Agilent+HPLC+1100+ChemStation+高級操作培訓(xùn)（安捷倫科技公司）.ppt

2005 3 212020 3 13 Slide1 HPLC1100ChemStation高級操作培訓(xùn) 授課教師紀(jì)學(xué)海 2020年3月13日 2005 3 212020 3 13 Slide2 HPLC1100Advance操作培訓(xùn)日程安排 第一天上午 1課程簡介及相互介紹2化學(xué)工作站各個(gè)工作界面介紹3完整方法的編輯 修改 存儲及運(yùn)行4HPLC1100儀器配置及參數(shù)設(shè)置下午 1數(shù)據(jù)分析參數(shù)設(shè)置2色譜圖的優(yōu)化處理3積分事件及手動積分的選擇和應(yīng)用4高級校正表的編輯和設(shè)置第二天上午 1報(bào)告格式的選擇及設(shè)定2光譜的提取 光譜庫的建立及檢索3色譜峰純度檢測4色譜條件的優(yōu)化及色譜圖的提取下午 1序列參數(shù)的設(shè)置以及統(tǒng)計(jì)功能的使用2批處理功能的設(shè)置及應(yīng)用 2005 3 212020 3 13 Slide3 第三天上午 1個(gè)性化報(bào)告的設(shè)定與編輯2工作站故障診斷功能的應(yīng)用3結(jié)業(yè)考試結(jié)業(yè)午餐下午 1化學(xué)工作站的重新安裝 配置及啟動 選修 2發(fā)結(jié)業(yè)證3自由練習(xí) 討論 2005 3 212020 3 13 Slide4 第一章化學(xué)工作站各個(gè)工作界面介紹 AddLicense 添加或查看工作站軟件的License號碼 Agilent1100SeriesCDROM 查看隨機(jī)的維護(hù)光盤 ConfigurationEditor 配置儀器 InstallationQualification 進(jìn)行軟件的安裝認(rèn)證 Instrument1Online 進(jìn)入在線工作站 可以控制儀器 Instrument1Offline 進(jìn)入離線工作站 不可控制儀器 Readme txt 提供關(guān)于化學(xué)工作站的參考信息 Scheduler 化學(xué)工作站的任務(wù) 日程安排表 2005 3 212020 3 13 Slide5 化學(xué)工作站各個(gè)工作界面的切換 切換工作界面 Agilent化學(xué)工作站有5個(gè)功能界面 可以從View菜單中切換工作界面 也可以從快捷圖標(biāo)欄中切換 MethodandRunControl 進(jìn)行儀器控制 方法編輯 運(yùn)行以及序列的編輯 運(yùn)行 DataAnalysis 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析 包括譜圖優(yōu)化 積分優(yōu)化 校正表建立 報(bào)告格式選擇等 ReportLayout 進(jìn)行用戶個(gè)性化報(bào)告的編輯 設(shè)定 Verification OQ PV 進(jìn)行儀器性能認(rèn)證 Diagnosis 進(jìn)行儀器硬件性能的診斷 測試 2005 3 212020 3 13 Slide6 化學(xué)工作站Views菜單 2005 3 212020 3 13 Slide7 化學(xué)工作站的ChangeAccessLevel功能 2005 3 212020 3 13 Slide8 化學(xué)工作站Scheduler的使用 2005 3 212020 3 13 Slide9 化學(xué)工作站Scheduler的使用 2005 3 212020 3 13 Slide10 選擇在線信號 從View菜單 選擇OnlineSignals 單擊Change 在EditSignalPlot窗口中選擇要監(jiān)控的信號 2005 3 212020 3 13 Slide11 在線信號顯示 2005 3 212020 3 13 Slide12 查看Logbook 從View菜單選擇Logbook 單擊CurrentLogbook顯示當(dāng)前Logbook內(nèi)容 2005 3 212020 3 13 Slide13 方法的概念 方法是一個(gè)參數(shù)集 它包括分析一個(gè)樣品所需要的所有參數(shù) 方法文件名 xxx m 方法的組成 方法信息 Methodinformation 儀器參數(shù)及采集參數(shù) Instrument Acquisition 數(shù)據(jù)分析參數(shù) DataAnalysis 運(yùn)行時(shí)間表 RunTimeChecklist 第二章方法編輯 保存 2005 3 212020 3 13 Slide14 使用EditEntireMethod編輯一個(gè)完整的方法 編輯一個(gè)完整的方法 單擊圖標(biāo) 也可以開始編輯一個(gè)完整的方法 2005 3 212020 3 13 Slide15 選擇所要編輯的內(nèi)容 首先選擇所要編輯的方法內(nèi)容 注意 不選擇并不意味著方法中不含有該部分內(nèi)容 而是意味著對該部分內(nèi)容不進(jìn)行編輯 使用原方法中設(shè)置的參數(shù) 2005 3 212020 3 13 Slide16 方法信息 MethodInformation 方法信息僅僅是一些描述性的文字信息 可以按照自己的需求來輸入 2005 3 212020 3 13 Slide17 包括 流量 Flow 流動相組成 Solvents 停止采集時(shí)間 StopTime 后運(yùn)行時(shí)間 PostTime 梯度編程 Timetable 壓力限制設(shè)定 PressureLimits 等 泵的操作參數(shù) 2005 3 212020 3 13 Slide18 標(biāo)準(zhǔn)自動進(jìn)樣器參數(shù) 2005 3 212020 3 13 Slide19 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣過程原理示意圖 準(zhǔn)備位置 抓取樣品瓶吸取樣品 進(jìn)樣和運(yùn)行位置 2005 3 212020 3 13 Slide20 標(biāo)準(zhǔn)自動進(jìn)樣器的程序進(jìn)樣 2005 3 212020 3 13 Slide21 Wellplate自動進(jìn)樣器參數(shù) 2005 3 