微生物質(zhì)量控制全解.ppt

微生物室規(guī)范化質(zhì)量控制 微生物室規(guī)范化質(zhì)量控制的重要性 質(zhì)量是臨床微生物實驗室的生命 正確的鑒定和藥敏報告對醫(yī)生的診斷和治療有重要的參考價值 反之會誤導(dǎo)醫(yī)生 所以實驗室應(yīng)建立完善的質(zhì)量控制制度以保證檢驗質(zhì)量的正確和穩(wěn)定 微生物室規(guī)范化質(zhì)量控制的步驟 一 建立質(zhì)量控制的基本范圍和內(nèi)容二 細菌分離和鑒定質(zhì)量控制實施三 藥敏試驗的質(zhì)量控制實施四 其他儀器設(shè)備質(zhì)量控制實施五 真菌檢測的質(zhì)量保證的實施六 檢測和校準(zhǔn)結(jié)果質(zhì)量的保證 一 建立質(zhì)量控制的基本范圍和內(nèi)容 一 建立標(biāo)本接種前的質(zhì)量控制制度1 痰標(biāo)本應(yīng)規(guī)定在留取標(biāo)本后1小時內(nèi)送至實驗室 細菌室應(yīng)在收到標(biāo)本后30分鐘內(nèi)接種完畢 2 糞便標(biāo)本應(yīng)采集后立即接種 3 血液標(biāo)本種入培養(yǎng)血瓶后立即送檢或于室溫下保存 切不能放冰箱 4 尿標(biāo)本應(yīng)于2小時內(nèi)送實驗室 實驗室收到標(biāo)本后應(yīng)于30分鐘內(nèi)接種完 5 拭子標(biāo)本采集后應(yīng)全部采用輸送培養(yǎng)基送到實驗室檢查 一 建立質(zhì)量控制的基本范圍和內(nèi)容 二 建立細菌分離率質(zhì)控系統(tǒng)呼吸道標(biāo)本或可能含嗜血桿菌的標(biāo)本一定要接種巧克力培養(yǎng)基 含5 脫纖維綿羊血瓊脂 采用5 10 的CO2培養(yǎng)系統(tǒng) 培養(yǎng)周期24 72h 考察指標(biāo) 嗜血桿菌屬在常規(guī)送檢標(biāo)本中的分離率應(yīng)不低于30 50 肺炎鏈球菌的分離率不低于5 10 卡他莫拉菌的分離率不低于2 5 如果在1周中未分離出上述苛養(yǎng)菌應(yīng)認(rèn)真查找原因 一 建立質(zhì)量控制的基本范圍和內(nèi)容 三 藥敏質(zhì)控系統(tǒng)的規(guī)范化質(zhì)控的抗菌藥物種類應(yīng)包括全部常用抗菌藥物 正確選擇質(zhì)控菌株 如金黃色葡萄球菌ATCC25923用于紙片法藥敏的質(zhì)控 而金葡菌ATCC29213用于稀釋法藥敏質(zhì)控 建立3種系統(tǒng)藥敏質(zhì)控 30d初始質(zhì)控 在30d內(nèi)失控不超過3次時可進入1周質(zhì)控 如失控超過3次應(yīng)進入5d的糾控系統(tǒng) 經(jīng)5d糾控 合格后方可進入1周質(zhì)控 1周質(zhì)控是維持日常質(zhì)控的形式 一旦失控應(yīng)進入糾控系統(tǒng) 按糾控規(guī)則處理 一 建立質(zhì)量控制的基本范圍和內(nèi)容 四 鑒定質(zhì)控系統(tǒng)包括自動化設(shè)備鑒定系統(tǒng) 商品鑒定系統(tǒng)如API 單一的生化反應(yīng)管及原材料 原則上應(yīng)進行每換批號時都要有質(zhì)控這也稱為批批檢 特別容易被忽略的是羊血的質(zhì)量 如羊血中是否含抑制細菌生長的物質(zhì) M H瓊脂中胸腺嘧啶含量 可通過平皿抑制試驗檢測羊血是否含抗生素 在涂有細菌的平皿不同方位滴入羊血數(shù)滴 35 培養(yǎng)過夜觀察結(jié)果 要求在滴有羊血的部位不出現(xiàn)抑菌環(huán) 用糞腸球菌ATCC29212或ATCC33186質(zhì)控菌株測試MH瓊脂上氨芐西林的抑菌環(huán) 若產(chǎn)生20mm或更大的抑菌環(huán) 表示合格 一 