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文檔簡介

Imagej對SDS PAGE灰度分析定量蛋白濃度 朱偉偉20180319 每個泳道對應(yīng)的數(shù)值為點(diǎn)樣體積 l 制備所有樣品的時候蛋白溶液和2 loadingbuffer的體積比均為1 1 SDS PAGE圖像 可以用相機(jī)或光密度掃描儀成像 作為標(biāo)準(zhǔn)樣品的蛋白最好和待測蛋白的條帶大小一致 用Bradford的方法測得標(biāo)樣的濃度 然后把標(biāo)樣的濃度調(diào)成300 g ml 注意事項(xiàng) 一般用SDS PAGE灰度分析的方法檢測蛋白濃度 其上樣量不宜過大 條帶太黑容易過曝 導(dǎo)致定量結(jié)果不準(zhǔn)確 檢測結(jié)果會小于實(shí)際的蛋白濃度 1 打開imagej把SDS PAGE圖片拖到紅色箭頭所指區(qū)域 2 單擊image Type 8 bit轉(zhuǎn)換成灰度圖像 3 單擊process subtractbackground會出現(xiàn)左圖的界面 勾選lightbackground和preview 選擇合適的像素值 在此一30 0pixels為例 單擊OK 4 方框工具選擇并畫出第一條永道 單擊analyze gels selectfirstlane也可以用快捷鍵 Ctrl 1 4 方框工具選擇并畫出第一條永道 單擊analyze gels selectfirstlane也可以用快捷鍵 Ctrl 1 會出現(xiàn)左圖界面 點(diǎn)擊OK 并在圖上畫出第一條條帶 5 單擊analyze setmeasurements出現(xiàn)下圖界面 勾選Area和meangrayvalue單擊OK 7 選好條帶以后按住Ctrl m出現(xiàn)一個文本 如上圖所示 然后把鼠標(biāo)移到黃色方框的中心 按住鼠標(biāo) 把方框拖到下一個條帶 然后按Ctrl m 文本中出現(xiàn)第二條帶的面積和平均灰度值 以此類推 8 新建一個Excel 把文本框內(nèi)的數(shù)據(jù)復(fù)制到表格 計(jì)算絕對灰度 255 灰度平均值 同時標(biāo)出點(diǎn)樣體積 理論上 標(biāo)樣的絕對灰度值的比值和點(diǎn)樣

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