212020 3 13 Slide22 控溫范圍 低于室溫10 80 兩個(gè)單獨(dú)的加熱區(qū)安裝切換閥可以進(jìn)行柱切換可以容納30cm長色譜柱安裝柱識別可以自動記錄進(jìn)樣次數(shù) 柱溫箱參數(shù)設(shè)置 2005 3 212020 3 13 Slide23 可以選擇存儲5個(gè)信號信號波長范圍191 949nm可變狹縫 1 2 4 8 16nm可以時(shí)間編程可以保存數(shù)張或所有光譜 DAD檢測器參數(shù)設(shè)置 2005 3 212020 3 13 Slide24 DAD參數(shù)優(yōu)化StepandSlit Agilent1100DAD狹縫寬度可以程序變化 變化步徑1 2 4 8 16nm 如果樣品濃度較高 而需要精細(xì)的光譜結(jié)構(gòu) 建議使用1或2nm的狹縫寬度 如果樣品濃度較稀 建議使用8或16nm寬度狹縫 采集樣品的譜帶寬度至少要與狹縫寬度一樣 PeakWidth 增加響應(yīng)時(shí)間 峰寬 可以增加組成色譜信號中每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)的采集次數(shù) 因?yàn)闄z測器的噪音與采集次數(shù)平方根成反比 所以增加響應(yīng)時(shí)間可以降低噪音 但增加響應(yīng)時(shí)間 峰寬 會降低定量分析的重復(fù)性 一般對于精確的定量分析 一個(gè)色譜峰要求采集20個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn) 設(shè)置峰寬的經(jīng)驗(yàn) 設(shè)置峰寬等于實(shí)際色譜峰的最窄峰寬 2005 3 212020 3 13 Slide25 SampleSignalandReferenceSignal 設(shè)置樣品吸收波長與參比波長遵從下列規(guī)則 樣品吸收波長選擇在樣品的最大吸收波長 而且在此吸收波長下沒有流動相吸收的干擾 選擇樣品信號的譜帶寬度應(yīng)覆蓋樣品吸收譜帶的半峰寬 假設(shè)樣品吸收譜帶為高斯峰 參比吸收譜帶應(yīng)選擇在盡量靠近樣品吸收譜帶 而且在此區(qū)域沒有或盡量低的吸收強(qiáng)度 參比峰譜帶寬度要大于或等于樣品譜帶寬度 注意 增加樣品譜帶寬度 會降低樣品的吸收強(qiáng)度 但會降低噪音 選擇合適的參比吸收波長可以減小梯度洗脫過程中的基線漂移 PeakSupression 峰抑制 DAD檢測器一個(gè)非常有趣的功能是進(jìn)行峰抑制 例如有兩個(gè)樣品沒有分開 共同洗脫出來 可以設(shè)置某一個(gè)樣品的等吸收波長為參比波長 則被設(shè)為參比峰的樣品被抑制 而另一個(gè)樣品峰被分離 不過 此樣品峰的吸收強(qiáng)度要損失10 30 2005 3 212020 3 13 Slide26 VWD檢測器參數(shù)設(shè)置 2005 3 212020 3 13 Slide27 選擇在方法中要執(zhí)行的項(xiàng)目可以選擇保存GLP數(shù)據(jù)可以將方法和數(shù)據(jù)保存在一起 運(yùn)行時(shí)間表 RunTimeChecklist 2005 3 212020 3 13 Slide28 從Method菜單選擇SaveMethod SaveMethodas或從存貯方法工具圖標(biāo)存貯方法 存儲方法 單擊本圖標(biāo)可以保存方法 務(wù)必注意不要發(fā)生方法覆蓋 丟失 2005 3 212020 3 13 Slide29 要分析單個(gè)樣品 先從RunControl菜單選擇SampleInfo 輸入樣品信息 樣品信息包括 操作者姓名 OperatorName 存盤數(shù)據(jù)文件 DataFile 樣品參數(shù) SampleParameters 樣品評述 comment 然后運(yùn)行方法 RunMethod 運(yùn)行方法 2005 3 212020 3 13 Slide30 用戶圖形友好界面 GUI 2005 3 212020 3 13 Slide31 用戶圖形友好界面 各個(gè)模塊的控制 2005 3 212020 3 13 Slide32 用戶圖形界面 溶劑瓶的填充量 2005 3 212020 3 13 Slide33 用戶圖形友好界面 各種參數(shù)的顯示 2005 3 212020 3 13 Slide34 Instrument菜單簡介 2005 3 212020 3 13 Slide35 選擇Instrument MorePump Auxiliary 菜單 即可彈出下圖窗口 泵的輔助功能 在該窗口可以設(shè)置泵的最大升流速率 泵沖程大小以及設(shè)置溶劑的壓縮補(bǔ)償因子 2005 3 212020 3 13 Slide36 自動進(jìn)樣器的擴(kuò)展功能 2005 3 212020 3 13 Slide37 色譜柱信息的輸入 2005 3 212020 3 13 Slide38 VWD停泵掃描采集光譜 使用VWD停泵掃描的功能 可以采集樣品的吸收光譜 主要操作步驟如下 1 在Online工作站界面的View菜單下打開VWDScans窗口 2 按照正常的進(jìn)樣方式采集樣品色譜數(shù)據(jù) 并保證能夠在OnlineSignal窗口中觀測到色譜信號 3 進(jìn)樣后 色譜圖上出現(xiàn)基線時(shí) 掃描空白吸收光譜在Instrument菜單下 選擇MoreVWD中的BlankScan4 色譜圖上出現(xiàn)色譜峰時(shí) 掃描樣品吸收光譜在Instrument菜單下 選擇MoreVWD中的SampleScan此時(shí)得到的是自動扣除空白吸收后的樣品吸收光譜 2005 3 212020 3 13 Slide39 可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能 進(jìn)樣之前選擇VWDScans菜單 打開VWD光譜掃描窗口 2005 3 212020 3 13 Slide40 可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能 2005 3 212020 3 13 Slide41 可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能 掃描所得的流動相吸收光譜 2005 3 212020 3 13 Slide42 