EB病毒感染的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo).doc

EB病毒感染的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)2016-03-08兒科助手EBNA二聚體帶狀模型EB病毒（Epstein-Barrvirus，EBV）屬于4型皰疹病毒，類(lèi)似其他皰疹病毒科的病毒，EBV感染包括增殖性感染（或稱(chēng)活動(dòng)性感染）和潛伏感染兩種狀態(tài)，EBV感染人淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞，初次感染后病毒可長(zhǎng)期在人上呼吸道上皮細(xì)胞或淋巴組織中潛伏，潛伏感染和終生攜帶是EBV感染的重要特征。人群對(duì)EBV普遍易感，大多數(shù)人初次感染發(fā)生在兒童或青少年時(shí)期并可終生攜帶，在中國(guó)，8歲以上人群90以上血清學(xué)陽(yáng)性。傳染性單核細(xì)胞增多癥（infectious mononucleosis，IM） 是典型的EBV初次感染表現(xiàn)；值得注意的是在免疫抑制（如器官移植）、遺傳缺陷（如X連鎖淋巴組織增生）或潛伏感染的反復(fù)激活的情況下，EBV感染可能導(dǎo)致不良預(yù)后，如發(fā)展成為慢性活動(dòng)性EB病毒感染（CAEBV）和EBV相關(guān)的噬血性淋巴組織增生（EBV-HLH）。另外EBV還與兒童及成人的淋巴瘤等多種腫瘤發(fā)病有關(guān)。因而及時(shí)準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷有助于臨床對(duì)EBV感染的時(shí)相、機(jī)體狀況和發(fā)生不良轉(zhuǎn)歸的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，這對(duì)于兒童EBV感染性疾病的診斷及預(yù)后至關(guān)重要。一、EBVDNA測(cè)定EBV-DNA陽(yáng)性是EBV存在的直接證據(jù)。由于潛伏感染的存在，正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞中也常有低載量的EBV-DNA檢出（通常低于200拷貝數(shù)m1）。在活動(dòng)感染發(fā)生時(shí)EBV在人淋巴細(xì)胞中大量增殖（IM患者一般可達(dá)103105拷貝數(shù)m1）并釋放到血漿或淋巴液中。隨著感染的控制，EBV感染進(jìn)入潛伏狀態(tài)，血漿或淋巴液中的病毒顆粒迅速消失，而外周血淋巴細(xì)胞中的EBV仍將以潛伏狀態(tài)保持較高滴度數(shù)月1年。對(duì)于復(fù)發(fā)性感染外周血EBV-DNA載量會(huì)更高，CAEBV可達(dá)105106拷貝數(shù)ml甚至更高，EBV-HLH一般在104106拷貝數(shù)ml之間。由于不同感染狀態(tài)下病毒的狀態(tài)和分布不同，EBV-DNA測(cè)定結(jié)果的解釋因標(biāo)本來(lái)源的不同而有不同。1全血：淋巴細(xì)胞是EBV感染的靶細(xì)胞，淋巴細(xì)胞中潛伏期EBV的存在和活動(dòng)感染后長(zhǎng)達(dá)數(shù)月的持續(xù)陽(yáng)性使得該檢測(cè)結(jié)果不能反映現(xiàn)癥感染，也不適合急性感染如IM的診斷。因此外周血單個(gè)核細(xì)胞EBV-DNA定量測(cè)定更適合復(fù)發(fā)感染如CAEBV、EBV-HLH或移植相關(guān)EBV感染的診斷和檢測(cè)。本方法的一個(gè)缺陷在于單個(gè)核細(xì)胞分離步驟繁瑣，自動(dòng)化程度低，定量結(jié)果受單個(gè)核細(xì)胞的分離效率影響較大。為解決這一問(wèn)題，有研究者使用吸附法抽提全血DNA進(jìn)行定量，現(xiàn)有大量商品化的抽提系統(tǒng)可供使用，抽提步驟自動(dòng)化程度大大提高，且定量結(jié)果與分離單個(gè)核細(xì)胞的測(cè)定結(jié)果具有良好的相關(guān)性。2血漿或血清：血漿中的EBV-DNA來(lái)自活動(dòng)感染期由感染淋巴細(xì)胞中釋放的病毒顆粒，感染被控制后血液中游離的病毒顆粒和EBV-DNA又被免疫系統(tǒng)迅速廓清。因此血漿或血清中的EBV-DNA只有活動(dòng)期感染時(shí)為陽(yáng)性，恢復(fù)期和潛伏感染為陰性，這使得血漿EBV-DNA成為一個(gè)很好反映活動(dòng)感染的指標(biāo)，在IM、EBV-HLH和淋巴瘤等急慢性活動(dòng)感染患者的血漿中均可檢出，而潛伏感染者多為陰性。3上呼吸道標(biāo)本如唾液、口腔含漱液和咽喉拭子：具有取材方便的優(yōu)點(diǎn)，但由于EBV在絕大多數(shù)人咽喉部定植，無(wú)論潛伏感染或活動(dòng)性感染均可檢出，常用于流行病學(xué)調(diào)查和鼻咽癌方面的一些檢查，對(duì)IM和其他兒科相關(guān)EBV感染的診斷價(jià)值有限。