綜合實(shí)驗(yàn)水中大腸菌群的測(cè)定ppt課件.ppt

水中大腸菌群的測(cè)定 小組成員 秦艷鄧嬌王芳霞次仁曲措 1 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 學(xué)習(xí)水樣的采取方法 檢測(cè)水中總大腸菌群的方法2 了解檢測(cè)水中總大腸菌群各種方法的原理3 了解水質(zhì)評(píng)價(jià)的微生物學(xué)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 明白其應(yīng)用的重要性 2 二 實(shí)驗(yàn)原理 大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名 而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語 它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌 而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌 這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致 其定義為 需氧及兼性厭氧 在37 能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌 一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌 檸檬酸桿菌 產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等 大腸菌群細(xì)菌多存在于溫血?jiǎng)游锛S便 人類經(jīng)?；顒?dòng)的場(chǎng)所以及有糞便污染的地方 人 畜糞便對(duì)外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因 大腸菌群數(shù)的高低 表明了糞便污染的程度 也反映了對(duì)人體健康危害性的大小 糞便中多以典型大腸桿菌為主 而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多 多管發(fā)酵法包括初 步 發(fā)酵試驗(yàn) 平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 3 1 初步發(fā)酵試驗(yàn)大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣酸的產(chǎn)生可利用指示劑來斷定 在配制培養(yǎng)基時(shí)預(yù)先加入溴甲酚紫 pH5 2 黃色 6 8 紫色 當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí) 可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色 氣體的產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的德漢氏小管中有無氣泡來證明 水樣接種于發(fā)酵管內(nèi) 37 下培養(yǎng) 24h內(nèi)小套管中氣體形成 并且培養(yǎng)基混濁 顏色改變 說明水中存在大腸菌群 為陽性結(jié)果 但也有個(gè)別其它類型的細(xì)菌在此條件下也可能產(chǎn)氣 此外產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的也不能完全說明是陰性結(jié)果 在量少的情況下 也可能延遲48h后才產(chǎn)氣 此時(shí)應(yīng)視為可疑結(jié)果 因此 以上兩種結(jié)果均需繼續(xù)做下面的部分實(shí)驗(yàn) 才能確定是否是大腸菌群 48h后仍不產(chǎn)氣的為陰性結(jié)果 4 2 平板分離伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基平板含有伊紅與美藍(lán)染料 亦作為指示劑 大腸菌群發(fā)酵乳糖造成酸性環(huán)境時(shí) 該兩種染料即結(jié)合成復(fù)合物 使大腸菌群產(chǎn)生帶核心的 有金屬光澤的深紫色 龍膽紫 菌落 初發(fā)酵管24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣和48h產(chǎn)酸產(chǎn)氣的均需在以上平板上劃線分離菌落 5 3 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)EMB平板上大腸菌群陽性菌落 經(jīng)過涂片染色為革蘭氏陰性菌且無芽孢者 通過此試驗(yàn)再進(jìn)一步證實(shí) 原理與初發(fā)酵試驗(yàn)相同 經(jīng)24h培養(yǎng)產(chǎn)酸又產(chǎn)氣的 最后確定為大腸菌群陽性結(jié)果 6 三 實(shí)驗(yàn)器材 1 培養(yǎng)基 乳糖蛋白胨發(fā)酵管 內(nèi)有倒置小套管 三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管 瓶 內(nèi)有倒置小套管 伊紅美藍(lán)瓊脂平板 滅菌水 2 儀器或其他用具 載玻片 滅菌帶玻璃塞空瓶 滅菌吸管 滅菌試管等 7 采水樣 多管發(fā)酵法 初步發(fā)酵 平板分離 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 統(tǒng)計(jì)查表 四 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟 8 1 水樣的采集自來水將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌 再擰開水龍頭流水5min 以排除管道內(nèi)積存的死水 隨后用已滅菌的三角瓶接取水樣 以供檢測(cè) 池水 河水或湖水將無菌的帶玻塞的小口瓶浸入距水面10 15cm深的水層中 瓶口朝上 除去瓶塞 待水流入瓶中裝滿后 蓋好瓶塞 取出后立即進(jìn)行檢測(cè) 或臨時(shí)存于冰箱 但不能超過24h 2 初 步 發(fā)酵實(shí)驗(yàn)將水樣分別接入10支裝有10ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管中 37 培養(yǎng)24h 24h未產(chǎn)氣的繼續(xù)培養(yǎng)48h 3 平板分離將經(jīng)24h和48h培養(yǎng)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管 分別劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上 再于37 培養(yǎng)18 24h 將符合下列特征的菌落進(jìn)行染色鏡檢 深紫黑色 有金屬光澤 紫黑色 不帶或略帶金屬光澤 淡紫紅色 中心顏色較深 4 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)經(jīng)涂片 染色 鏡檢 如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌 則挑取該菌落的另一部分 重新接種于普通濃度的乳糖蛋白胨發(fā)酵管中 每管可接種來自同一初發(fā)酵管同類型菌落1 3個(gè) 37 培養(yǎng)24h 結(jié)果或產(chǎn)酸又產(chǎn)氣 即證實(shí)又大腸菌群存在 證實(shí)有大腸菌群存在后 再根據(jù)初發(fā)酵試驗(yàn)的陽性管數(shù)查表XV 2 P186 即得大腸菌群數(shù) 9 五 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 10 11 六 思考題 何謂大腸菌群 主要包括哪些細(xì)菌屬 假如水