可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能 出現(xiàn)色譜峰時(shí) 點(diǎn)擊SampleScan 掃描樣品峰的吸收光譜 2005 3 212020 3 13 Slide43 可變波長檢測器VWD的停泵掃描功能 光譜窗口中給出扣除流動相吸收光譜后的樣品峰吸收光譜 2005 3 212020 3 13 Slide44 第三章譜圖優(yōu)化 本章內(nèi)容 譜圖調(diào)用空白譜圖的扣除譜圖優(yōu)化譜圖加標(biāo)注譜圖比較 處理 2005 3 212020 3 13 Slide45 調(diào)用數(shù)據(jù)文件 在DataAnalysis界面 File菜單下選擇LoadSignal 扣除空白譜圖 2005 3 212020 3 13 Slide46 扣除空白譜圖 選擇需要扣除的空白運(yùn)行色譜文件 2005 3 212020 3 13 Slide47 選擇 規(guī)定一個(gè)方法中要進(jìn)行調(diào)用 處理的信號 SignalDetails 2005 3 212020 3 13 Slide48 使用SignalOptions 功能來優(yōu)化色譜圖的顯示 譜圖優(yōu)化 在DataAnalysis界面下 Graphics菜單下選擇SignalOptions 2005 3 212020 3 13 Slide49 譜圖優(yōu)化工具 譜圖優(yōu)化圖標(biāo) 譜圖顯示方式 化合物名稱 保留時(shí)間顯示 標(biāo)題顯示 軸 單獨(dú) 重疊顯示 基線 打印窗口 色譜圖控制圖標(biāo) 移動標(biāo)注 文字標(biāo)注 設(shè)置標(biāo)注格式 線形標(biāo)注 刪除標(biāo)注 WMF圖標(biāo)注 拷貝 2005 3 212020 3 13 Slide50 選擇 字體和字型字體大小字體顏色 旋轉(zhuǎn)角度等 在色譜圖上加標(biāo)注 2005 3 212020 3 13 Slide51 AddAnnotationDrawLineinWindowMoveAnnotationDeleteAnnotation 譜圖處理工具 譜圖處理工具 2005 3 212020 3 13 Slide52 如何執(zhí)行積分自動積分如何建立積分事件表如何使用積分事件表手動積分 本章內(nèi)容 第四章積分優(yōu)化 2005 3 212020 3 13 Slide53 增強(qiáng)積分方式可以提供 當(dāng)基線波動時(shí) 基線的定位 使用初始峰高參數(shù)去除噪音峰 控制積分開始和結(jié)束的標(biāo)識 在噪音中定位信號峰 使用二階導(dǎo)數(shù)確定肩峰 增強(qiáng)積分方式 2005 3 212020 3 13 Slide54 當(dāng)調(diào)用信號時(shí) 可以通過Integrateafterload選項(xiàng)自動積分 您也可以通過以下方式進(jìn)行積分 從Integration菜單選擇積分或自動積分選擇積分工具 運(yùn)行一個(gè)包括數(shù)據(jù)分析的完整方法 如何執(zhí)行積分 2005 3 212020 3 13 Slide55 自動積分 檢查開始和結(jié)束區(qū)域 確定噪音 賦予初始SlopeSensitivity和HeightReject值 對第一次積分賦予一個(gè)臨時(shí)峰寬值 設(shè)置AreaReject為0 執(zhí)行測試性積分 有可能重復(fù)幾次 基于較早洗脫出的色譜峰寬計(jì)算峰寬值 優(yōu)化SlopeSensitivity和HeightReject 從初始的峰寬和噪音水平計(jì)算AreaReject 2005 3 212020 3 13 Slide56 積分事件 初始值 信號選項(xiàng)框 高級基線選擇 2005 3 212020 3 13 Slide57 高級基線 2005 3 212020 3 13 Slide58 添加積分事件功能 刪除積分事件功能 積分事件表 2005 3 212020 3 13 Slide59 積分任務(wù) 對當(dāng)前色譜圖積分 自動積分 積分事件 設(shè)置BaselineNow 設(shè)置BaselineHold 設(shè)置拖尾切線撇去 積分器開關(guān) 設(shè)置斜率 設(shè)置最小峰面積 設(shè)置固定峰寬 設(shè)置肩峰檢測 積分工具欄 2005 3 212020 3 13 Slide60 Peakwidth 半峰寬 如果沒有設(shè)置半峰寬的時(shí)間積分表 半峰寬在整個(gè)積分過程中自動變化 變化遵從0 75 exitingpeak 0 25 currentpeak TimedEvents 時(shí)間性積分事件 AreaSumONorOFF 設(shè)定某一時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行峰面積加和 加和后保留時(shí)間被分配到第一個(gè)峰的保留時(shí)間上 BaselineAllValleysOnorOFF 設(shè)定是否進(jìn)行峰谷積分 2005 3 212020 3 13 Slide61 BaselineHoldONorOFF 在BaselineHoldON與BaselineHoldOFF兩點(diǎn)間做水平基線 BaselineNow 在某一時(shí)刻點(diǎn)重新設(shè)置基線 BaselineBack 設(shè)置某一時(shí)刻點(diǎn) 從檢測到的基線向此點(diǎn)做水平基線 2005 3 212020 3 13 Slide62 存貯積分事件到方法 作為方法的一部分存貯積分參數(shù) 保存方法 2005 3 212020 3 13 Slide63 選擇積分工具 對目前色譜圖進(jìn)行積分 自動積分 積分事件 手動積分畫基線 手動積分負(fù)峰 手動積分切線撇去 手動積分裂分峰 手動積分去除峰 手動積分工具 2005 3 212020 3 13 Slide64 DrawBaselineNegativePeak s TangentSkimSplitpeaksDeletePeak s AllValleys 手動積分 2005 3 212020 3 13 Slide65 峰類型符號峰起止點(diǎn)符號B基線P基線滲透V峰谷點(diǎn)H水平基線M手動積分T切線撇去其它符號 參考峰I內(nèi)標(biāo)峰A 面積加和峰N負(fù)峰S溶劑峰警示符號 