植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn).doc

實(shí)驗(yàn)一 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)造和功能一、目的要求：掌握如何組建植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，熟悉組培中設(shè)計(jì)的各種儀器設(shè)備和器皿用具。二、儀器與用具超凈工作臺(tái)、空調(diào)機(jī)、蒸餾水發(fā)生器、高壓滅菌鍋、低溫冰箱、普通冰箱、電磁爐、各種電子天平、pH儀器等設(shè)備，以及各種試驗(yàn)器皿和器械用具等。三、方法步驟1.了解組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室守則以及有關(guān)注意事項(xiàng)。2.掌握儀器設(shè)備和器皿用具的名稱(chēng)與用途以及實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)造。3.參觀組培實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)建情況，包括準(zhǔn)備室（化學(xué)實(shí)驗(yàn)室）、緩沖室、無(wú)菌操作室（接種室）和培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)要求，以及內(nèi)部?jī)x器設(shè)備的名稱(chēng)及其作用。四.實(shí)驗(yàn)報(bào)告1.將本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容整理成實(shí)驗(yàn)報(bào)告2.設(shè)計(jì)一個(gè)植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的組建方案。實(shí)驗(yàn)二 MS培養(yǎng)基母液的配制與保存一、目的要求通過(guò)MS培養(yǎng)基母液的配制與保存，掌握配制與保存培養(yǎng)基母液的基本技能。二、材料與用具配制MS培養(yǎng)基所需的藥品（見(jiàn)附表）。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、各類(lèi)天平、燒杯、容量瓶、蒸餾水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCl、母液瓶、標(biāo)簽、冰箱等。三、方法與步驟1.母液的配制(將MS母液配置表畫(huà)在黑板上，舉例講解母液的配制過(guò)程，包括稱(chēng)量、溶解、定容三步，再將班級(jí)分為五個(gè)組進(jìn)行配制)2.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制稱(chēng)量：用微量0.001或0.0001的分析天平或由電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取生長(zhǎng)素（或細(xì)胞分裂素）50mg。溶解：生長(zhǎng)素（如IAA、IBA、NAA、2、4-D）可用少量的0.1mol/LNaOH溶解，細(xì)胞分裂素（如KT、ZT、6-BA）可用0.1mol/L的HCl加熱溶解。定溶：將溶解的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)倒入50ml容量瓶，用水沖洗小燒杯數(shù)次，最后加蒸餾水定容至50ml，配制成濃度為1mg/ml的溶液。3.母液的保存裝瓶：將配好的母液分別倒入瓶中，貼好標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基名稱(chēng)、母液號(hào)、配制倍數(shù)（或濃度）以及配制日期。儲(chǔ)藏：將母液瓶?jī)?chǔ)放在4冰箱內(nèi)備用。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告將本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容整理成實(shí)驗(yàn)報(bào)告（敘述母液配置過(guò)程）。附表 MS培養(yǎng)基母液配制（單位：mg）母液成分規(guī)定量擴(kuò)大倍數(shù)稱(chēng)取量母液體積(ml)配1L培養(yǎng)基吸取量（ml）編號(hào)種類(lèi)1大量元素KNO3NH4NO3MgSO4.7H2OKH2PO4190016503701701010101019000165003700170010001002鈣鹽CaCl233210332010001003微量元素MnSO4.H2OZnSO4.7H2OH3BO3KINaMoO4.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O16.98.66.20.830.250.0250.02510010010010010010010084543031041.512.51.251.25500104鐵鹽Na2-EDTAFeSO4.7H2O37.334.510010018651725500105維生素甘氨酸鹽酸硫胺素(VB1)鹽酸吡哆醇(VB6)煙酸肌醇2.00.10.50.510010010010010010010052525500050010注意：配制前核實(shí)各種化學(xué)成分的含水量實(shí)驗(yàn)三 固體培養(yǎng)基的配制一、目的要求通過(guò)MS固體培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的基本技能。