建立質(zhì)量控制的基本范圍和內(nèi)容 五 質(zhì)控記錄要真實 要有失控 超過質(zhì)控允許范圍的結(jié)果稱為失控 記錄 并認(rèn)真的尋找原因和解決問題 一 建立質(zhì)量控制的基本范圍和內(nèi)容 六 質(zhì)量控制應(yīng)該是每個有發(fā)報告檢驗人員的職責(zé) 不要把質(zhì)控工作讓一個人去做 在實驗室要樹立質(zhì)量意識 七 室間質(zhì)量控制二級或以下醫(yī)院應(yīng)參加本地區(qū)或本市的質(zhì)量控制活動 三級醫(yī)院除參加本地區(qū)的質(zhì)控活動外還應(yīng)該參加全國或全球的質(zhì)量控制活動 二 細菌分離和鑒定質(zhì)量控制實施 細菌鑒定的質(zhì)量由多種因素組成 所以細菌鑒定的質(zhì)量控制應(yīng)包括細菌分離的質(zhì)量控制 染色液的質(zhì)量控制 鑒定試劑的質(zhì)量控制 鑒定設(shè)備的質(zhì)量控制等 二 細菌分離和鑒定質(zhì)量控制實施 一 分離培養(yǎng)質(zhì)量控制用血瓊脂和巧克力培養(yǎng)基接種肺炎鏈球菌 B 溶血和草綠色溶血的鏈球菌 流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)菌株或經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化試劑已證實結(jié)果正確的菌株進行測試 判斷實驗室的分離能力 二 細菌分離和鑒定質(zhì)量控制實施 二 染色液質(zhì)量控制每天在開始用染色液前應(yīng)檢查染色液的質(zhì)量和檢測有無污染 二 細菌分離和鑒定質(zhì)量控制實施 三 鑒定試劑質(zhì)量控制購入新的試劑 試劑更換批號 更換生產(chǎn)廠家 結(jié)果發(fā)生異常等情況時均應(yīng)選擇相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)菌株進行質(zhì)量控制 二 細菌分離和鑒定質(zhì)量控制實施 四 自動化設(shè)備試劑質(zhì)控要求同鑒定試劑 設(shè)備軟件升級 修改版本 或大的維修時均應(yīng)進行質(zhì)量控制程序 三 藥敏試驗的質(zhì)量控制實施 一 建立合理的常規(guī)藥敏種類不同抗生素的抗菌譜不同 抗菌強度不同 細菌耐藥譜不同 對不同的病原菌建立正確的常規(guī)藥敏種類是非常必要的 錯誤的藥敏種類的報告會誤導(dǎo)醫(yī)生 按CLSI要求和根據(jù)本單位用藥習(xí)慣建立藥敏常規(guī)試驗的種類 二 M H瓊脂平皿定量在瓊脂擴散法藥敏試驗中 M H瓊脂厚度是嚴(yán)重影響紙片藥敏試驗結(jié)果的重要因素 瓊脂培養(yǎng)基越厚抑菌環(huán)直徑越小 反之則越大 克服的辦法是要在保持水平的平臺上 水平儀 定量傾注培養(yǎng)基 這個問題至今未被充分的重視 10cm的平皿應(yīng)傾注23 25ml的培養(yǎng)基 三 抗菌藥紙片貯藏紙片失效是造成藥敏結(jié)果錯誤的最重要的原因 必須在 20 或更低溫度的低溫冰箱中保存紙片 近期使用的紙片只需放4 冰箱 一周后棄取 更換新紙片 三 藥敏試驗的質(zhì)量控制實施 四 特殊菌藥敏規(guī)范化 1 萬古霉素中介菌株的報告 中介腸球菌藥敏試驗應(yīng)用含6mg l萬古霉素的瓊脂 點種0 5麥?zhǔn)蠁挝痪?35 培養(yǎng)18 24h 點種菌生長者示為耐藥 不生長者示為敏感 葡萄球菌對萬古霉素中介 中度敏感 時 應(yīng)再測定其最低抑菌濃度 MIC 確定 2 葡萄球菌苯唑西林中介株 用含4 NaCL和每升含6mg笨唑西林的瓊脂 點種0 5麥?zhǔn)蠁挝坏木?