高效液相色譜實驗遇到的問題.doc

/knowledge/d311729.html高效液相色譜基線的各種問題 L、基線漂移原因 解決方法 1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。） 1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖2、流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。）2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。 3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸） 4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。 5、流動相配比不當或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。 6、柱平衡慢，特別是流動相發(fā)生變化時6、用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑 8、樣品中有強保留的物質(zhì)（高K值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。8、使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。 9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當檢測器動力學范圍發(fā)生變化時，使用新的流動相。 10、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。10、將波長調(diào)整至最大吸收波長處 M、基線噪音（規(guī)則的）原因 解決方法 1、在流動相、檢測器或泵中有空氣1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。 2、漏液 圖 2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。 3、流動相混合不完全 3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑 4、溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）4、減少差異或加上熱交換器 5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 6、泵振動 6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 N、基線噪音（不規(guī)則的）原因 解決方法 1、漏液 圖 1、見第三部分。檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。 2、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動相的組成。 3、流動相各溶劑不相溶 3、選擇互溶的流動相 4、檢測器/記錄儀電子元件的問題4、斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。 5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 5、用強極性溶液清洗系統(tǒng) 6、檢測器內(nèi)有氣泡 6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器 7、流通池污染（即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池 8、檢測器燈能量不足 8、更換燈 9、色譜柱填料流失或阻塞 9、更換色譜柱 10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置 O、寬峰原因 解決方法 1、流動相組成變化 1、重新制備新的流動相 2、流動相流速太低 2、調(diào)節(jié)流速 3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間）3、見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。 4、檢測器設(shè)定不正確 4、調(diào)整設(shè)定 5、柱外效應(yīng)影響a、柱子過載b、檢測器對反應(yīng)時間或池體積響應(yīng)過大c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時間太長5、 a、 小體積進樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品b、減少響應(yīng)時間或使用更小的流通池c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路d、減少響應(yīng)時間 6、緩沖液濃度太低 6、增加濃度 7、保護柱污染或失效 7、更換保護柱 8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。 9、柱入口塌陷 9、打開柱入口，填補塌陷或更換柱子 10、呈現(xiàn)兩個或多個未被完全分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果 11、柱溫過低 11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75 12、檢測器時間常數(shù)太大 12、使用較小的時間常數(shù) P、分離度降低原因 解決方法 1、流動相污染或變質(zhì)（引起保留時間變化）1、重新配置流動相 2、保護柱或分析柱阻塞圖 2、去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。 Q、所有的峰面積都太小原因 解決方法 1、檢測器衰減設(shè)定過高 1、減少衰減的設(shè)定 2、檢測器時間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時間常數(shù) 3、進樣量太少 3、增大進樣量 4、記錄儀連接不當 4、使用正確的連接 R、所有的峰面積都太大原因 解決方法 1、檢測器衰減設(shè)定過低 1、采取較大的衰減 2、進樣過多 2、減少進樣量 3、記錄儀連接不正確 3、正確連接記錄儀 HPLC日常維護辦法之四：進樣閥的問題 以下問題在使用進樣閥過程中有可能發(fā)生。A、手動進樣閥，轉(zhuǎn)動不靈原因 解決方法 1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封 2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度 B、手動進樣閥，載樣困難原因 解決方法 1、進樣閥安裝不當 1、重新安裝 2、定量環(huán)阻塞 2、清洗或更換定量環(huán) 3、進樣器污染 3、清洗或更換進樣器 4、管路阻塞 4、清洗或更換管路 C、自動進樣閥，不能轉(zhuǎn)動原因 解決方法 1、無壓力（或電源） 1、提供恰當?shù)膲毫Γ娫矗?2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度 3、進樣閥安裝不當 3、重新安裝 D、自動進樣閥，其它問題原因 解決方法 1、阻塞 1、清洗或更換阻塞部件 2、機械故障 2、見隨機維修手冊 3、控制器故障 3、維修或更換控制器液相色譜基線有很多的毛刺，但總體上還是水平的，問這是什么原因?qū)е碌模繎屹p分：5 - 解決時間：2006-7-20 21:14 液相色譜基線有很多的毛刺，但總體上還是水平的，問這是什么原因?qū)е碌模?問題補充：我所用的是液相色譜，配紫外檢測器，色譜柱是新的，儀器也沒有振動。毛刺是因信號頻率的波動而引起，是比色譜峰的有效值頻率更高的基線擾動。毛刺的存在并不影響色譜峰的分辨，但對檢測限有一定影響。規(guī)則的毛刺還算是正常，你把基線放寬，就相當于靈敏度變高。先給儀器充分的穩(wěn)定時間再看看。如果真的是色譜系統(tǒng)出了問題，一般是這幾個方面的（不管是氣相還是液相都有用）：1.氫氣，空氣，載氣純度不高會影響。2.玻璃襯管是否臟3.色譜柱是否臟，處理一下或換一個新的試一試4.檢測器清洗一下，可能有未燃燒完的雜質(zhì)5.是否漏氣6.進樣口是否該換一個墊子7.儀器是否產(chǎn)生較大振動8.信號接收器是否已懷或者接觸不良甚至還有過因為工作站出問題導致的毛刺小弟初次使用液相色譜，基線波動非常厲害怎么回事小弟科室一臺電化學液相色譜閑置兩年沒人用過，今天小弟初次使用時調(diào)節(jié)流速為0.5 mLmin 工作電壓設(shè)為+ 700 mV ，濾波0。1 Hz ，增益5nA發(fā)現(xiàn)基線抖得很厲害，很有規(guī)律，就是每當泵“篤”一聲時就出現(xiàn)一個波峰，大概0.8nA高，也不出現(xiàn)基線向上向下漂移，很影響測量，請問是怎么回事，謝謝 / / / _/ _/ _/ _可能是色譜柱進了氣泡，又或者色譜柱還未被流動相跑平衡 （如果是柱子進氣泡的話，會出現(xiàn)一組很有規(guī)律的峰）其實基線的波動是難免的，只要波動在允許的范圍之內(nèi)的話，就不會影響測量你問題說的很詳細，但是你還是沒說：你的柱子有沒有恒溫箱。首先我懷疑柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。） 解決方法：控制好柱子和流動相的溫度。其次，我懷疑是流動相，流動相有氣泡。流動相條件變化引起的基線波動大于溫度導致的波動。解決方法：使用HPLC級的溶劑流動相在使用前進行脫氣，有條件可以在線脫氣。如果你的泵壓也波動的話，檢查系統(tǒng)是否漏液，如果不漏液，就基本上是確定是有氣泡了。其他原因 解決方法1、在流動相、檢測器或泵中有空氣 1、流動相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