醫(yī)生晉升所需優(yōu)秀論文-臨床研究 (89).doc

P16、 Ki67在宮頸病變中的表達及意義作者：王佩飛 陳建武 黃巨丹 陳良英 【關鍵詞】 P16 Ki67 宮頸病變 表達宮頸癌是嚴重威脅婦女健康的惡性腫瘤，占婦女惡性腫瘤的首位，其發(fā)病率有逐年上升和發(fā)病年輕化的趨勢，對宮頸癌的早期診斷、早期治療，尤其在癌前病變人群中發(fā)現癌變的高危個體，開展針對性較強的重點預防，降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率，具有重要意義。本次研究采用免疫組化方法檢測P16基因、Ki67抗原在宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia ,CIN）和宮頸鱗癌組織中的表達情況，探討與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關系。報道如下。 1資料與方法 1.1一般資料收集樂清市人民醫(yī)院2004年6月至2008年10月間宮頸活檢、宮頸Leep術及子宮全切標本100例，患者年齡2865歲，平均年齡(42.123.12)歲。其中CIN級患者70例，年齡2860歲，平均年齡（42.203.61）歲；鱗癌30例，年齡3065歲，平均年齡（41.933.08）歲；20例患者正常宮頸黏膜來自子宮平滑肌瘤的手術切除標本，年齡3270歲，平均年齡（42.603.50）歲。三組的年齡差異均無統(tǒng)計學意義（P均0.05）。 1.2方法全部組織經10中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4um厚連續(xù)切片，免疫組化染色采用EnVision二步法，DAB顯色，以PBS緩沖液（0.01mol/L，pH7.4）代替第一抗體作陰性對照，用已知陽性組織切片作陽性對照。所用單克隆抗體P16、Ki67、EnVision試劑盒及DAB顯色劑均由Dako公司生產。操作按EnVision試劑盒說明進行。 1.3結果判定根據Dako公司產品說明，P16陽性為胞核和/或胞漿著色，無棕黃色顆粒者為（-）；棕黃色細顆粒為（+）；棕黃色粗顆粒為(+)；棕褐色粗顆粒為（+）。Ki67陽性為胞核著色，陽性細胞僅位于基底層及副基底層或陽性細胞數5者為（-）；陽性細胞數625者為（+）；2650者為（+）；50者為（+）1。本次研究以陽性強度在（+）以上者列為陽性表達。 1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件。計量資料以均數標準差（）表示。計數資料采用卡方檢驗；相關關系的分析采用Pearson積差相關分析法。設P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 2結果 2.1P16、Ki67在宮頸各組病變組織中的表達比較結果見表1 由表1可見，鱗癌組和CIN組的P16、Ki67陽性率與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（2分別=45.97、46.40、45.97、51.73，P均0.05）；CIN、CIN組的P16、Ki67陽性率與CIN組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（2分別=12.50、10.29、9.52、7.78，P均0.05）。 2.2宮頸CIN組與鱗癌組中P16、Ki67表達的相關性見表2 由表2可知，經Pearson積差相關分析法分析，P16、Ki67在宮頸CIN、CIN、CIN及宮頸鱗癌組中表達呈正相關（r0.51，P0.05） 3討論 目前認為，宮頸癌尤其是鱗癌的發(fā)生是一個從異型增生到原位癌，最后發(fā)展為浸潤性癌的漸進過程。在此過程中，多個癌基因的激活和抑癌基因的失活起著重要作用。 P16基因是人們發(fā)現的第一個直接作用于細胞周期、抑制細胞分裂的基因，位于人類染色體9p21區(qū)，由三個外顯子和兩個內含子構成，長約8.5kb2，是從細胞周期素依賴性激酶4（cyclindepedent kinase,CDK4）結合相互作用的蛋白質的研究中被發(fā)現和分離出來的。若其編碼基因因甲基化、缺失等原因使細胞內P16蛋白減少，會引起細胞周期調節(jié)紊亂，使細胞無限制增生，甚至癌變，因此，P16被認為是一個抑癌基因。但進一步研究卻發(fā)現，宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展并不涉及P16基因甲基化或缺失，在57的宮頸癌病例中存在P16基因的高表達，且會隨著宮頸癌病情的發(fā)生發(fā)展而呈現逐漸升高的趨勢3。