就EBV-DNA檢測(cè)的方法學(xué)而言，商品化的EBV-DNA測(cè)定試劑盒自20世紀(jì)90年代末上市以來(lái)，EBV-DNA的測(cè)定經(jīng)歷了從半定量、競(jìng)爭(zhēng)定量到熒光定量的演化，現(xiàn)一般采用熒光定量PCR的方法，分析性能良好，但迄今為止仍無(wú)權(quán)威的參考物質(zhì)，市場(chǎng)上多數(shù)試劑盒仍使用自制的以質(zhì)粒為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)品，適宜的第三方質(zhì)控品也不易得到，這為EBV-DNA測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化帶來(lái)了一定的障礙。二、EBV相關(guān)抗體測(cè)定EBV初次感染時(shí)，機(jī)體首先產(chǎn)生針對(duì)其殼抗原（viral capsid antigen，VCA）的IgM抗體（VCA-IgM），然后是殼抗原低親和力的IgG抗體（VCA-IgG），隨著抗體親和力的成熟，感染后期機(jī)體將產(chǎn)生高親和力的VCA-IgG和核心抗原抗體（EBNA-IgG）并持續(xù)終身。在急性感染中后期還會(huì)一過(guò)性早期抗原抗體（EA-IgG）出現(xiàn)。而IgA型的抗體與EBV進(jìn)入上皮細(xì)胞有關(guān)，持續(xù)高滴度的IgA抗體被認(rèn)為和鼻咽癌有關(guān)。血清中的EBV相關(guān)抗體主流檢測(cè)方法為ELISA、化學(xué)發(fā)光和免疫熒光法，臨床應(yīng)用非常廣泛，但由于針對(duì)不同抗原或不同亞類(lèi)的抗體具有不同的臨床意義，相關(guān)抗體的組合測(cè)定有助于感染類(lèi)型和時(shí)相的判斷，檢驗(yàn)項(xiàng)目的合理選擇和正確解釋就顯得非常重要。VCA-IgM是最常用的EBV初次感染的指標(biāo)，然而部分患者可能因VCA-IgM缺失而導(dǎo)致漏診；低親和力的VCA-IgG在初次感染的早期出現(xiàn)，也可作為初次感染的診斷指標(biāo)。EBNA-IgG和高親和力的VCA-IgG都在感染后期才出現(xiàn)并可終生攜帶，被視為恢復(fù)期或既往感染的指標(biāo)；對(duì)于免疫功能正常的個(gè)體，EBNA-IgG與VCA-IgG結(jié)合可用于初次感染和復(fù)發(fā)感染以及感染時(shí)相的判斷。 EA-IgG產(chǎn)生晚于VCA-IgG，慢性活動(dòng)感染時(shí)可持續(xù)陽(yáng)性，根據(jù)熒光模式差異EA可分為彌散型（D）和局限型（R）。結(jié)合其他抗體檢測(cè)結(jié)果，EA抗體通常用于復(fù)發(fā)感染相關(guān)疾病的診斷。 三、EB病毒感染的其他檢驗(yàn)除EBV核酸和抗體檢測(cè)外，感染者的細(xì)胞免疫功能檢測(cè)、惡性EBV感染性疾病易感基因檢測(cè)以及EBV基因分型也正越來(lái)越引起臨床的重視。1感染者的細(xì)胞免疫功能檢測(cè)：EBV感染者的細(xì)胞免疫功能通常通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行測(cè)定，淋巴細(xì)胞亞群方面IM患者主要體現(xiàn)在CD3+和CD8+細(xì)胞的增高；EBV-HLH患兒典型特征為NK細(xì)胞減少；而CAEBV患者的典型特征為2系以上血細(xì)胞計(jì)數(shù)的減低。抗EBV免疫依賴(lài)于特異性的細(xì)胞免疫，T細(xì)胞向ThlTh2的極化狀態(tài)很大程度上決定了免疫殺傷和免疫逃避，通過(guò)測(cè)定細(xì)胞因子、極化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子以及外周血白細(xì)胞CCR3CCR5表達(dá)水平可反映T細(xì)胞的極化狀態(tài)，從而對(duì)機(jī)體抗病毒免疫功能進(jìn)行評(píng)估。2惡性EB病毒相關(guān)疾病易感基因檢測(cè)：X連鎖淋巴組織增生是一種X染色體連鎖的先天性免疫缺陷病，患者對(duì)EBV感染高度敏感，發(fā)病急，常表現(xiàn)為暴發(fā)性IM、HLH、低丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤等，預(yù)后很差，70以上患兒于10歲前死亡，因此早期診斷并及時(shí)進(jìn)行骨髓移植至關(guān)重要，相關(guān)的遺傳學(xué)突變包括X染色體上的SH2D1A和XIAP等基因。另外基因PRFl、UNC13D、STXll、STXBP2也可能與原發(fā)性HLH有關(guān)。 四、總結(jié)EBV作為兒童時(shí)期感染的一種常見(jiàn)病毒，具有導(dǎo)致嚴(yán)重疾病的潛能，常規(guī)的血清學(xué)、分子生物學(xué)和分子病理學(xué)手段已廣泛應(yīng)用于EBV感染及EBV相關(guān)疾病的診斷。EBV的血清學(xué)檢查和核酸載量測(cè)定是當(dāng)前EBV感染相關(guān)疾病實(shí)驗(yàn)室檢查的最主要手段，VCA-IgM和低親和力的VCA-IgG對(duì)現(xiàn)癥EBV感染具有重要意義，對(duì)于IM等急性、亞急性EBV感染而言，血清學(xué)檢查優(yōu)于在恢復(fù)期還保持很高載量的EBV-DNA。嬰幼兒、器官（或骨髓）移植者、HIV感染者、腫瘤化療患者等免疫功能不全的受檢者，血清學(xué)檢查可能帶來(lái)漏診，對(duì)于此類(lèi)患者還應(yīng)結(jié)合EBV-DNA載量進(jìn)行判斷。 EBV-DNA載量的檢測(cè)對(duì)CAEBV、EBV-HLH的診斷價(jià)值高于VCA-IgM血清學(xué)檢查。相對(duì)于EBV的