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/knowledge/d311729.html高效液相色譜基線的各種問(wèn)題 L、基線漂移原因 解決方法 1、柱溫波動(dòng)。(即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。) 1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測(cè)器之前使用熱交換器圖2、流動(dòng)相不均勻。(流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。)2、使用HPLC級(jí)的溶劑,高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣,使用中使用氦氣。 3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸) 4、檢測(cè)器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線)4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。 5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。 6、柱平衡慢,特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,更改流動(dòng)相時(shí),在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑 8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。8、使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。 9、使用循環(huán)溶劑,但檢測(cè)器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí),使用新的流動(dòng)相。 10、檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。10、將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處 M、基線噪音(規(guī)則的)原因 解決方法 1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。 2、漏液 圖 2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。 3、流動(dòng)相混合不完全 3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑 4、溫度影響(柱溫過(guò)高,檢測(cè)器未加熱)4、減少差異或加上熱交換器 5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀,檢查干擾是否來(lái)自于外部,加以更正。 6、泵振動(dòng) 6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 N、基線噪音(不規(guī)則的)原因 解決方法 1、漏液 圖 1、見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封。檢查流通池是否漏液。 2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動(dòng)相的組成。 3、流動(dòng)相各溶劑不相溶 3、選擇互溶的流動(dòng)相 4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問(wèn)題4、斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源,檢查并更正。 5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng) 6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡 6、清洗檢測(cè)器,在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器 7、流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。)7、用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池 8、檢測(cè)器燈能量不足 8、更換燈 9、色譜柱填料流失或阻塞 9、更換色譜柱 10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),建議不使用泵的混合裝置 O、寬峰原因 解決方法 1、流動(dòng)相組成變化 1、重新制備新的流動(dòng)相 2、流動(dòng)相流速太低 2、調(diào)節(jié)流速 3、漏液(特別是在柱子和檢測(cè)器之間)3、見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。 4、檢測(cè)器設(shè)定不正確 4、調(diào)整設(shè)定 5、柱外效應(yīng)影響a、柱子過(guò)載b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過(guò)大c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)5、 a、 小體積進(jìn)樣(例如:10ul而不是100ul)以1:10或1:100的比例稀釋樣品b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路d、減少響應(yīng)時(shí)間 6、緩沖液濃度太低 6、增加濃度 7、保護(hù)柱污染或失效 7、更換保護(hù)柱 8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。 9、柱入口塌陷 9、打開柱入口,填補(bǔ)塌陷或更換柱子 10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果 11、柱溫過(guò)低 11、提高柱溫。