高于含量上限 低于含量下限 2005 3 212020 3 13 Slide66 基線符號 BBBB B 基線 BVB V 峰谷點(diǎn) BPB P 基線滲透 BHH H 水平基線 2005 3 212020 3 13 Slide67 如何建立校正表如何選擇校正表的設(shè)置如何進(jìn)行再校正如何使用峰識別工具 本章內(nèi)容 第五章高級校正表的建立 2005 3 212020 3 13 Slide68 配置系列標(biāo)樣 然后逐一進(jìn)樣分析 系列標(biāo)樣濃度范圍要包含未知樣品濃度 調(diào)用低濃度標(biāo)樣數(shù)據(jù) 優(yōu)化譜圖顯示 優(yōu)化積分參數(shù) 獲得滿意的積分結(jié)果 然后存貯積分事件到方法 用最低濃度標(biāo)樣數(shù)據(jù)建立一級校正表 逐個(gè)對每個(gè)標(biāo)樣進(jìn)行優(yōu)化譜圖 優(yōu)化積分后 分別加入校正表 檢查校正曲線 把校正曲線存入方法 建立校準(zhǔn)表的過程 2005 3 212020 3 13 Slide69 校正參數(shù)的建立 Signaldetails 2005 3 212020 3 13 Slide70 AvailableSignals此框包括了所有要被處理的信號 可從此框選擇被處理的信號 通過AddtoMethod按鍵拷貝到方法中 拷貝之后可以編輯初始時(shí)間 Start 和中止時(shí)間 End 只有在此時(shí)間范圍內(nèi)的信號才被處理 如果初始時(shí)間和中止時(shí)間及延遲時(shí)間 DelayTime 均設(shè)置為0 被選定信號的所有數(shù)據(jù)均被處理 Delay可以通過設(shè)置時(shí)間延遲 Delay 來補(bǔ)償檢測器信號的延遲 例如 串聯(lián)使用兩個(gè)檢測器 對于同一信號會有時(shí)間延遲 通過設(shè)置Delay來補(bǔ)償時(shí)間延遲 這樣可以進(jìn)行峰識別 通過時(shí)間延遲 還可以修改某個(gè)色譜數(shù)據(jù)的保留時(shí)間 保留時(shí)間設(shè)置區(qū)域沒有限制 而且數(shù)值可正可負(fù) Align此功能用于LC MSD 2005 3 212020 3 13 Slide71 CalibrationSettings 2005 3 212020 3 13 Slide72 校正參數(shù)的設(shè)置 Title輸入校正表的標(biāo)題 UseSampleData此對話框有兩種選擇 FromSampleDefaultsBelow 選擇此項(xiàng)后 可以設(shè)置下面SampleDefaults各參數(shù) 所有在SampleInfo 中所設(shè)置的參數(shù)均被新參數(shù)替代 FromDataFile 所有涉及到的參數(shù)在數(shù)據(jù)處理過程中均以SampleInfo 表中參數(shù)為準(zhǔn) Amount此處濃度只在計(jì)算ESTD 和ISTD 時(shí)有效 Amount輸入樣品總濃度 2005 3 212020 3 13 Slide73 SampleISTD未知樣品中內(nèi)標(biāo)濃度 可以輸入幾個(gè)內(nèi)標(biāo) I 用于識別內(nèi)標(biāo)物 此處I 與校正表中I 一致 CalculateUncalibratedPeaks此選項(xiàng)用于定義未校正峰的響應(yīng)因子 校正因子可以使用某一校正化合物的校正因子 UsingCompound 也可以輸入某一響應(yīng)因子數(shù)值 WithRspFactor Weight作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí) 定義不同校正點(diǎn)的權(quán)重 重要性 2005 3 212020 3 13 Slide74 調(diào)用標(biāo)樣進(jìn)行積分參數(shù)優(yōu)化 2005 3 212020 3 13 Slide75 建立一級校正表 2005 3 212020 3 13 Slide76 CalibrationTable可以通過兩種方法建立新校正曲線表 ManualSetup 手工輸入保留時(shí)間和響應(yīng)因子 AutomaticSetupLevel 工作站自動將保留時(shí)間及其它色譜參數(shù)輸入校正表 用戶只需輸入標(biāo)樣濃度 工作站自動計(jì)算響應(yīng)因子 CalibrationMode此項(xiàng)選擇只在歸一化法 Norm 中有效 選擇CalculateSignalsSeparately后 在計(jì)算時(shí) 每個(gè)信號被獨(dú)立報(bào)告 否則所有的信號均被歸一化 2005 3 212020 3 13 Slide77 填入 化合物名稱濃度選擇 參比峰內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)標(biāo)號 校正表的建立 2005 3 212020 3 13 Slide78 校正表的選擇 Compound Amt Area RspFactor Ref ISTD Compound Grp Amt LowLimit HightLimit Compound Amt Area Def CurveType Origin Compound Area Rsp Def PKUsage 編輯校準(zhǔn)表的內(nèi)容 峰加和 2005 3 212020 3 13 Slide79 每種校正表方式都有各自的缺省方式 用戶可根據(jù)自己的需要使用EditOptions 對每種方式進(jìn)行編輯 在左側(cè)Columnsnotshown框中選擇所需內(nèi)容后按 鍵 所需內(nèi)容加到右側(cè)Columnsshown框中 2005 3 212020 3 13 Slide80 CompoundDetails 2005 3 212020 3 13 Slide81 PeakDetails PeakDetails表包含了校正曲線的信息 如果Def欄被選擇 校正曲線參數(shù)由CalibrationSettings中的參數(shù)決定 如果校正曲線參數(shù)在CalibrationSettings中發(fā)生改變 則CalibrationTable會自動更新 校正曲線參數(shù)包含 校正曲線類型 原點(diǎn)的選定以及各校正點(diǎn)的權(quán)重 