二、材料與用具M(jìn)S培養(yǎng)基母液、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、瓊脂、蔗糖、蒸餾水、移液管、量筒、容量瓶、電磁爐、酸度計(jì)、0.1mol/LNaOH(HCl)、培養(yǎng)瓶、記號(hào)筆等。三、方法與步驟1按母液順序和規(guī)定量，用量筒和移液管提取母液，放入1000ml的容量瓶中，MS1-100ml、MS2-100ml、MS3-10ml、MS4-10ml、MS5-10ml。2.加入植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，加入的種類(lèi)與數(shù)量，視培養(yǎng)物不同而異，有時(shí)也可不加。3.加入蔗糖若干，溶解定容至1000ml，再放入9g瓊脂。4.調(diào)整PH值，經(jīng)酸度計(jì)測(cè)試，用0.1mol/LNaOH（HCl）把培養(yǎng)基PH值調(diào)整至5.8-6.0。5.在電磁爐上加熱溶液，并不斷攪拌，使瓊脂不斷熔化。6.分裝培養(yǎng)基，把配好的培養(yǎng)基分裝到50-150ml的培養(yǎng)瓶中，分裝后立即加蓋封口，用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱(chēng)。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容配制火鶴培養(yǎng)基：MS+NAA0.2 mg/mL +蔗糖30g+瓊脂9g，PH5.8-6.0。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容總結(jié)出固體培養(yǎng)基配制的具體過(guò)程。實(shí)驗(yàn)四 培養(yǎng)基和培養(yǎng)用具的滅菌一、目的要求通過(guò)對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)用具的滅菌，掌握高壓滅菌和干熱滅菌的一般操作技術(shù)。二、材料與用具培養(yǎng)皿、三角瓶、注有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶、裝有蒸餾水的玻璃瓶、牛皮紙、鑷子、剪刀等金屬器械、高壓滅菌器、烘箱等。三、方法與步驟1.高壓滅菌鍋：洗滌包扎裝水（需淹沒(méi)電熱絲）滅菌：把需滅菌的物品放入高壓滅菌鍋內(nèi)，當(dāng)壓力達(dá)120kpa，鍋內(nèi)的溫度為121時(shí)，保持30min。關(guān)掉開(kāi)關(guān)，打開(kāi)放氣閥，讓滅菌鍋?zhàn)匀焕鋮s。儲(chǔ)藏：待滅菌鍋內(nèi)的氣體放盡，把物品從滅菌器中取出，培養(yǎng)基要放置在溫度低于30，沒(méi)有強(qiáng)光照射的專(zhuān)用柜中備用。2.干熱滅菌洗滌滅菌：把洗滌干凈的玻璃器皿放到烘箱中，在150溫度下，干熱滅菌1h或120溫度下2h滅菌完畢，待冷卻后取出。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告高壓滅菌前后應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？實(shí)驗(yàn)五 無(wú)菌操作技術(shù)一、目的要求通過(guò)在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行無(wú)菌操作訓(xùn)練，初步掌握組織培養(yǎng)的無(wú)菌操作技術(shù)。二、材料與用具超凈工作臺(tái)、70%的酒精、95%的酒精、盛有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶、接種器械（解剖刀、剪刀、鑷子等）、酒精等、培養(yǎng)材料（根、莖、葉或種子等）、0.1%的升汞或“84”滅菌液、無(wú)菌水等。三、方法步驟1.用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過(guò)的專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)服、帽子與鞋子，進(jìn)入接種室。2.打開(kāi)超凈工作臺(tái)和無(wú)菌操作室的紫外燈，照射20min。3.操作前10min使超凈工作臺(tái)處于工作狀態(tài)，讓過(guò)濾室空氣吹拂工作臺(tái)面和四周的臺(tái)壁。4.照射20min后，關(guān)閉紫外燈。5.用70%的酒精擦拭工作臺(tái)和雙手。6.用蘸有70%酒精的紗布擦拭裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿，放入工作臺(tái)。7.用解剖刀、剪刀、鑷子等器械浸泡在95%酒精中，在火焰上滅菌后，放在器械架上。8.把培養(yǎng)材料放進(jìn)70%的酒精中浸泡30s,再用0.1%的升汞（氯化汞，HgCl2）中浸泡10min,或在“84”滅菌液（經(jīng)無(wú)菌水1：1的稀釋?zhuān)┲薪?0-15min,浸泡時(shí)可進(jìn)行攪動(dòng)，使植物材料與滅菌劑有良好的接觸，然后用無(wú)菌水沖洗4-5次。9.用火焰燒瓶口，轉(zhuǎn)動(dòng)瓶口使瓶口各部分都燒到，打開(kāi)瓶口。10.取下接種器械，在火焰上滅菌。11.將滅菌后的培養(yǎng)材料在無(wú)菌的培養(yǎng)皿中切割成11cm大小，然后放入培養(yǎng)瓶，蓋上瓶口。操作期間應(yīng)經(jīng)常用70%酒精擦拭工作臺(tái)和雙手；接種器械應(yīng)反復(fù)在95%的酒精中浸泡和在火焰上滅菌。12.接種結(jié)束后，清理和關(guān)閉超凈工作臺(tái)。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1.