除非特殊情況,溫度不宜超過(guò)75 12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大 12、使用較小的時(shí)間常數(shù) P、分離度降低原因 解決方法 1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化)1、重新配置流動(dòng)相 2、保護(hù)柱或分析柱阻塞圖 2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖。如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果?wèn)題仍然存在,進(jìn)口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。 Q、所有的峰面積都太小原因 解決方法 1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)高 1、減少衰減的設(shè)定 2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù) 3、進(jìn)樣量太少 3、增大進(jìn)樣量 4、記錄儀連接不當(dāng) 4、使用正確的連接 R、所有的峰面積都太大原因 解決方法 1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)低 1、采取較大的衰減 2、進(jìn)樣過(guò)多 2、減少進(jìn)樣量 3、記錄儀連接不正確 3、正確連接記錄儀 HPLC日常維護(hù)辦法之四:進(jìn)樣閥的問(wèn)題 以下問(wèn)題在使用進(jìn)樣閥過(guò)程中有可能發(fā)生。A、手動(dòng)進(jìn)樣閥,轉(zhuǎn)動(dòng)不靈原因 解決方法 1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封 2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度 B、手動(dòng)進(jìn)樣閥,載樣困難原因 解決方法 1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng) 1、重新安裝 2、定量環(huán)阻塞 2、清洗或更換定量環(huán) 3、進(jìn)樣器污染 3、清洗或更換進(jìn)樣器 4、管路阻塞 4、清洗或更換管路 C、自動(dòng)進(jìn)樣閥,不能轉(zhuǎn)動(dòng)原因 解決方法 1、無(wú)壓力(或電源) 1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗?2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度 3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng) 3、重新安裝 D、自動(dòng)進(jìn)樣閥,其它問(wèn)題原因 解決方法 1、阻塞 1、清洗或更換阻塞部件 2、機(jī)械故障 2、見隨機(jī)維修手冊(cè) 3、控制器故障 3、維修或更換控制器液相色譜基線有很多的毛刺,但總體上還是水平的,問(wèn)這是什么原因?qū)е碌??懸賞分:5 - 解決時(shí)間:2006-7-20 21:14 液相色譜基線有很多的毛刺,但總體上還是水平的,問(wèn)這是什么原因?qū)е碌模?問(wèn)題補(bǔ)充:我所用的是液相色譜,配紫外檢測(cè)器,色譜柱是新的,儀器也沒有振動(dòng)。毛刺是因信號(hào)頻率的波動(dòng)而引起,是比色譜峰的有效值頻率更高的基線擾動(dòng)。毛刺的存在并不影響色譜峰的分辨,但對(duì)檢測(cè)限有一定影響。規(guī)則的毛刺還算是正常,你把基線放寬,就相當(dāng)于靈敏度變高。先給儀器充分的穩(wěn)定時(shí)間再看看。如果真的是色譜系統(tǒng)出了問(wèn)題,一般是這幾個(gè)方面的(不管是氣相還是液相都有用):1.氫氣,空氣,載氣純度不高會(huì)影響。2.玻璃襯管是否臟3.色譜柱是否臟,處理一下或換一個(gè)新的試一試4.檢測(cè)器清洗一下,可能有未燃燒完的雜質(zhì)5.是否漏氣6.進(jìn)樣口是否該換一個(gè)墊子7.儀器是否產(chǎn)生較大振動(dòng)8.信號(hào)接收器是否已懷或者接觸不良甚至還有過(guò)因?yàn)楣ぷ髡境鰡?wèn)題導(dǎo)致的毛刺小弟初次使用液相色譜,基線波動(dòng)非常厲害怎么回事小弟科室一臺(tái)電化學(xué)液相色譜閑置兩年沒人用過(guò),今天小弟初次使用時(shí)調(diào)節(jié)流速為0.5 mLmin 工作電壓設(shè)為+ 700 mV ,濾波0。1 Hz ,增益5nA發(fā)現(xiàn)基線抖得很厲害,很有規(guī)律,就是每當(dāng)泵“篤”一聲時(shí)就出現(xiàn)一個(gè)波峰,大概0.8nA高,也不出現(xiàn)基線向上向下漂移,很影響測(cè)量,請(qǐng)問(wèn)是怎么回事,謝謝 / / / _/ _/ _/ _可能是色譜柱進(jìn)了氣泡,又或者色譜柱還未被流動(dòng)相跑平衡 (如果是柱子進(jìn)氣泡的話,會(huì)出現(xiàn)一組很有規(guī)律的峰)其實(shí)基線的波動(dòng)是難免的,只要波動(dòng)在允許的范圍之內(nèi)的話,就不會(huì)影響測(cè)量你問(wèn)題說(shuō)的很詳細(xì),但是你還是沒說(shuō):你的柱子有沒有恒溫箱。首先我懷疑柱溫波動(dòng)。(即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。) 解決方法:控制好柱子和流動(dòng)相的溫度。其次,我懷疑是流動(dòng)相,流動(dòng)相有氣泡。流動(dòng)相條件變化引起的基線波動(dòng)大于溫度導(dǎo)致的波動(dòng)。解決方法:使用HPLC級(jí)的溶劑流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣,有條件可以在線脫氣。如果你的泵壓也波動(dòng)的話,檢查系統(tǒng)是否漏液,如果不漏液,就基本上是確定是有氣泡了。其他原因 解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣 1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣

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