16種塑化劑的高效液相色譜分析方法.doc

上海譜寧分析技術(shù)有限公司16種塑化劑的高效液相色譜分析方法塑化劑是鄰苯二甲酸酯類(lèi)化合物，塑化劑超標(biāo)會(huì)損害男性生殖能力、促使女性性早熟、傷害免疫和消化系統(tǒng)，對(duì)人體造成很大的危害。塑化劑進(jìn)入人們的視野最初是2011年的臺(tái)灣“昱伸香料有限公司”的“起云劑”事件，當(dāng)時(shí)他們是在產(chǎn)品中惡意添加了鄰苯二甲酸二-(2-乙基)己酯（DEHP）。自酒鬼酒中檢測(cè)出塑化劑含量超標(biāo)以來(lái)，陸續(xù)出現(xiàn)多個(gè)品牌白酒的塑化劑超標(biāo)，其中包括茅臺(tái)、五糧液等知名品牌，許多品牌塑化劑超標(biāo)甚至高達(dá)200%以上，引起人們對(duì)食品安全的擔(dān)憂和恐慌。對(duì)此次白酒中塑化劑超標(biāo)事件上海譜寧分析技術(shù)有限公司高度關(guān)注，并攜手上海伍豐科學(xué)儀器有限公司開(kāi)發(fā)出檢測(cè)16種常見(jiàn)塑化劑的分析方法。本方法分為兩個(gè)部分：第一部分用于定性分析，可以檢測(cè)在樣品中是否含有16種塑化劑的某些成份，檢出限為1ug/ml，并根據(jù)可能的存在成份選擇第二部分中的定量分析方法；第二部分用于定量分析，定量分析方法具有分離度好、基線平穩(wěn)、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，可滿足定量分析的要求。一.定性分析方法液相色譜儀：LC100 二元高壓梯度系統(tǒng)（上海伍豐科學(xué)儀器有限公司）色譜柱：PntulipsTM BP-C18, 5um, 4.6250mm（上海譜寧分析技術(shù)有限公司）流動(dòng)相：梯度時(shí)間（min）A相：水/乙腈60/40B相：甲醇/乙腈60/400100031000215050453070600100670100681000波 長(zhǎng)：UV, 242 nm溫 度：柱溫30進(jìn)樣量：20ul標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)量16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成濃度為100ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。流動(dòng)相A的配制：準(zhǔn)確量取200ml乙腈和300ml水，混合均勻，超聲脫氣5min。流動(dòng)相B的配制：準(zhǔn)確量取200ml乙腈和300ml甲醇，混合均勻，超聲脫氣5min。按出峰順序：序號(hào)出峰時(shí)間(min)中文名英文名英文縮寫(xiě)111.24鄰苯二甲酸二-(2-甲氧基)乙酯Bis(2-methoxyethyl) phthalateDMEP211.81鄰苯二甲酸二甲酯Dimethyl phthalateDMP318.60鄰苯二甲酸二-(2-乙氧基)乙酯Bis(2-ethoxyethyl) phthalateDEEP419.18鄰苯二甲酸二乙酯Diethyl phthalateDEP533.42鄰苯二甲酸二苯酯Diphenyl phthalate637.59鄰苯二甲酸二異丁酯Diisobutyl phthalateDIBP738.13鄰苯二甲酸丁基芐基酯Benzyl butyl phthalateBBP839.08鄰苯二甲酸二丁酯Dibutyl phthalateDBP939.62鄰苯二甲酸二-(2-丁氧基)乙酯Bis(2-n-butoxyethyl)phthalateDBEP1051.10鄰苯二甲酸二戊酯Dipentyl phthalateDPP1152.02鄰苯二甲酸二環(huán)己酯Dicyclohexyl phthalateDCHP1256.08鄰苯二甲酸二-(4-甲基-2-戊基)酯Bis(4-methyl-2-pentyl)phthalateBMPP1358.34鄰苯二甲酸二己酯Dihexyl phthalateDHXP1464.35鄰苯二甲酸二-(2-乙基)己酯Bis(2-ethylhexyl) phthalateDEHP1565.64鄰苯二甲酸二正辛酯Di-n-octyl phthalateDNOP16鄰苯二甲酸二壬酯Dinonyl phthalateDNP注意事項(xiàng)： 1. 色譜柱的維護(hù)（本方案僅針對(duì)做該樣品時(shí)的維護(hù)）：分析完成后用B相以1.0ml/min沖洗45min。二.定量分析方法上述定性分析方法雖然可以同時(shí)分析16中塑化劑，但白酒中塑化劑的含量相對(duì)濃度并不是很高（國(guó)標(biāo)規(guī)定可允許上限約為0.3mg/kg），雖經(jīng)過(guò)固相萃取后濃度也不會(huì)太大，因此用于定量時(shí)基線漂移可能會(huì)帶來(lái)較大影響，同時(shí)二壬基酯和二辛基酯未能實(shí)現(xiàn)分離。