抗Ku抗體靶抗原 66KD 88KD核蛋白相關(guān)性 PM DM SLE 核細(xì)顆粒 網(wǎng)狀型 抗Ku抗體類型 HEp 2細(xì)胞 靈長(zhǎng)類肝臟 抗核膜型 抗中性粒細(xì)胞抗體 ANCA 一組與中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞胞漿中的一些特異性抗原發(fā)生反應(yīng)的自身抗體靶抗原譜 絲氨酸蛋白酶3 PR3 髓過(guò)氧化物酶 MPO 殺菌 通透性增高蛋白 BPI 人白細(xì)胞彈性蛋白酶 HLE 乳鐵蛋白 LF 組織蛋白酶G CG 溶菌酶 LYS 天青殺素 AZU ANCA熒光染色模型 固定劑作用人為形成胞漿型 C ANCA cytoplasmicpattern 主要靶抗原成份是PR 3 在活動(dòng)性韋氏肉芽腫 WG 中陽(yáng)性率幾乎100 特異性在90 以上 也可見(jiàn)于顯微鏡下多血管炎等原發(fā)性血管炎 且與疾病活動(dòng)度具有明顯相關(guān)性 核周型 P ANCA perinuclearpattern 主要靶抗原成份是MPO 要與壞死性血管炎 特發(fā)性壞死性新月體性腎小球腎炎 NCGN Churg Strauss綜合征及炎癥性腸病等有關(guān) 在SLE患者可有10 15 陽(yáng)性 RA患者存在關(guān)節(jié)外損害及血管損害時(shí)也可呈陽(yáng)性 非典型型 X ANCA atypicalpattern A ANCA為上述兩型的混合型 P ANCAC ANCA 目前ANCA臨床常規(guī)檢測(cè)存在的問(wèn)題僅用IIF法檢測(cè)ANCA 而不檢測(cè)ANCA特異性抗體降低了ANCA對(duì)疾病診斷的特異性僅檢測(cè)抗PR3和抗MPO兩種特異性抗體 而不做IIF ANCA 降低了ANCA對(duì)疾病診斷的應(yīng)用范用IIF法檢測(cè)ANCA時(shí) 未能嚴(yán)格排除ANA的干擾 出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果IIF和 或ELISA的檢測(cè)僅為定性結(jié)果 而無(wú)定量結(jié)果 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的自身抗體 名稱 敏感性 特異性 類風(fēng)濕因子RA33 36抗體Sa抗體抗角蛋白抗體抗核周因子抗CCP抗體抗CB10抗體抗BiP抗體 50 7025 45373338 6260 707270 8693 678 9787 9270 909670 8892 不同抗體在RA診斷中的意義 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的自身抗體 抗體敏感性 特異性 抗核抗體 ANA dsDNA抗體抗Sm抗體膜DNA抗體核小體抗體U1RNP抗體SS A抗體SS B抗體抗心磷脂抗體類風(fēng)濕因子PCNA抗體組蛋白抗體核蛋白抗體 809599949287 9470407530955050 99702578855025 351520 4025530 8058 干燥綜合征的自身抗體 自身抗體陽(yáng)性率 ANA抗SSA抗體抗SSB抗體抗a 胞襯蛋白抗體抗M3受體抗體類風(fēng)濕因子ANCA抗M2抗體ACA抗RNP抗體 60 8050 7030 6065 87926