EB病毒感染的實驗室指標.doc

EB病毒感染的實驗室指標2016-03-08兒科助手EBNA二聚體帶狀模型EB病毒（Epstein-Barrvirus，EBV）屬于4型皰疹病毒，類似其他皰疹病毒科的病毒，EBV感染包括增殖性感染（或稱活動性感染）和潛伏感染兩種狀態(tài)，EBV感染人淋巴細胞和上皮細胞，初次感染后病毒可長期在人上呼吸道上皮細胞或淋巴組織中潛伏，潛伏感染和終生攜帶是EBV感染的重要特征。人群對EBV普遍易感，大多數(shù)人初次感染發(fā)生在兒童或青少年時期并可終生攜帶，在中國，8歲以上人群90以上血清學陽性。傳染性單核細胞增多癥（infectious mononucleosis，IM） 是典型的EBV初次感染表現(xiàn)；值得注意的是在免疫抑制（如器官移植）、遺傳缺陷（如X連鎖淋巴組織增生）或潛伏感染的反復激活的情況下，EBV感染可能導致不良預后，如發(fā)展成為慢性活動性EB病毒感染（CAEBV）和EBV相關的噬血性淋巴組織增生（EBV-HLH）。另外EBV還與兒童及成人的淋巴瘤等多種腫瘤發(fā)病有關。因而及時準確的實驗室診斷有助于臨床對EBV感染的時相、機體狀況和發(fā)生不良轉(zhuǎn)歸的風險進行評估，這對于兒童EBV感染性疾病的診斷及預后至關重要。一、EBVDNA測定EBV-DNA陽性是EBV存在的直接證據(jù)。由于潛伏感染的存在，正常人外周血單個核細胞中也常有低載量的EBV-DNA檢出（通常低于200拷貝數(shù)m1）。在活動感染發(fā)生時EBV在人淋巴細胞中大量增殖（IM患者一般可達103105拷貝數(shù)m1）并釋放到血漿或淋巴液中。隨著感染的控制，EBV感染進入潛伏狀態(tài)，血漿或淋巴液中的病毒顆粒迅速消失，而外周血淋巴細胞中的EBV仍將以潛伏狀態(tài)保持較高滴度數(shù)月1年。對于復發(fā)性感染外周血EBV-DNA載量會更高，CAEBV可達105106拷貝數(shù)ml甚至更高，EBV-HLH一般在104106拷貝數(shù)ml之間。由于不同感染狀態(tài)下病毒的狀態(tài)和分布不同，EBV-DNA測定結果的解釋因標本來源的不同而有不同。1全血：淋巴細胞是EBV感染的靶細胞，淋巴細胞中潛伏期EBV的存在和活動感染后長達數(shù)月的持續(xù)陽性使得該檢測結果不能反映現(xiàn)癥感染，也不適合急性感染如IM的診斷。因此外周血單個核細胞EBV-DNA定量測定更適合復發(fā)感染如CAEBV、EBV-HLH或移植相關EBV感染的診斷和檢測。本方法的一個缺陷在于單個核細胞分離步驟繁瑣，自動化程度低，定量結果受單個核細胞的分離效率影響較大。為解決這一問題，有研究者使用吸附法抽提全血DNA進行定量，現(xiàn)有大量商品化的抽提系統(tǒng)可供使用，抽提步驟自動化程度大大提高，且定量結果與分離單個核細胞的測定結果具有良好的相關性。2血漿或血清：血漿中的EBV-DNA來自活動感染期由感染淋巴細胞中釋放的病毒顆粒，感染被控制后血液中游離的病毒顆粒和EBV-DNA又被免疫系統(tǒng)迅速廓清。因此血漿或血清中的EBV-DNA只有活動期感染時為陽性，恢復期和潛伏感染為陰性，這使得血漿EBV-DNA成為一個很好反映活動感染的指標，在IM、EBV-HLH和淋巴瘤等急慢性活動感染患者的血漿中均可檢出，而潛伏感染者多為陰性。3上呼吸道標本如唾液、口腔含漱液和咽喉拭子：具有取材方便的優(yōu)點，但由于EBV在絕大多數(shù)人咽喉部定植，無論潛伏感染或活動性感染均可檢出，常用于流行病學調(diào)查和鼻咽癌方面的一些檢查，對IM和其他兒科相關EBV感染的診斷價值有限。就EBV-DNA檢測的方法學而言，商品化的EBV-DNA測定試劑盒自20世紀90年代末上市以來，EBV-DNA的測定經(jīng)歷了從半定量、競爭定量到熒光定量的演化，現(xiàn)一般采用熒光定量PCR的方法，分析性能良好，但迄今為止仍無權威的參考物質(zhì)，市場上多數(shù)試劑盒仍使用自制的以質(zhì)粒為基礎的標準品，適宜的第三方質(zhì)控品也不易得到，這為EBV-DNA測定的標準化帶來了一定的障礙。