2005 3 212020 3 13 Slide82 IdentificationDetails IdentificationDetails中定義了每個(gè)峰的作用 并允許用戶定義特征峰 每個(gè)峰的最大吸收總被定義為主峰 Rsp 顯示響應(yīng)比率 特征峰 主峰 DefQualifierTolerance Def 選擇此欄使用缺省的響應(yīng)比率偏差 特征峰的響應(yīng)占主峰響應(yīng)的百分?jǐn)?shù) 此欄設(shè)置用戶期待的響應(yīng)比率偏差 例如此欄設(shè)置20 則偏差窗口為 10 10 2005 3 212020 3 13 Slide83 PeakUsage顯示峰的選擇 Main Qualifier或Ignore 儀器設(shè)定的缺省值為 化合物最大峰為Main 主峰 其它峰為Ignore Main 主峰 此峰用作定量計(jì)算 主峰和特征峰一起用作定性 只能選擇一個(gè)主峰 Qualifier 特征峰 特征峰用于確定主峰屬于哪一期望化合物 一般情況下 一個(gè)化合物在不同的波長范圍有一恒定的響應(yīng)比率 因此對于一個(gè)化合物 其特征峰的響應(yīng)與主峰的響應(yīng)為一恒定比率 可以通過 欄設(shè)置允許的響應(yīng)比率偏差 如果某一化合物的響應(yīng)比率超出此設(shè)定值 則此化合物峰不被定量 Ignore 如果峰選擇此項(xiàng) 則此峰既不用于定量 也不用于定性 此峰在校正表中留作將來使用 可以用Delete鍵刪除此峰 2005 3 212020 3 13 Slide84 CalibrationTableoption CalibrationTableOption讓用戶選擇校正表中顯示哪些內(nèi)容 CalibrationTableOption包括兩部分內(nèi)容 Columnsnotshown顯示了哪些內(nèi)容可以加到校正表中 Columnsshown顯示校正表中的內(nèi)容 要選擇哪些內(nèi)容加到校正表中 只需選擇Columnsnotshown中的內(nèi)容 單擊 鍵把所需內(nèi)容加Columnsshown中 2005 3 212020 3 13 Slide85 峰加和功能主要用于石化或制藥行業(yè)某些特殊應(yīng)用 該功能可以對某個(gè)時(shí)間段內(nèi)連續(xù)或不連續(xù)的色譜峰進(jìn)行總含量定量計(jì)算 如下圖所示 需要測量除四個(gè)主要目標(biāo)化合物峰aaa bbb ccc ddd以外的所有4 13min時(shí)間段內(nèi)的雜質(zhì)峰總含量時(shí) 即可使用PeakSumming功能 PeakSumming 2005 3 212020 3 13 Slide86 調(diào)用標(biāo)樣數(shù)據(jù) 并對所有峰 包括雜質(zhì)峰 進(jìn)行積分參數(shù)優(yōu)化 得到各個(gè)峰的準(zhǔn)確峰面積 在Calibration菜單下 建立標(biāo)準(zhǔn)的校正表 即在校正表中輸入aaa bbb ccc ddd四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化合物的含量 選擇CalibrationTableOption 選項(xiàng)中PeakSumming 此命令執(zhí)行后 校準(zhǔn)表變成峰加和型校正表 如下所示 輸入4 13min時(shí)間段的片斷名稱 如impurity 并指定所需的RF因子 如果UseReference項(xiàng)中選擇None 則可以在ResponseFactor欄中手工輸入所需的RF數(shù)值 2005 3 212020 3 13 Slide87 峰加和表編輯好 選擇Report菜單下SpecifyReport選項(xiàng) 在SpecifyReport窗口 選中AddSummedPeaksTable選擇 并規(guī)定使用外標(biāo)法定量 調(diào)用未知樣品 選擇Report菜單下PrintReport 發(fā)現(xiàn)得到的報(bào)告中除正常的外標(biāo)報(bào)告以外還有如下內(nèi)容 SummedPeaksReport Signal1 DAD1B Sig 305 190Ref 550 100NameStartTimeEndTimeTotalAreaAmount min min mAU s ng ul impurity4 00013 0002098 379312 0984Totals 2 0984注 此處用于雜質(zhì)定量計(jì)算的RF值為手工輸入的0 001 2005 3 212020 3 13 Slide88 調(diào)用信號 加入二級校正 輸入二級標(biāo)樣含量 2005 3 212020 3 13 Slide89 加入更多的級別輸入對應(yīng)標(biāo)樣含量 線性相關(guān)系數(shù) 2005 3 212020 3 13 Slide90 SaveTabletoMethod 把校正表存入方法 2005 3 212020 3 13 Slide91 再校正 當(dāng)校正曲線上的點(diǎn)發(fā)生偏移 需要對相應(yīng)的濃度點(diǎn)做再校正 再校正過程如下 進(jìn)一針相應(yīng)濃度的標(biāo)樣 調(diào)用此數(shù)據(jù)文件 在Calibration菜單下 選擇Recalibrate 選擇需要再校正的級別 然后選擇如何再校正 Average或Replace 工作站自動進(jìn)行再校正 2005 3 212020 3 13 Slide92 AdvancedCalibration 2005 3 212020 3 13 Slide93 CalibrationReportOption 此項(xiàng)功能可以設(shè)置再校正報(bào)告在序運(yùn)行許過程中如何打印 2005 3 212020 3 13 Slide94 第六章設(shè)定報(bào)告格式 本章內(nèi)容 如何定義一個(gè)報(bào)告類型報(bào)告文件的存貯方式報(bào)告類型選擇如何使用系統(tǒng)適用性報(bào)告GLP報(bào)告中內(nèi)容如何存貯GLP數(shù)據(jù)如何執(zhí)行自動庫檢索如何獲得峰純度信息 2005 3 212020 3 13 Slide95 定義報(bào)告 FromDataAnalysis 2005 3 212020 3 13 