三種肺炎支原體檢測法的臨床應用分析.doc

. 畢 業(yè) 論 文題目：三種肺炎支原體檢測法的臨床應用分析姓 名： 學 號： 專 業(yè)： 層 次： 年 級： 完成日期： 指導教師： 三種肺炎支原體檢測法的臨床應用分析摘要目的探討肺炎支原體（MP）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應（PCR）法和血清MP被動凝集法（MP-Ab）等方法在兒童MP感染診斷治療過程中的敏感性方法采用3MP檢測法對362例臨床擬診呼吸道（非細菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，每患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和PCR，同時取血清做MP-Ab檢測，對3種方法的檢測結果與臨床診斷治療病例進行回顧性分析。結果回顧臨床病例診斷MP感染患兒152例。MP快速培養(yǎng)法檢出陽性78例，陽性率為51.3%，病程為（4.52.6）天；PCR法檢測出陽性103例，陽性率為67.8%，病程為（6.23.5）天；MP-Ab法檢測出陽性127例，陽性率83.5%，病程（8.14.5）天。結論3種MP檢測法的敏感性與病程有相關性，臨床醫(yī)生應根據(jù)患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。關鍵詞 肺炎支原體，快速培養(yǎng)法，咽拭子聚合酶鏈反應，血清抗體，配對研究 前言肺炎支原體（mycoplasmapneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急道感染的主要病原體之，臨床上表現(xiàn)為呼吸道感染綜合征，其中約3%10%可發(fā)展為支原體肺炎。但只根據(jù)臨床癥狀很難鑒別由MP或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用3種MP檢測法對362例臨床擬診為呼吸道（非細菌性）感染患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究，通過病例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法，以協(xié)助臨床準確做出診治。1.文獻綜述1.1肺炎支原體的定義小兒肺炎支原體肺炎多見于515歲兒童，嬰幼兒患病常表現(xiàn)為毛細支氣管炎。多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。X線改變明顯，多為單側病變，也可見雙側病變，以下葉為多見，有時病灶呈游走性，少數(shù)呈大葉性陰影；病程23周不等，X線陰影完全消失比癥狀消退更延長23周之久，偶有延長至6周者。1.2肺炎支原體的發(fā)病機制肺炎支原體肺炎（MycoplasmaPneumoniaePneumonia，MPP）的發(fā)病機制仍不十分清楚，目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP直接侵入和免疫學發(fā)病機制等學說，其中免疫調節(jié)異常在MPP的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用1.3肺炎支原體的臨床表現(xiàn)1.3.1多數(shù)為亞急性起病，發(fā)熱無定型，或體溫正常，咳嗽較重，初期為刺激性干咳，常有咽痛，頭痛等癥狀。1.3.2可出現(xiàn)多系統(tǒng)多器官的損害，皮膚粘膜表現(xiàn)為麻疹樣或猩紅熱樣皮疹；偶見非特異性肌痛和游走性關節(jié)痛；也有表現(xiàn)心血管系統(tǒng)、神經系統(tǒng)損害、血尿及溶血性貧血等。1.3.3全身癥狀比胸部體征明顯。體檢肺部體征不明顯，偶有呼吸音稍低及少許干濕羅音者1.4肺炎支原體的臨床診斷病原學診斷肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)法優(yōu)于被動凝集法，在肺炎支原體肺炎感染的早期可提供重要的依據(jù)，可做為臨床診斷MP感染的優(yōu)先試驗8；氣管肺泡灌洗液MP-DNA測定不僅能診斷MP感染,且支氣管肺泡灌洗術可促進呼吸道癥狀的改善及體征恢復，且通過纖維支氣管鏡收集支氣管肺泡灌洗液MP-DNA，痰液MP-DNA及血清MP抗體檢測陽性率沒有差異。