本次研究結果顯示，在正常宮頸組織中P16蛋白表達率極低，而在CIN組及鱗癌組中表達率明顯增高（P0.05），且隨著病變組織學分級的增加，P16在宮頸CIN、組陽性表達率呈升高趨勢（P0.05），提示P16的高表達與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關系。同時還發(fā)現，P16的表達有明顯的分層現象，CIN陽性細胞主要局限于鱗狀上皮下1/3層，而CIN、CIN則超過上皮層的下2/3或達全層，據此可以對CIN病變進行更客觀準確的分級，有較好的臨床應用價值。因此，P16被認為是宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的具有敏感性和特異性的標志物，可作為宮頸病理和宮頸細胞學診斷的補充檢查4，并有助于對CIN病人的轉歸及宮頸癌病人預后的判斷5。 Ki67抗原是針對處于增殖周期的人類細胞核抗原，因其半衰期短，檢測結果明顯優(yōu)于半衰期長的增殖細胞核抗原，被視為較可靠且全面反映細胞群體增殖活性的指標6。正常宮頸上皮Ki67陽性細胞集中在基底層或副基底層，隨著增生的不成熟鱗狀上皮的增多，Ki67陽性細胞數量也明顯增多。因此，判定宮頸病變除了觀察Ki67表達強度外，最重要的是觀察其出現的部位，如CIN時，Ki67陽性細胞局限在上皮層下1/3，而CIN則大量的上皮表層細胞出現Ki67陽性。本次研究用Ki67表達來進一步驗證宮頸從正常黏膜至CIN至鱗癌這一發(fā)展演進過程中的變化，結果顯示：Ki67在CIN組和鱗癌組中的表達率顯著高于正常宮頸組織（P0.05），且隨著病變嚴重程度的增加而表達率增高。而且，Ki67的陽性表達及其分布層次與CIN分級密切相關，表明宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與細胞增殖有關，且對鑒別良惡性疾病及預測良性病變是否癌變有參考價值，有利于選擇惡性腫瘤的早期治療方法和療效的評估。 本次研究經相關分析法分析顯示，P16、Ki67陽性表達率在宮頸CIN組、鱗癌組中具有顯著正相關性（P0.05），結果與文獻報導一致7，提示宮頸腫瘤的發(fā)生是一個多基因突變的結果，并提示P16、Ki67在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用，聯合檢測P16基因和Ki67抗原在宮頸組織中的陽性表達，能協(xié)助診斷宮頸上皮內病變、宮頸鱗癌，并可作為CIN分級診斷的輔助方法，有較好的臨床應用價值。晉升網（）致力于成為醫(yī)務工作者晉升職稱心靈導師；是目前國內收錄醫(yī)學期刊、醫(yī)學雜志最多最權威的醫(yī)學學術平臺；提供免費醫(yī)學期刊在線閱讀；網羅和甄選海量優(yōu)秀醫(yī)學論文檢索，獨立研發(fā)醫(yī)學在線資源分享庫和醫(yī)學在線模擬考試庫；整合刊類、標題、關鍵詞檢索及全文檢索，并獨家研發(fā)刊社管理和刊社加盟系統(tǒng)、在線投稿、在線查稿、在線閱讀、遠程審稿、在線下載等系統(tǒng)；聚刊社力量，建服務平臺，讓晉升網通過“專業(yè)”走入每一個醫(yī)務人員的身邊是我們不懈的追求目標；【參考文獻】 史健, 鄭軍生, 尹方, 等. 宮頸上皮內瘤變P16、P53、Ki67 的表達與高危型HPV感染及其臨床意義J. 南方醫(yī)科大學學報, 2007, 27（4）:515517.2 熊光武. 抑癌基因P16與腫瘤基因治療J. 實用婦產科雜志, 2002, 18（4）:210211.3 Klaes R, Friedrich T, Spitkovsky D, et al. Overexpression of P16(INK4A) as a specific marker for dysplastic and neopla-stic epithelial cells of the cervix uteriJ. Int J Cancer, 2001, 92(2):276284.4 黃惠英, 錢德英, 岑堅敏. 免疫組化P16蛋白在不同級別宮頸病變中表達差異的研究J.現代醫(yī)院，2008,8(3):1415.5 鄧飛, 胡新榮. P16與宮頸癌J. 現代腫瘤醫(yī)學, 2006, 14（4):500502.6 Salvesen HB, Iversen OE, Akslen LA. Prognostic significance of angiogenesis and Ki67, P53,and P21 expression a popula-rtion based endometrial carcinoma study