Slide96 定義報(bào)告 報(bào)告輸出目的地 報(bào)告的輸出目的地可以是打印機(jī) 屏幕或者存貯成報(bào)告文件 報(bào)告可以存貯成下列文件格式 TXT 只有報(bào)告文本 存貯成純文本文件 WMF 每個(gè)報(bào)告的圖形存貯成metafile DIF 數(shù)據(jù)存貯成EXCEL的DIF格式 DataInterchangeFormat 只適用于短報(bào)告格式 CSV 數(shù)據(jù)存貯成數(shù)據(jù)庫文件 CommaSeparatedValues 適用于短報(bào)告 XLS EXCEL報(bào)告格式 HTM 超文本格式 可以使用Internet瀏覽器瀏覽 2005 3 212020 3 13 Slide97 使用網(wǎng)絡(luò)瀏覽器IE查看報(bào)告 2005 3 212020 3 13 Slide98 報(bào)告類型選擇 NoneShortDetailHeader ShortGLP ShortGLP DetailShort SpectrumDetail SpectrumFullLibrarySearchPerformancePerformance NoisePerformance LibrarySearchExtendedPerformance 2005 3 212020 3 13 Slide99 儀器參數(shù)曲線編輯 2005 3 212020 3 13 Slide100 報(bào)告格式存貯到方法中 2005 3 212020 3 13 Slide101 打印報(bào)告 打印報(bào)告 2005 3 212020 3 13 Slide102 報(bào)告工具 選擇校正工具 定義報(bào)告 打印預(yù)覽 打印報(bào)告 顯示 隱藏當(dāng)前色譜圖 2005 3 212020 3 13 Slide103 化學(xué)工作站一共有四種系統(tǒng)適用性報(bào)告格式 Performance Performance Noise Performance LibSearch ExtendedPerformance 每種報(bào)告格式包含不同的報(bào)告內(nèi)容 Performance 根據(jù)EditPerformanceLimits對話框中設(shè)定的限度給出系統(tǒng)適用性報(bào)告 對于未校正的方法 報(bào)告結(jié)果包括 峰號 保留時(shí)間 峰面積 峰高 信號描述 半峰寬 對稱性 K 塔板數(shù)和分辨率 對于校正的方法 報(bào)告結(jié)果包括 峰號 保留時(shí)間 化合物名稱 濃度 信號描述 半峰寬 對稱性 K 塔板數(shù)和分辨率 Performance LibSearch 包括Performance報(bào)告及庫檢索報(bào)告 Performance Noise 包括Performance報(bào)告及噪音檢測報(bào)告 ExtendedPerformance 包括Performance報(bào)告格式及每個(gè)峰的色譜圖 此報(bào)告格式只用于校正峰 系統(tǒng)適用性報(bào)告 2005 3 212020 3 13 Slide104 系統(tǒng)適應(yīng)性報(bào)告 SystemSuitability 在日常分析前或分析中 您可以用系統(tǒng)適用性報(bào)告檢查分析系統(tǒng)的性能 此報(bào)告允許用戶設(shè)定保留時(shí)間 峰高 峰面積 濃度 半峰寬 K 塔板數(shù) 分辨率 選擇性 庫匹配以及校正峰純度的上下限 同時(shí)可以測量基線噪音和基線漂移 噪音檢測 選擇EditNoiseRanges命令進(jìn)入噪音編輯對話框 在此對話框內(nèi)可以編輯7組噪音檢測區(qū)間 噪音檢測區(qū)間不要選在有色譜峰出現(xiàn)的區(qū)域 2005 3 212020 3 13 Slide105 在SpecifyReport中選擇Performance Noise報(bào)告格式 噪音檢測報(bào)告會單獨(dú)給出 噪音檢測報(bào)告包括三種噪音計(jì)算方法的結(jié)果 六倍標(biāo)準(zhǔn)偏差法 峰對峰測量法及ASTM測量法 噪音的來回漂移 wander 及噪音漂移 drift 同時(shí)計(jì)算每個(gè)峰的信噪比 噪音檢測方法原理見 了解您的化學(xué)工作站 第249頁 2005 3 212020 3 13 Slide106 編輯系統(tǒng)性能限度 選擇EditPerformanceLimits命令進(jìn)入編輯系統(tǒng)性能限度對話框 此框內(nèi)可以設(shè)定不同系統(tǒng)參數(shù)的上下限 例如在Retentiontime參數(shù)設(shè)置框內(nèi)輸入期望保留時(shí)間范圍 下限和上限 2005 3 212020 3 13 Slide107 在SpecifyReport報(bào)告中選擇Performance報(bào)告格式 如果樣品測量值超出設(shè)定的限制范圍 報(bào)告中會用 或代表測量值超出設(shè)定上限 代表測量值低于下限 2005 3 212020 3 13 Slide108 化學(xué)工作站中有兩種GLP報(bào)告格式 GLP Short GLP Detail GLP Short 包括標(biāo)題頁 樣品信息 操作條件 Logbook 色譜圖和定量結(jié)果 標(biāo)題頁存貯在Method子目錄下 文件名為RPTHEAD TXT 可以對其進(jìn)行修改 GLP Detail 包括標(biāo)題 樣品信息 操作條件 Logbook 色譜圖 定量結(jié)果和校正曲線 標(biāo)題存貯在Method子目錄下 文件名為RPTHEAD TXT 可以對此文件進(jìn)行修改 存貯GLP數(shù)據(jù)在運(yùn)行時(shí)間表 RunTimeChecklist 中 選擇SaveGLPData GLP數(shù)據(jù)與分析方法以二進(jìn)制方式記錄在GLPSave Reg文件中 此文件不可修改 GLPSave Reg中包括以下信息 儀器設(shè)定參數(shù) 儀器性能參數(shù) 信號 積分結(jié)果 定量結(jié)果 數(shù)據(jù)分析方法 Logbook GLP報(bào)告類型 2005 3 212020 3 13 Slide109 查看GLP數(shù)據(jù) 2005 3 212020 3 13 