CRP的檢測是肺炎病原體的輔助診斷方法，一定程度可區(qū)分細菌性肺炎和支原體肺炎。聚合酶鏈反應(PCR)技術檢測MP具有可靠、特異性高的特點，逐漸成為早期特異診斷的有力武器。1.5肺炎支原體的實驗室檢查急性期MPP患兒血清hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG明顯升高，IgA明顯降低；而恢復期hs-CR、IgG仍然較高，而IgM和IgA均沒有明顯變化，補體C3、C4在恢復期內也沒有明顯變化，因此血清C-反應蛋白、免疫球蛋白和血清補體的監(jiān)測對診斷急性期或恢復期MPP有重要意義。MP-IgM和冷凝集試驗同時檢測可提高小兒支原體肺炎實驗診斷的準確率；支原體肺炎患兒外周血白細胞大多正常占80%，中性粒細胞增高占61%；65.6%患兒C-反應蛋白增高；53.6%患兒血沉增快；58.4%患兒心肌酶譜增高；24.0%患兒肝酶增高；16.8%患兒尿酸增高。5流行病學特點及進展MP肺炎發(fā)生率約為22.3%，912歲感染率最低,36歲最高,1012月是發(fā)病高峰月,小兒支原休肺炎發(fā)病率有所上升,發(fā)病年齡有趨小傾向,秋冬季發(fā)病率高,肺炎支原體只要通過呼吸道進行傳播，尤其發(fā)病率較高的地區(qū)，局部區(qū)域每隔3-5年可發(fā)生一次肺炎支原體感染，每2-6年可發(fā)生一次大范圍的肺炎支原體感染，每次感染的時間都持續(xù)較長，有的感染可持續(xù)一年左右，因此，有關部門一定要采取相應的預防措施，切斷呼吸道飛沫傳播途徑對控制疾病發(fā)生和流行具有重大意義?？刂浦гw感染的發(fā)生和流行。2.材料和方法2.1樣本收集某中心醫(yī)院檢驗科2015年1月1日8月6日在兒科就診住院患兒病例，有呼吸道感染癥狀，已經初診為非細菌性感染的患兒362例作為研究對象，其中男175例，女187例；年齡為2個月12歲，病程為190天。2.2方法具體方法有：（1）用MP快速培養(yǎng)法、PCR法和MP-Ab法等3種MP檢測法對362例研究對象同時進行檢測，記錄結果。（2）通過研究對象病歷回顧統(tǒng)計MP感染的例數(shù)，并按年齡、病程和3種MP檢測法結果進行統(tǒng)計學分析。2.3臨床診斷MP感染的診斷標準按文獻1、臨床癥狀、體征標準，包括回顧性診斷即患兒經紅霉素治療有效，經青霉素、頭孢菌素治療無效者等；以及實驗室檢查3種檢測法至少有一種陽性。病程計算方法：以病歷本記錄為準，即在患兒開始有癥狀或體征時開始計算，到患兒來就診檢測時為止進行計算。2.4MP快速培養(yǎng)法支原體分離鑒別培養(yǎng)液由珠海市浪峰生物技術有限公司提供。清晨患兒未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，嚴格按說明書進行，將咽拭子用無菌生理鹽水處理，接種到預溫的培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)；培養(yǎng)基液體顏色由紫紅色變?yōu)椴菥G色或嫩綠色且清亮，并且在靜置時，瓶底有藍色顆?；蛭镔|沉淀為陽性，5天后培養(yǎng)基顏色不變或無藍色顆?；蛭镔|沉淀為陰性。PCR法：試劑由中山大學達安基因股份有限公司提供。應用PCR法檢測MP-DNA，嚴格按試劑盒說明書進行，以在紫外燈下出現(xiàn)180bp擴增帶結果判為陽性。每次試驗均設陽性、陰性對照（陽性對照為MP質粒，陰性對照為無菌生理鹽水），由專人進行操作，質量控制。MP-Ab法：試劑為日本瑞必歐株式會社MP-Ab檢測試劑SERODIA-MYCO凝集試驗試劑盒，嚴格按試劑盒說明書操作，抽取患兒靜脈血3ml，采用明膠顆粒被動凝集法，用血清檢測，結果以140判斷為陽性。每次試驗均設未致敏明膠顆粒、致敏明膠顆粒和陽性、陰性血清進行測定。2.5統(tǒng)計學方法計量資料用均數(shù)標準差（xs）表示，各年齡組與3種檢測方法結果比較用Spearman檢驗；各年齡組間確診病例的陽性率比較用2檢驗；3種檢測方法陽性結果與病程之間的比較用q檢驗3.結果3.1陽性樣本經過回顧性診斷，在配對研究組362例研究對象中有152例符合MP感染的診斷標準，即有152例確診病例，其中肺炎45例，支氣管炎56例，上呼吸感染49例，支氣管哮喘2例。MP快速培養(yǎng)法檢測出78例陽性，PCR法檢測出103例陽性，MP-Ab法檢測出127例陽性。3.2結果分析 各確診病例的年齡分布，見表1。