藥物的鑒別實(shí)驗(yàn).ppt

第二章藥物的鑒別試驗(yàn) identificationtest 一 概述 依據(jù)藥典進(jìn)行的藥物分析主要有三大項(xiàng) 鑒別 檢查和含量測(cè)定藥典所收載的藥物項(xiàng)下的鑒別試驗(yàn)方法 僅適用于貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物 用以證實(shí)是否為其所標(biāo)示的藥物 這些試驗(yàn)方法不能賴以鑒別未知物 一 性狀 反映了藥物特有的物理性質(zhì) 一般包括外觀 嗅 味 溶解度以及物理常數(shù) mp bp 等 二 一般鑒別試驗(yàn) generalidentificationtest 證實(shí)其是某一類藥物 而不能證實(shí)是哪一種藥物 僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物 如為數(shù)種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時(shí) 除另有規(guī)定外 應(yīng)不適用 無機(jī)藥物陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)有機(jī)藥物典型的官能團(tuán)反應(yīng) 三 專屬鑒別試驗(yàn) specificidentificationtest 根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同 選用某些特有的靈敏定性反應(yīng) 來鑒別藥物真?zhèn)蔚?證實(shí)其是某一種藥物 例如 經(jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗(yàn) 證實(shí)某一藥物為鈉鹽 但不能辨認(rèn)是氯化鈉 苯甲酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物 要想最后證實(shí)被鑒別的物質(zhì)到底是哪一種藥物 必須在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上 再進(jìn)行專屬鑒別試驗(yàn) 方可確認(rèn) 二 鑒別反應(yīng)的條件 一 溶液的濃度 二 溶液的酸堿度 三 溶液的溫度 四 共存物質(zhì)干擾 五 反應(yīng)介質(zhì) 六 試驗(yàn)時(shí)間 三 鑒別試驗(yàn)的靈敏度 一 反應(yīng)靈敏度和空白試驗(yàn)1 反應(yīng)靈敏度 sensitivity 最低檢出量 minimumdetectablequantity 又稱檢出限量 以m表示 就是應(yīng)用某一反應(yīng) 在一定的條件下 能夠觀測(cè)出的供試品的最小量 其單位通常用微克 g 表示 最低檢出濃度 minimumdetectableconcentration 以1 G或1 V表示 是應(yīng)用于某一反應(yīng) 在一定條件下 能夠觀測(cè)出供試品的最低濃度 兩者間滿足以下關(guān)系 m v 106 V 2 空白試驗(yàn) blanktest 就是在與供試品鑒別試驗(yàn)完全相同的條件下 除不加供試品外 其它試劑同樣加入進(jìn)行的試驗(yàn) 二 提高靈敏度的方法 1 加入與水不相溶的有機(jī)溶劑 2 改進(jìn)觀測(cè)方法 四 鑒別方法 一 物理鑒別法物理常數(shù)如沸點(diǎn) 熔點(diǎn) 相對(duì)密度 比旋度等均可作為鑒別藥物的依據(jù) 常用于純度較高的原料藥的鑒別 如 可可堿 氨茶堿 磷酸可待因等 測(cè)定熔點(diǎn)是一種簡便 專屬的鑒別方法 對(duì)于某些熔點(diǎn)過高 對(duì)熱不穩(wěn)定 熔點(diǎn)不敏銳的藥物 可通過加入試劑 使藥物與試劑反應(yīng)生成衍生物再測(cè)定熔點(diǎn)的方法預(yù)于測(cè)定 制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)法 1 干法 焰色試驗(yàn) 加熱分解 取鉑絲 用鹽酸濕潤后 蘸取供試品 在無色火焰中燃燒 使火焰顯出特殊的顏色 在適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下 加熱使供試品分解 生成有特殊氣味的氣體 二 化學(xué)鑒別法 2 濕法 呈色或褪色反應(yīng) 沉淀生成反應(yīng) 熒光反應(yīng) 氣體生成反應(yīng) 三氯化鐵呈色反應(yīng) 酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基異羥肟酸鐵反應(yīng) 多為芳酸及其酯類 酰胺類茚三酮呈色反應(yīng) 脂肪氨基重氮化 偶合顯色反應(yīng) 芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng) 常見的呈色反應(yīng) 與重金屬離子的沉淀反應(yīng) 如巴比妥類藥物與銅鹽 鈷鹽 銀鹽生成沉淀的反應(yīng) 與硫氰化鉻銨 雷氏鹽 的沉淀反應(yīng) 多為生物堿及其鹽 具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽 其它沉淀反應(yīng) 常見的呈色反應(yīng)有 藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光 藥物溶液加硫酸使呈酸性后 在可見光下發(fā)射熒光 藥物和溴反應(yīng)后 于可見光下發(fā)射出熒光 藥物和間苯二酚反應(yīng)后 發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后 發(fā)射熒光 常見的熒光發(fā)射形式有以下類型 大多數(shù)的胺 銨 類藥物 酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物 