據(jù)此特開(kāi)發(fā)出基線更平穩(wěn)、檢出靈敏度更高、更適合定量的分析方法。本方法開(kāi)發(fā)之初是想要同時(shí)分析所列的16種塑化劑，開(kāi)發(fā)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)兩個(gè)問(wèn)題，一是有四個(gè)組分靠得太近，要同時(shí)確保它們基線分離甚至分離度大于1.0都非常困難，嘗試過(guò)上百個(gè)方案也未能實(shí)現(xiàn)； 二是最后面出來(lái)的兩個(gè)化合物DNOP和DNP在常規(guī)條件下難以分離，因此，不得已放棄同時(shí)分析16種的方案，開(kāi)發(fā)出一個(gè)總的分析方法和兩個(gè)補(bǔ)充方法?？偡椒梢詫?duì)12種塑化劑同時(shí)進(jìn)行定性和定量使用，具有流動(dòng)相配制簡(jiǎn)單、基線平穩(wěn)、方法穩(wěn)定、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，兩個(gè)補(bǔ)充方法是總方法的譜圖中所指出的重疊峰位置有峰出現(xiàn)時(shí)才使用。l 液相方法條件（主定量方法）液相色譜儀：LC100 二元高壓梯度系統(tǒng)（上海伍豐科學(xué)儀器有限公司）色譜柱：PntulipsTM BP-C18, 5um, 4.6250mm（上海譜寧分析技術(shù)有限公司）流動(dòng)相：梯度時(shí)間（min）A相：水B相：100%乙腈06040144258353070450100550100566040波 長(zhǎng)：UV, 242 nm溫 度：柱溫30進(jìn)樣量：10ul標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)量16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成濃度為100ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。譜圖和數(shù)據(jù)（主定量方法）按出峰順序：序號(hào)出峰時(shí)間(min)中文名英文名英文縮寫(xiě)19.97鄰苯二甲酸二-(2-甲氧基)乙酯Bis(2-methoxyethyl) phthalateDMEP210.52鄰苯二甲酸二甲酯Dimethyl phthalateDMP315.79鄰苯二甲酸二-(2-乙氧基)乙酯Bis(2-ethoxyethyl) phthalateDEEP416.59鄰苯二甲酸二乙酯Diethyl phthalateDEP531.62鄰苯二甲酸二苯酯Diphenyl phthalate635.82鄰苯二甲酸二異丁酯Diisobutyl phthalateDIBP736.94鄰苯二甲酸丁基芐基酯Benzyl butyl phthalateBBP837.72鄰苯二甲酸二丁酯Dibutyl phthalateDBP9鄰苯二甲酸二-(2-丁氧基)乙酯Bis(2-n-butoxyethyl)phthalateDBEP1045.62鄰苯二甲酸二戊酯Dipentyl phthalateDPP1146.27鄰苯二甲酸二環(huán)己酯Dicyclohexyl phthalateDCHP1248.26鄰苯二甲酸二-(4-甲基-2-戊基)酯Bis(4-methyl-2-pentyl)phthalateBMPP1349.15鄰苯二甲酸二己酯Dihexyl phthalateDHXP1454.69鄰苯二甲酸二-(2-乙基)己酯Bis(2-ethylhexyl) phthalateDEHP1556.44鄰苯二甲酸二正辛酯Di-n-octyl phthalateDNOP16鄰苯二甲酸二壬酯Dinonyl phthalateDNP注意事項(xiàng)： 1. 色譜柱的維護(hù)（本方案僅針對(duì)做該樣品時(shí)的維護(hù)）：分析完成后用B相以1.0ml/min沖洗45min。l 補(bǔ)充定量方法一（樣品中含有DPP或DCHP時(shí)使用）注：本補(bǔ)充方法與前面的定性方法所用流動(dòng)相相同，梯度相近。液相方法條件：液相色譜儀：LC100 二元高壓梯度系統(tǒng)（上海伍豐科學(xué)儀器有限公司）色譜柱：PntulipsTM BP-C18, 5um, 4.6250mm（上海譜寧分析技術(shù)有限公司）流動(dòng)相：梯度時(shí)間（min）A相：水/乙腈60/40B相：甲醇/乙腈60/400100031000216040454060502080600100670100681000波 長(zhǎng)：UV, 242 nm溫 度：柱溫30進(jìn)樣量：20ul標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)量16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成濃度為100ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。