反相高效液相色譜法測(cè)定雪碧中的苯甲酸.doc

分 析 化 學(xué) 實(shí) 驗(yàn) 報(bào) 告實(shí) 驗(yàn) 名 稱：反相高效液相色譜法測(cè)定雪碧中的苯甲酸 專 業(yè)： 化學(xué)教育 班 級(jí)： 11化學(xué)班 姓 名： 指 導(dǎo) 教 師： 郭老師 日 期： 2013.9.7 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的操作。 2、了解高效液相色譜法測(cè)定苯甲酸的基本原理。 3、掌握高效液相色譜法進(jìn)行定性及定量分析的基本方法。一、 實(shí)驗(yàn)原理 苯甲酸為具有苯或甲醛的氣味的鱗片狀或針狀結(jié)晶，具有苯或甲醛的臭味。熔點(diǎn)122.13，沸點(diǎn)249，相對(duì)密度1.2659（15/4）。在100時(shí)迅速升華，它的蒸氣有很強(qiáng)的刺激性，吸入后易引起咳嗽。微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有機(jī)溶劑。苯甲酸是弱酸，比脂肪酸強(qiáng)。苯甲酸是重要的酸型食品防腐劑。在酸性條件下，對(duì)霉菌、酵母和細(xì)菌均有抑制作用，但對(duì)產(chǎn)酸菌作用較弱。抑菌的最適pH值為2.54.0，一般以低于pH值4.55.0為宜。在食品工業(yè)用塑料桶裝濃縮果蔬汁，最大使用量不得超過2.0g/kg；在果醬(不包括罐頭)、果汁(味)型飲料、醬油、食醋中最大使用量1.0g/kg；在軟糖、葡萄酒、果酒中最大使用量0.8g/kg；在低鹽醬菜、醬類、蜜餞，最大使用量0.5g/kg；在碳酸飲料中最大使用量0.2g/kg。 用高效液相色譜法將飲料中的苯甲酸與其它組分（如：檸檬酸（鈉）、蔗糖等）分離后，將已配制的濃度不同的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)入色譜系統(tǒng)。如流動(dòng)相流速和泵的壓力在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中是恒定的，測(cè)定它們?cè)谏V圖上的保留時(shí)間tR和峰面積A后，可直接用tR定性，用峰面積A作為定量測(cè)定的參數(shù)，采用工作曲線法（即外標(biāo)法）測(cè)定飲料中的苯甲酸含量。 三、儀器和試劑 1、Agilent 1220高效液相色譜儀。2、色譜柱：Kromasil C18，5 1504.6mm。3、流動(dòng)相：75%甲醇（色譜純）+25%PH=3.3的磷酸緩沖溶液（過三次）。 4、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：準(zhǔn)確稱取0.0109g含量99.5%苯甲酸，用過三次的蒸餾水溶解，定量至50mL容量瓶中，并稀釋至刻度。標(biāo)樣濃度217gmL-1。4、測(cè)飲料試液：雪碧四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、 將標(biāo)準(zhǔn)貯備液分別稀釋為0.434、0.868、2.17、4.34、8.68、21.7、43.4gmL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，并貼上標(biāo)簽。（稀釋為50mL）2、 譜儀器條件：泵的流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；進(jìn)樣量：20L；柱溫：室溫。3、 儀器基線穩(wěn)定后，進(jìn)苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)樣，濃度由低到高。4、 品處理如下：（1）將約100mL雪碧置于一100mL潔凈、干燥的燒杯中，用超聲波脫氣10min，以趕盡雪碧中二氧化碳。取5mL雪碧樣品轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。5、 將雪碧樣品注入2mL樣品瓶中備用。6、 “Agilent 1220高效液相色譜儀操作規(guī)程”分析飲料試液。5、 結(jié)果處理1、 C=43.4時(shí)的譜圖為下圖1： 圖12、 樣品譜圖為下圖2： 圖23、各濃度及數(shù)據(jù) 濃度 名稱進(jìn)樣量/uL保留時(shí)間峰面積峰面積%峰高峰高率%0.434202.4931979801.45246304.30.868202.4974532653.4311975.852.17202.4973862122.75546628.934.34202.49710717538.0310494315.388.68202.493174543613.0419427826.7621.7202.497377084222.3346024146.5743.4202.500732748337.5888815664.26樣品202.507378832932.0037016243.42五、計(jì)算苯甲酸的含量由標(biāo)準(zhǔn)曲線可得：C=（A-223503）/164090 A為樣品峰面積；A=3788329 算得C=21.725ug/mL 1mL雪碧里含苯甲酸的量為：21.725ug/mL*50mL/5mL=217.25ug/mL=217.25ug/mL 500mL雪碧里含苯甲酸的量為：217.25ug/mL*500mL=108625ug=0.107g所以苯甲酸含量為0.107g/500mL=0.107g/500g=0.214g/kg 注意： 1、若出峰時(shí)間短，則應(yīng)