將本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容整理成實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2.接種一周后，觀察接種材料的污染情況，并分析污染原因。實(shí)驗(yàn)六 火鶴的增殖培養(yǎng)一、目的要求通過(guò)學(xué)習(xí)火鶴的組織培養(yǎng)的基本方法和步驟，熟練掌握組織培養(yǎng)的無(wú)菌操作技術(shù)。二、材料與用具1.材料：火鶴試管無(wú)菌苗2.儀器：超凈工作臺(tái)、解剖刀、長(zhǎng)把鑷子、無(wú)菌培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等3.培養(yǎng)基：MS+NAA0.2mg/mL+蔗糖30g+瓊脂9g PH：5.8-6.0三、方法步驟1.選取生長(zhǎng)健壯，長(zhǎng)約5cm以上的火鶴試管苗。2.在超凈工作臺(tái)上用蘸有70%的酒精擦拭雙手和工作臺(tái)以及裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶。3.在酒精燈火焰下燒培養(yǎng)瓶瓶口，轉(zhuǎn)動(dòng)瓶口使瓶口各部分都燒到。4.打開(kāi)長(zhǎng)有火鶴的培養(yǎng)瓶瓶蓋，用長(zhǎng)把鑷子取出火鶴試管苗，放入滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿中。5.用手術(shù)刀將火鶴幼苗切成1.5cm長(zhǎng)的小段，每段帶有1-2片幼葉。6.蓋好瓶蓋，注明品種及接種日期，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。7.定期觀察植株的生長(zhǎng)、分化情況。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告通過(guò)火鶴莖段培養(yǎng)的基本方法和步驟，制定出杜鵑的微扦插繁殖方案。實(shí)驗(yàn)七 杜鵑莖段的微扦插繁殖一、目的要求通過(guò)學(xué)習(xí)杜鵑莖段培養(yǎng)的基本方法和步驟，學(xué)會(huì)和掌握試管微扦插繁殖的基本技術(shù)。二、材料與用具杜鵑試管無(wú)菌苗、超凈工作臺(tái)、解剖刀、長(zhǎng)把鑷子、無(wú)菌培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等培養(yǎng)基：DJ+NAA0.05mg/mL+ZT0.5 mg/Ml+蔗糖30g+瓊脂9g PH：5.0三、方法步驟1.選取生長(zhǎng)健壯，長(zhǎng)約5cm以上的杜鵑試管苗。2.在超凈工作臺(tái)上用蘸有70%的酒精擦拭雙手和工作臺(tái)以及裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶。3.在酒精燈火焰下燒培養(yǎng)瓶瓶口，轉(zhuǎn)動(dòng)瓶口使瓶口各部分都燒到。4.打開(kāi)長(zhǎng)有杜鵑的培養(yǎng)瓶瓶蓋，用長(zhǎng)把鑷子取出杜鵑試管苗，放入滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿中。5.用手術(shù)刀將杜鵑幼苗切成1.5cm長(zhǎng)的小段，每段帶有1-2片幼葉。6.將切好的莖段插入培養(yǎng)基中，保持莖段高度一致。7.蓋好瓶蓋，注明品種及接種日期，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。8.定期觀察植株的生長(zhǎng)、分化情況。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告將本次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容整理成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，并觀察記錄杜鵑的生長(zhǎng)分化情況。實(shí)驗(yàn)八 蝴蝶蘭原球莖的增殖培養(yǎng)一、目的要求通過(guò)對(duì)蝴蝶蘭原球莖增殖的繼代培養(yǎng)的操作，掌握蝴蝶蘭原球莖增殖的基本技術(shù)和基本方法。二、材料與用具1.材料：培養(yǎng)瓶中蝴蝶蘭原球莖。2.儀器：超凈工作臺(tái)、無(wú)菌培養(yǎng)皿、長(zhǎng)把鑷子、解剖刀等。3.培養(yǎng)基： 1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA2.0mg/L+蔗糖20g+瓊脂9g PH:5.8 KC+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g+瓊脂9g PH:5.8三、方法步驟在超凈工作臺(tái)中，用長(zhǎng)把鑷子將蝴蝶蘭的原球莖取出，放在無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用解剖刀將其切成0.5cm左右的小塊，移入上述兩種培養(yǎng)基中，每瓶放入20塊左右，蓋好瓶塞，注明品種名稱(chēng)、接種日期、接種人，最后放入培養(yǎng)室中培養(yǎng)，定期觀察其生長(zhǎng)及增值情況。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告 敘述上述兩種培養(yǎng)基的制作過(guò)程及原球莖繼代增值的操作要點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)九 蝴蝶蘭的定植與移栽一、目的要求熟練掌握蝴蝶蘭定植與移栽的操作步驟。二、材料與用具蝴蝶蘭組培苗、長(zhǎng)把鑷子、解剖刀、培養(yǎng)基、草炭、塑料小缽等。三、方法與步驟 1.定植：在超凈無(wú)菌的條件下，用鑷子將蝴蝶蘭的組培苗取出，組培苗大小不一，將打的組培