可經(jīng)強(qiáng)堿處理后 加熱 產(chǎn)生氨 胺 氣化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物 可經(jīng)強(qiáng)酸處理后 加熱 發(fā)生硫化氫氣體含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱 可生成紫色碘蒸氣含醋酸酯和乙酰胺類藥物 經(jīng)硫酸水解后 加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味 常有氣體生成的藥物 三 光譜鑒別法 1 紫外光譜鑒別法 核對(duì) max和 min 規(guī)定一定濃度的供試液在 max處的吸收度 規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法 規(guī)定吸收波長和吸收度比值法 經(jīng)化學(xué)處理后 測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性 2 紅外光譜鑒別法 標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法 中國藥典 2005年版 BP 2005年版 對(duì)照品法 USP 29 一種專屬性很強(qiáng) 應(yīng)用較廣 四 色譜鑒別法 1 薄層色譜鑒別法采用對(duì)照品 或標(biāo)準(zhǔn)品 比較法 要求二者的Rf值一致 2 高效液相色譜鑒別法要求供試品和對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間應(yīng)一致含量測(cè)定方法為內(nèi)標(biāo)法 3 氣相色譜鑒別法4 紙色譜鑒別法逐漸被薄層色譜法所取代5 高效毛細(xì)管電泳 五 生物學(xué)方法 對(duì)于某些有特殊生物效應(yīng)的藥物 可根據(jù)藥物的特殊生理活性將藥物通過各種途徑給予微生物 動(dòng)物或動(dòng)物的離體器官 觀察藥理作用以鑒別藥物 多用抗生素及生化藥物的鑒別 1 儀器方法的數(shù)量大大增加 尤其是IR和HPLC 2 制劑廣泛采用IR法鑒別 六 藥物鑒別方法的新動(dòng)向 二 鑒別試驗(yàn)與原理 一 有機(jī)氟化物 取供試品約7mg 照氧瓶燃燒法 附錄VIIC 進(jìn)行有機(jī)破壞 用水20ml與0 01mol L氫氧化鈉溶液6 5ml為吸收液 待燃燒完全后 充分振搖 取吸收液2ml 加茜素氟藍(lán)試液0 5ml 再加12 醋酸鈉的稀醋酸溶液0 2ml 用水稀釋至4ml 加硝酸亞鈰試液0 5ml 即顯藍(lán)紫色 同時(shí)做空白對(duì)照試驗(yàn) 反應(yīng)式見p16 二 有機(jī)酸鹽 1 水楊酸鹽 加三氯化鐵試液1滴 即顯紫色 加稀鹽酸 即析出白色水楊酸沉淀 分離 沉淀在醋酸銨試液中溶解 2 醋酸鹽 加硫酸和乙醇后 加熱 即分解發(fā)生醋酸乙酯的香氣 取供試品的中性溶液 加三氯化鐵試液1滴 溶液呈深紅色 加稀無機(jī)酸 紅色即退去 3 苯甲酸鹽 取供試品的中性溶液 加三氯化鐵試液 即生成赭色沉淀 加稀鹽酸 變?yōu)榘咨恋?取供試品 置干燥試管中 加硫酸后 加熱 不炭化 但析出苯甲酸 在試管內(nèi)壁凝結(jié)成白色升華物 4 枸櫞酸鹽 加稀硫酸數(shù)滴 加熱至沸 加高錳酸鉀試液數(shù)滴振搖 紫色即消失 溶液分成兩份 1份中加硫酸汞試液1滴 另1份中逐滴加入溴試液 均生成白色沉淀 取供試品的中性溶液 置潔凈的試管中 加氨制硝酸銀試液數(shù)滴 置水浴中加熱 銀即游離并附在管的內(nèi)壁成銀鏡 取供試品溶液 加醋酸成酸性后 加硫酸亞鐵試液1滴和過氧化氫試液1滴 待溶液退色后 用氫氧化鈉試液堿化 溶液即顯紫色 5 酒石酸鹽 四 托烷生物堿類 取供試品約10mg 加發(fā)煙硝酸5滴 置水浴上蒸干 得黃色的殘?jiān)?放冷 加乙醇2 3滴濕潤 加固體氫氧化鉀一小顆 即顯深紫色 三 芳香第一胺類 取供試品約50mg 加稀鹽酸1ml 必要時(shí)緩緩煮沸使溶解 放冷 加0 1mol L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴 滴加堿性 萘酚試液數(shù)滴 視供試品不同 生成由橙黃到猩紅色沉淀 五 常見無機(jī)離子的鑒別 1 鈉鹽 焰色反應(yīng) 火焰顯黃色 取供試品的中性溶液 加醋酸氧鈾鋅試液 即生成黃色沉淀 2 鉀鹽 焰色反應(yīng) 焰色反應(yīng)顯紫色 但有少量鈉鹽混存時(shí) 須隔藍(lán)色玻璃透視 取供試品 加熱熾灼 除去可能含有的銨鹽 放冷后 加水溶解 再加0 1 四苯硼鈉溶液與醋酸 即生成白色沉淀 3 鈣鹽 燃燒火焰顯磚紅色 取供試品溶液 1 20 加甲基紅指示液2滴 用氨試液中和 再滴加鹽酸至呈酸性 加草酸銨試液 即生成白色沉淀 分離 沉淀不溶于醋酸 但可溶于鹽酸 白色 焰色反應(yīng) 焰色反應(yīng) 鋇的火焰光譜在可見光區(qū)有533 56 513 488nm幾條主要譜線 其中以533 56nm波長的譜線最強(qiáng) 故鋇鹽的燃燒火焰顯黃綠色 用綠色玻璃透視火焰顯藍(lán)色 取供試品溶液 加稀硫酸 即生成白色沉淀 分離 沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解 4 鋇鹽 白色 Ba2 SO42 BaSO4 5 銨鹽 取供試品 加過量氫氧化鈉試液后 加熱 即分解 發(fā)生氨臭 遇濕潤的紅色石蕊試紙 能使之變藍(lán) 并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色 黑色 取供試品溶液 加堿性碘化汞鉀試液1滴 即生成紅棕色沉淀 紅棕色 六 無機(jī)酸根 1 氯化物1 取供試液品溶液 加硝酸使成酸性后 加硝酸銀試液 即生成白色凝乳狀沉淀 分離 沉淀加氨試液即溶解 再加硝酸 沉淀復(fù)生成 如供試品為生物堿或其他有機(jī)堿的鹽酸鹽 須先加氨試液使成堿性 將析出的沉淀濾過除去 取濾液進(jìn)行試驗(yàn) 2