Slide110 自動庫檢索 要得到一個(gè)庫檢索報(bào)告 首先從SpecifyReport中選擇LibrarySearch或Performance LibSearch報(bào)告形式 選擇AutomatedLibrarySearch命令 進(jìn)入自動檢索編輯對話框 通過此對話框可以編輯檢索參數(shù) 2005 3 212020 3 13 Slide111 TimeRange 定義檢索時(shí)間范圍 Library 選擇標(biāo)準(zhǔn)譜庫 可以同時(shí)選擇四個(gè)譜庫 EditSearchParms 編輯檢索參數(shù) 利用LeftWindow 和RightWindow 可以定義檢索區(qū)間 PeakPurityCheck 是否進(jìn)行峰純度檢測 如果進(jìn)行峰純度檢測 還可以設(shè)置庫檢索匹配閾值 庫檢索匹配閾值決定樣品的檢索結(jié)果 如果樣品的庫檢索匹配閾值低于設(shè)定值 則此樣品與標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索譜圖不匹配 自動庫檢索參數(shù)設(shè)置 LibrarySearchModes 有三種庫檢索方式 Identificationbyspectrallibrarysearch 在設(shè)定檢索區(qū)間內(nèi)對每個(gè)化合物進(jìn)行庫檢索 Targetcompoundanalysisusingthecalibrationtable 在規(guī)定檢索區(qū)間內(nèi)對校正表給定的化合物進(jìn)行檢索 Targetcompoundanalysisusingthespectralibrary 在檢索區(qū)間內(nèi)對校正表給的化合物進(jìn)行檢索 校正表內(nèi)給定的化合物名稱一定要與標(biāo)準(zhǔn)譜庫中檢索到的標(biāo)準(zhǔn)物名稱一致以保證匹配度 2005 3 212020 3 13 Slide112 庫檢索報(bào)告 檢索報(bào)告中不同欄中有不同的標(biāo)記 這些標(biāo)記解釋如下 u 化合物在峰上坡處檢測到不純 d 化合物在峰下坡處檢測到不純 X 匹配因子低于設(shè)定閾值 搜索到的化合物名稱已經(jīng)分配給另一個(gè)匹配度更好的色譜峰 對于該色譜峰 無法找到一個(gè)匹配度更好的化合物與之對應(yīng) 2005 3 212020 3 13 Slide113 化學(xué)工作站有三種報(bào)告格式可以進(jìn)行峰純度分析 Short Spectra 包括儀器操作條件 定量結(jié)果以及峰純度譜圖 Detail Spectra 包括標(biāo)題 儀器操作條件 定量結(jié)果 校正曲線和峰純度譜圖 Full 包括標(biāo)題 樣品信息 儀器操作條件 Logbook 色譜圖定量結(jié)果以及峰純度譜圖 自動峰純度分析 2005 3 212020 3 13 Slide114 顯示紫外譜圖 第七章DAD高級功能 2005 3 212020 3 13 Slide115 光譜選項(xiàng) 紫外譜圖 2005 3 212020 3 13 Slide116 自動扣除背景平滑譜圖使用導(dǎo)數(shù)譜圖 光譜選項(xiàng) 2005 3 212020 3 13 Slide117 紫外譜圖顯示 紫外譜圖和參比譜圖 扣除背景的紫外譜圖 2005 3 212020 3 13 Slide118 譜圖處理工具圖標(biāo) 光譜選項(xiàng) 選擇色譜圖上任意一點(diǎn)紫外譜圖 選擇峰頂紫外譜圖 平均譜圖 選擇一組紫外譜圖 選擇第一個(gè)參比 選擇第二個(gè)參比峰 選擇峰純度 譜圖處理工具 2005 3 212020 3 13 Slide119 紫外譜庫 原理 2005 3 212020 3 13 Slide120 紫外譜庫 當(dāng)前的局限性 2005 3 212020 3 13 Slide121 影響譜圖匹配的因素 2005 3 212020 3 13 Slide122 創(chuàng)建譜庫 2005 3 212020 3 13 Slide123 輸入譜庫名稱及描述 2005 3 212020 3 13 Slide124 提取化合物光譜圖 2005 3 212020 3 13 Slide125 把譜圖加入譜庫 2005 3 212020 3 13 Slide126 工作站自動標(biāo)出物質(zhì)的最大吸收和最小吸收波長 波長表 2005 3 212020 3 13 Slide127 譜圖管理 2005 3 212020 3 13 Slide128 存貯譜庫文件 2005 3 212020 3 13 Slide129 開始譜圖檢索 打開譜庫 可以打開自己工作站中的譜庫 也可以通過網(wǎng)絡(luò)調(diào)用網(wǎng)上的譜庫 2005 3 212020 3 13 Slide130 檢索模板 2005 3 212020 3 13 Slide131 檢索譜圖 2005 3 212020 3 13 Slide132 檢索結(jié)果 2005 3 212020 3 13 Slide133 譜圖處理工具 調(diào)用譜庫 保存譜庫 檢索工具 2005 3 212020 3 13 Slide134 峰純度檢測 在峰的洗脫過程中 可以通過比較所記錄的吸收光譜圖來評估色譜峰是否包含不純的物質(zhì) 光譜處理工具圖標(biāo) 峰純度檢測 2005 3 212020 3 13 Slide135 峰純度檢測 峰純度檢測就是確認(rèn)一個(gè)色譜峰是純物質(zhì)還是含有其它物質(zhì)的過程 這個(gè)過程是要依靠峰流出中所記錄到的光譜進(jìn)行比較而實(shí)現(xiàn)的 通常對每個(gè)峰以三個(gè)光譜圖來確認(rèn)純度 其中兩個(gè)光譜取自于固定點(diǎn) 斜率上升點(diǎn)和斜率下降點(diǎn) 另一個(gè)取自于最高點(diǎn) 最高點(diǎn)或頂點(diǎn)光譜 如果需要 還可以選擇5 7 9或All光譜圖來進(jìn)行純度計(jì)算 如果這些光譜不相同 理論上講這個(gè)峰含有不純物 這種光譜不純可能是由一個(gè)或多個(gè)化合物引起的 也可能是由背景吸收引起的 要進(jìn)行峰純度檢測 首先選擇Spectra菜單下SpectraOption 進(jìn)行峰純度參數(shù)編輯 2005 3 212020 3 13 Slide136 Spectra 此選項(xiàng)允許用戶選擇光譜處理參數(shù) 