置35 培養(yǎng)24h 生長者為耐藥株 不生長者為敏感株 3 克林霉素報告 必須在 D 試驗的基礎(chǔ)上 D 試驗是在瓊脂或血瓊脂平皿上均勻涂被測菌 稍后 在相距15 26mm分別貼15 g 片紅霉素紙片和2ug克林霉素紙片 培養(yǎng)18 24h后 在克林霉素側(cè)出現(xiàn)切痕為 D 試驗陽性 應(yīng)報告克林霉素耐藥 無切痕可報告敏感 4 耐甲氧西林金葡菌 MRSA 用頭孢西丁紙片代替苯唑西林紙片 試驗結(jié)果仍應(yīng)報告為苯唑西林敏感或耐藥 5 腸外標(biāo)本中分離的沙門菌屬 當(dāng)環(huán)丙沙星MIC 0 12 1 0mg L低耐時用奈啶酸測試MIC 當(dāng)MIC 2mg l為中介度 I MIC 4為耐藥 R 四 其他儀器設(shè)備質(zhì)量控制實施 一 培養(yǎng)箱的質(zhì)量控制每天第一個開箱和最后離開實驗室的人員均應(yīng)觀察培養(yǎng)箱的溫度并作質(zhì)量控制記錄 二 CO2培養(yǎng)箱的質(zhì)量控制每天應(yīng)記錄CO2的含量并在質(zhì)量控制圖上作記錄 三 冰箱溫度記錄按每一冰箱存放的物品不同設(shè)置不同溫度范圍 一般在5 2 每天觀察并記錄 四 低溫冰箱每天觀察并記錄一次 要求溫度變化不超過設(shè)定范圍的上下2 五 真菌檢測的質(zhì)量保證的實施 低免疫人群的增長 超廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用使真菌感染迅速增加 侵襲性念珠菌及曲霉感染使重癥監(jiān)護病房 ICU 的病死率明顯上升 50 75 的病例不能在生前獲得細菌學(xué)的陽性結(jié)果 因此加強真菌檢測的規(guī)范化操作 提高檢測陽性率及藥敏試驗的正確率十分必要 五 真菌檢測的質(zhì)量保證的實施 一 真菌涂片的規(guī)范化真菌涂片是真菌鑒定最重要的方法 真菌檢驗人員應(yīng)熟悉真菌的形態(tài)特點 無菌體液標(biāo)本涂片應(yīng)離心濃縮以增加陽性率 并一定要檢測菌絲 對痰及口腔標(biāo)本要進行定量 菌落計數(shù) 或半定量 用加號表示 在分區(qū)劃線的3個區(qū)都豐富生長報告為 依次類推2個區(qū)生長為 1個區(qū)生長為 組織標(biāo)本涂片要研磨后涂片但要保護菌絲體的形態(tài) 在標(biāo)本量許可的前題下涂片不應(yīng)少于3張 五 真菌檢測的質(zhì)量保證的實施 二 真菌鑒定的規(guī)范化對酵母樣真菌如念珠菌或隱球菌在常規(guī)臨床細菌室已有較成熟的方法學(xué) 可用顯色培養(yǎng)基或自動化系統(tǒng)鑒定真菌 常規(guī)鑒定絲狀真菌主要依賴于其生長過程中形態(tài)變化和特點 所以要求從事絲狀真菌檢測的檢驗人員應(yīng)作專業(yè)短期培訓(xùn) 任何實驗室都應(yīng)建立規(guī)范的涂片鑒定方法 要正確區(qū)分酵母樣真菌或絲狀真菌 毛霉菌和曲霉 有頂囊 對不常見的真菌不要輕易作為污染菌報告 五 真菌檢測的質(zhì)量保證的實施 三 真菌藥敏的質(zhì)量保證建立稀釋法藥敏試驗 報告MIC值的報告對臨床更有參考價值 必須正確掌握終點判斷標(biāo)準(zhǔn) 氟康唑 伊曲康唑 氟胞嘧啶等藥物終點允許有20 真菌生長而兩性霉素B應(yīng)無真菌生長作為終點 對無折點的抗真菌藥物藥敏試驗報告可只報告MIC 不能報告敏感度 鑒定真菌到種水平是臨床用藥的重要的參考 五 真菌檢測的質(zhì)量保證的實施 四 要重視組織標(biāo)本的培養(yǎng)首先要無菌采集組織標(biāo)本 接種前要無菌作適當(dāng)粉碎將組織內(nèi)的菌絲體暴露 每一份組織標(biāo)本必須同時做涂片和培養(yǎng) 五 真菌檢測的質(zhì)量保證的實施 五 開展非培養(yǎng)方法的真菌檢查試驗如 D葡聚糖和或診斷曲霉菌的GM試驗 用于區(qū)別真菌 曲霉菌或細菌感染 六 檢