二、EBV相關抗體測定EBV初次感染時，機體首先產(chǎn)生針對其殼抗原（viral capsid antigen，VCA）的IgM抗體（VCA-IgM），然后是殼抗原低親和力的IgG抗體（VCA-IgG），隨著抗體親和力的成熟，感染后期機體將產(chǎn)生高親和力的VCA-IgG和核心抗原抗體（EBNA-IgG）并持續(xù)終身。在急性感染中后期還會一過性早期抗原抗體（EA-IgG）出現(xiàn)。而IgA型的抗體與EBV進入上皮細胞有關，持續(xù)高滴度的IgA抗體被認為和鼻咽癌有關。血清中的EBV相關抗體主流檢測方法為ELISA、化學發(fā)光和免疫熒光法，臨床應用非常廣泛，但由于針對不同抗原或不同亞類的抗體具有不同的臨床意義，相關抗體的組合測定有助于感染類型和時相的判斷，檢驗項目的合理選擇和正確解釋就顯得非常重要。VCA-IgM是最常用的EBV初次感染的指標，然而部分患者可能因VCA-IgM缺失而導致漏診；低親和力的VCA-IgG在初次感染的早期出現(xiàn)，也可作為初次感染的診斷指標。EBNA-IgG和高親和力的VCA-IgG都在感染后期才出現(xiàn)并可終生攜帶，被視為恢復期或既往感染的指標；對于免疫功能正常的個體，EBNA-IgG與VCA-IgG結合可用于初次感染和復發(fā)感染以及感染時相的判斷。 EA-IgG產(chǎn)生晚于VCA-IgG，慢性活動感染時可持續(xù)陽性，根據(jù)熒光模式差異EA可分為彌散型（D）和局限型（R）。結合其他抗體檢測結果，EA抗體通常用于復發(fā)感染相關疾病的診斷。 三、EB病毒感染的其他檢驗除EBV核酸和抗體檢測外，感染者的細胞免疫功能檢測、惡性EBV感染性疾病易感基因檢測以及EBV基因分型也正越來越引起臨床的重視。1感染者的細胞免疫功能檢測：EBV感染者的細胞免疫功能通常通過流式細胞術進行測定，淋巴細胞亞群方面IM患者主要體現(xiàn)在CD3+和CD8+細胞的增高；EBV-HLH患兒典型特征為NK細胞減少；而CAEBV患者的典型特征為2系以上血細胞計數(shù)的減低?？笶BV免疫依賴于特異性的細胞免疫，T細胞向ThlTh2的極化狀態(tài)很大程度上決定了免疫殺傷和免疫逃避，通過測定細胞因子、極化相關轉(zhuǎn)錄因子以及外周血白細胞CCR3CCR5表達水平可反映T細胞的極化狀態(tài)，從而對機體抗病毒免疫功能進行評估。2惡性EB病毒相關疾病易感基因檢測：X連鎖淋巴組織增生是一種X染色體連鎖的先天性免疫缺陷病，患者對EBV感染高度敏感，發(fā)病急，常表現(xiàn)為暴發(fā)性IM、HLH、低丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤等，預后很差，70以上患兒于10歲前死亡，因此早期診斷并及時進行骨髓移植至關重要，相關的遺傳學突變包括X染色體上的SH2D1A和XIAP等基因。另外基因PRFl、UNC13D、STXll、STXBP2也可能與原發(fā)性HLH有關。 四、總結EBV作為兒童時期感染的一種常見病毒，具有導致嚴重疾病的潛能，常規(guī)的血清學、分子生物學和分子病理學手段已廣泛應用于EBV感染及EBV相關疾病的診斷。EBV的血清學檢查和核酸載量測定是當前EBV感染相關疾病實驗室檢查的最主要手段，VCA-IgM和低親和力的VCA-IgG對現(xiàn)癥EBV感染具有重要意義，對于IM等急性、亞急性EBV感染而言，血清學檢查優(yōu)于在恢復期還保持很高載量的EBV-DNA。嬰幼兒、器官（或骨髓）移植者、HIV感染者、腫瘤化療患者等免疫功能不全的受檢者，血清學檢查可能帶來漏診，對于此類患者還應結合EBV-DNA載量進行判斷。 EBV-DNA載量的檢測對CAEBV、EBV-HLH的診斷價值高于VCA-IgM血清學檢查。相對于EBV的