工作站按用戶選擇的參數(shù)進(jìn)行譜圖處理 然后顯示在屏幕上 此選項(xiàng)共有三組參數(shù) WavelengthRange 設(shè)定光譜在屏幕上的顯示范圍 并且可通過此參數(shù)范圍的設(shè)定去除流動相或背景噪音吸收的干擾 SpectraPerPeak 選擇從色譜峰上提取光譜圖個(gè)數(shù) 例如選擇7 則從色譜峰上等距離選擇7個(gè)點(diǎn)進(jìn)行處理 同時(shí)選擇Threshold 去除雜質(zhì)峰 只有高于設(shè)定Threshold值的峰才被顯示 SpectraProcessing 選擇光譜處理過程 SmoothFactor 當(dāng)噪音干擾非常利害 即噪音光譜與樣品光譜吸收強(qiáng)度相近時(shí) 峰純度檢測的可靠性受到限制 選用平滑參數(shù)處理譜圖 可以降低系統(tǒng)噪音 使得平滑后的光譜圖更可靠 同時(shí)改變譜圖輪廓 此值越高 譜圖平滑越利害 建議在作譜圖間比較時(shí) 使用相同的平滑參數(shù) SplineFactor 當(dāng)采集譜圖時(shí)使用低靈敏度 得到的譜圖可能象個(gè)多邊形 通過SplineFactor選擇 在原始數(shù)據(jù)點(diǎn)之間加入新數(shù)據(jù)點(diǎn)進(jìn)行數(shù)學(xué)處理 產(chǎn)生一條平滑的曲線 使譜圖更美觀 此值越大 新增數(shù)據(jù)點(diǎn)越多 Logarithm 對每張譜圖取對數(shù) 以縮小顯示比例 DerivativeOrder 對選擇的譜圖取導(dǎo)數(shù) 以揭示譜圖更細(xì)節(jié)的信息 峰純度參數(shù)設(shè)置 2005 3 212020 3 13 Slide137 Reference 設(shè)定參比吸收 然后從選擇的樣品譜圖中扣除參比吸收 None 不設(shè)置參比波長 Manual 當(dāng)選擇一個(gè)參比時(shí)間時(shí) 此參比時(shí)間的光譜被所選擇的樣品譜圖扣除 當(dāng)選擇兩個(gè)參比時(shí)間 兩個(gè)參比時(shí)間的參比光譜用內(nèi)插法重建一個(gè)參比光譜 然后被所選擇的樣品光譜扣除 Automatic 工作站自動選擇參比光譜 2005 3 212020 3 13 Slide138 Display 規(guī)定譜圖顯示的格式 Multi Spectra 顯示重疊譜圖還是分別顯示譜圖 Display 顯示譜圖的內(nèi)容 2005 3 212020 3 13 Slide139 Purity 允許用戶選擇適當(dāng)?shù)拈撝祷蛲ㄟ^工作站自動計(jì)算閾值 PeakcontrolledspectraldatafileThreshold 定義控制譜圖的限制 高于此限制的色譜峰則為純峰 限制范圍為0 1000 AllSpectradatafileCalculateThreshold 基于每個(gè)峰的信噪比 工作站自動計(jì)算每個(gè)峰的峰純度閾值 只適應(yīng)于數(shù)據(jù)文件中用ALL或ALLinPEAK存貯的樣品 FixedThreshold 用戶自己設(shè)定閾值限制 而不用計(jì)算機(jī)自動計(jì)算 2005 3 212020 3 13 Slide140 Advanced 選擇峰純度計(jì)算方法及擬合曲線的顯示方式 2005 3 212020 3 13 Slide141 等高圖 3D顯示 峰純度信息 峰純度分析窗口 閾值曲線 模擬曲線 SpectralOverlay 2005 3 212020 3 13 Slide142 峰純度檢測屏幕顯示 峰起點(diǎn) 參考譜圖 每張光譜圖的相似性 模擬曲線 閾值曲線 峰終點(diǎn) 參考譜圖 超出閾值 未超閾值 紅色 超出Threshold 綠色 未超出Threshold 2005 3 212020 3 13 Slide143 SpectraSimilarityCurve 給出峰純度的詳細(xì)信息 一個(gè)色譜峰上所有光譜圖與某一個(gè)或多個(gè)譜圖 缺省值為平均譜 理想的絕對純的色譜峰的SimilarityCurve為在1000處一平坦的直線 見下圖左側(cè)圖 由于在峰的起始和終止位置信噪比下降 背景噪音對峰譜圖的影響非常明顯 致使SimilarityCurve變成右側(cè)圖形狀 ThresholdCurve 顯示給定SimilarityCurve的噪音效果 實(shí)際上ThresholdCurve是一條受到背景噪音影響的純色譜峰的相似曲線 2005 3 212020 3 13 Slide144 下圖給出峰純度高的兩條曲線 左側(cè) 和不純峰的曲線 右側(cè) 峰純度判別 ThresholdCurve和SimilarityCurve非常平滑 沒有交叉 且ThresholdCurve位于SimilarityCurve之上 PurityFactor值大于Threshold 2005 3 212020 3 13 Slide145 xandyaremeasuredabsorbancesinthefirstandsecondspectrumrespectively atthesamewavelength nisthenumberofdatapoints isthesumofthedata Attheextremes amatchfactorof0indicatesnomatchand1000indicatesidenticalspectra Generally valuesabove990indicatethatthespectraaresimilar Valuesbetween900and990indicatethereissomesimilarity buttheresultshouldbeinterpretedwithcare Allvaluesbelow900indicatethespectraaredifferent 匹配因子受很多參數(shù)影響 這些參數(shù)由樣品和分離方法決定 它們包括化合物特性 流動相波譜吸收 噪音干擾水平以及背景吸收和譜圖漂移等 匹配因子的計(jì)算 2005 3 212020 3 13 Slide146 峰純度信息 純峰 2005 3 212020 3 13 Slide147 峰純度信息 不純峰 2005 3 212020 3 13 Slide148 差譜 純峰 差譜 不純峰 附加信息 差譜 2005 3 212020 3 13 Slide149 化合物特征 媒