譜圖和數(shù)據(jù)（補(bǔ)充定量方法一）按出峰順序：序號(hào)出峰時(shí)間(min)中文名英文名英文縮寫(xiě)111.24鄰苯二甲酸二-(2-甲氧基)乙酯Bis(2-methoxyethyl) phthalateDMEP211.96鄰苯二甲酸二甲酯Dimethyl phthalateDMP319.57鄰苯二甲酸二-(2-乙氧基)乙酯Bis(2-ethoxyethyl) phthalateDEEP420.26鄰苯二甲酸二乙酯Diethyl phthalateDEP539.97鄰苯二甲酸二苯酯Diphenyl phthalate645.25鄰苯二甲酸二異丁酯Diisobutyl phthalateDIBP745.69鄰苯二甲酸丁基芐基酯Benzyl butyl phthalateBBP846.90鄰苯二甲酸二丁酯Dibutyl phthalateDBP947.78鄰苯二甲酸二-(2-丁氧基)乙酯Bis(2-n-butoxyethyl)phthalateDBEP1055.76鄰苯二甲酸二戊酯Dipentyl phthalateDPP1156.32鄰苯二甲酸二環(huán)己酯Dicyclohexyl phthalateDCHP1258.54鄰苯二甲酸二-(4-甲基-2-戊基)酯Bis(4-methyl-2-pentyl)phthalateBMPP1360.05鄰苯二甲酸二己酯Dihexyl phthalateDHXP1464.79鄰苯二甲酸二-(2-乙基)己酯Bis(2-ethylhexyl) phthalateDEHP1566.01鄰苯二甲酸二正辛酯Di-n-octyl phthalateDNOP16鄰苯二甲酸二壬酯Dinonyl phthalateDNP注意事項(xiàng)： 1. 色譜柱的維護(hù)（本方案僅針對(duì)做該樣品時(shí)的維護(hù)）：分析完成后用B相以1.0ml/min沖洗45min。l 補(bǔ)充定量方法二（樣品中含有DNOP或DNP時(shí)使用）注：本補(bǔ)充方法與前面的主定量方法所用流動(dòng)相相同，但所用色譜柱和梯度不同。液相方法條件：液相色譜儀：LC100 二元高壓梯度系統(tǒng)（上海伍豐科學(xué)儀器有限公司）色譜柱：PntulipsTM BP-C8, 5um, 4.6250mm（上海譜寧分析技術(shù)有限公司）流動(dòng)相：梯度時(shí)間（min）A相：水B相：100%乙腈0604056040102080300100350100366040波 長(zhǎng)：UV, 242 nm溫 度：柱溫30進(jìn)樣量：20ul標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)量16種鄰苯二甲酸酯標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成濃度為100ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。譜圖和數(shù)據(jù)（補(bǔ)充定量方法二）按出峰順序：序號(hào)出峰時(shí)間(min)中文名英文名英文縮寫(xiě)110.66鄰苯二甲酸二-(2-甲氧基)乙酯Bis(2-methoxyethyl) phthalateDMEP210.97鄰苯二甲酸二甲酯Dimethyl phthalateDMP312.76鄰苯二甲酸二-(2-乙氧基)乙酯Bis(2-ethoxyethyl) phthalateDEEP413.05鄰苯二甲酸二乙酯Diethyl phthalateDEP515.63鄰苯二甲酸二苯酯Diphenyl phthalate616.62鄰苯二甲酸二異丁酯Diisobutyl phthalateDIBP717.17鄰苯二甲酸丁基芐基酯Benzyl butyl phthalateBBP8鄰苯二甲酸二丁酯Dibutyl phthalateDBP9鄰苯二甲酸二-(2-丁氧基)乙酯Bis(2-n-butoxyethyl)phthalateDBEP1019.81鄰苯二甲酸二戊酯Dipentyl phthalateDPP1120.30鄰苯二甲酸二環(huán)己酯Dicyclohexyl phthalateDCHP1222.32鄰苯二甲酸二-(4-甲基-2-戊基)酯Bis(4-methyl-2-pentyl)phthalateBMPP1322.87鄰苯二甲酸二己酯Dihexyl phthalateDHXP1429.03鄰苯二甲酸二-(2-乙基)己酯Bi