表1顯示兒童MP感染的年齡以34歲年齡段的病例最多，為46例，陽性率最高，為70.77%，與其余年齡組段比較P0.05。不同病程患兒3種檢測法的檢測結果，見表2，表2顯示MP快速培養(yǎng)法為陽性的患兒病程均值較短為（4.52.6）天，PCR法為陽性的患兒病程均值為（6.23.5）天，MP-Ab法為陽性的患兒病程均值較長為（8.14.5）天。3組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。表1不同年齡組MP感染確診病例和3種檢測方法結果對比分析注：代表與年齡組34歲組段比較結果表2不同病程患兒3種檢測方法陽性結果對比分析注：代表三組之間的兩兩比較4.討論4.1MP 感染的臨床表現(xiàn)常無特異性，臨床的實際工作中，容易與一般病毒性感冒相混淆。在臨床上患兒有下列癥狀：（1）發(fā)熱呈弛張熱或不規(guī)則熱。刺激性咳嗽非膿性痰，偶帶血絲。（2）可有咽痛、頭痛、胸痛，全身癥狀比體征明顯。（3）肺部體征不典型而胸片炎癥顯著，可見云霧狀大片陰影。（4）WBC正?；蛏?。（5）青霉素類、磺胺類抗生素治療無效，改用或一開始用大環(huán)內酯類抗生素有效。（6）實驗室MP檢驗有1項或1項以上陽性具備以上2個條件或以上者可初步診斷為MP感染。多時候，臨床醫(yī)生為了盡快緩解患兒的癥狀，需根據(jù)患兒的癥狀、體征和病史做MP感染的診斷性治療，但應與肺結核相互鑒別。4.2近年來由于診斷技術的提高，MP感染報道日漸增多，一般認為MP感染以年長兒發(fā)病較多，本文表1資料顯示，28歲年齡段是發(fā)病的高峰期2。占同期呼吸免疫科住院患兒的9.3%，比有關文獻報道各年齡組支原體肺炎占肺炎發(fā)病的10%20%低。說明MP感染的發(fā)病年齡有提前，且年齡越小，臨床表現(xiàn)愈不典型。4.3臨床實驗室檢測MP的方法很多，過去所用的冷凝集試驗法診斷MP感染缺乏特異性，敏感性也差，易受病程的影響3。本文采用配對資料研究，對疑為MP感染的患兒進行3種MP檢測法，以探討MP快速培養(yǎng)法、PCR法和MP-Ab法等方法在兒童支原體肺炎診斷治療過程中的敏感性。提示臨床醫(yī)生根據(jù)患兒不同的病程選取不同的檢測方法，以提高實驗室的陽性檢出率。4.4.MP快速培養(yǎng)法是利用MP生長代謝產物使培養(yǎng)基液體中指示劑顏色發(fā)生改變來判斷MP生長；標本中的其他支原體和細菌則因培養(yǎng)基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。該法陽性結果可48h檢出。結果顯示，培養(yǎng)法陽性率為51.3%（78/152），低于另外兩種方法的陽性率?？赡芘c在檢測前患兒已經用了MP敏感藥物有關。表2結果顯示，該法陽性病例病程最短。提示病程時間較短的患兒選擇此方法對檢測的陽性率較高。MP培養(yǎng)是診斷MP的金標準4。4.5.咽拭子PCR法檢測質粒核酸，該法快速、敏感和特異，通過一技術可從患兒痰中檢測MP-DNA。由于此方法相當敏感，易受污染，故實驗室操作時應特別小心。統(tǒng)計結果顯示，該法的陽性率為67.76%（103/152），高于快培法。此法彌補了極微量的和被藥物殺死的MP不能通過快速培養(yǎng)法檢出的病例。表2結果顯示，該法陽性病例，病程為（6.23.5）天。詳細資料顯示，有病程在30天以上的患兒經抗MP治療，該法仍可為陽性，說明MP的生存力相當強，要系統(tǒng)化治療。血清MP-Ab法陽性率是3種檢測方法中最高的，為83.55%（127/152），該法是檢測患兒血清中的MP抗體，而非直截了當檢測MP本身，因而陽性結果并不能確診是MP感染。對患兒狀態(tài)的綜合評估應包括對患者臨床癥狀和試驗結果的嚴謹分析。極低量的抗體可能不被此試驗檢測出來。另外還有些MP感染的患者不產生抗體或只產生少量的抗體，高抗體滴度的樣品要出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。表2結果顯示，該法陽性病例，病程最長，這是由于發(fā)病初期，機體中尚未產生抗體而不能被檢測出，提示發(fā)病時間較長或經過多種藥物治療過的患兒選擇此方法有較高的陽性率。此檢測法結果往往受抗體出現(xiàn)的時相及患兒年齡、機體免疫系統(tǒng)狀況等多方面的影響。5.結論臨床應根據(jù)患兒的不同病程、不同年齡以及用藥情況來選取實驗室的檢測方法，以提高MP的陽性檢測率，以更好地結合臨