上海師范大學(xué) 植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件.ppt

植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn) 植物組織滲透勢的測定 實(shí)驗(yàn)原理當(dāng)植物組織細(xì)胞內(nèi)的汁液其周圍的某種溶液處于滲透平衡狀態(tài) 植物細(xì)胞內(nèi)的壓力勢為零時(shí) 細(xì)胞汁液的滲透勢就等于該溶液的滲透勢 這種滲透勢相等的溶液為等滲溶液 該溶液的濃度稱為等滲濃度 當(dāng)用一系列梯度濃度溶液觀察細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象時(shí) 細(xì)胞的等滲濃度將介于剛剛引起初始質(zhì)壁分離的濃度和尚不能引起質(zhì)壁分離的濃度之間的溶液濃度 代入公式即可計(jì)算其滲透勢 植物組織滲透勢的測定 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器顯微鏡 載玻片及蓋玻片 試管 移液管 培養(yǎng)皿 鑷子 刀片實(shí)驗(yàn)試劑1 00mol L蔗糖溶液 甲烯藍(lán)實(shí)驗(yàn)材料洋蔥鱗莖或紫鴨跖草 植物組織滲透勢的測定 實(shí)驗(yàn)步驟用1 00mol L蔗糖母液配制一系列不同濃度的蔗糖溶液 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6mol L 各30mL 分別注入編好號的各培養(yǎng)皿中 取帶有色素的洋蔥鱗莖或紫鴨跖草下表皮 迅速分別投入各蔗糖溶液中 使其完全浸入 約5 10min 從0 6mol L開始依次取出表皮薄片放在滴有同樣溶液的載玻片上 蓋上蓋玻片 于低倍顯微鏡下觀察 并記錄質(zhì)壁分離的相對程度 植物組織滲透勢的測定 實(shí)驗(yàn)步驟確定引起半數(shù)以上細(xì)胞原生質(zhì)剛剛從細(xì)胞壁的角隅上分離的濃度 和不引起質(zhì)壁分離的最高濃度 細(xì)胞的滲透勢與兩個(gè)極限溶液濃度之平均值的滲透勢相等 根據(jù)公式計(jì)算細(xì)胞的滲透勢 s icRTi為解離系數(shù) 蔗糖為1 c為小液滴在其中基本不動(dòng)的溶液的濃度 單位為mol L R為摩爾氣體常數(shù) R 0 0083L MPa mol K T為熱力學(xué)溫度 單位K 植物組織滲透勢的測定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 植物組織水勢的測定 實(shí)驗(yàn)原理植物組織的水分狀況可用水勢來表示 植物體細(xì)胞之間 組織之間以及植物體與環(huán)境之間的水分移動(dòng)方向都由水勢差決定 將植物組織放在已知水勢的一系列溶液中 如果植物組織的水勢小于某一溶液的水勢 則組織吸水 反之組織失水 若兩者相等 水分交換保持動(dòng)態(tài)平衡 組織的吸水或失水會(huì)使溶液的濃度 密度 電導(dǎo)率以及組織本身的體積與質(zhì)量發(fā)生變化 根據(jù)這些參數(shù)的變化情況可確定與植物組織等水勢的溶液 植物組織水勢的測定 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器試管 移液管 毛細(xì)滴管 青霉素小瓶 打孔器 鑷子實(shí)驗(yàn)試劑1 00mol L蔗糖溶液 甲烯藍(lán)實(shí)驗(yàn)材料青菜或菠菜葉片 植物組織水勢的測定 實(shí)驗(yàn)步驟用1 00mol L蔗糖母液配制一系列不同濃度的蔗糖溶液 0 05 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6mol L 各10mL 分別注入編好號的7支對照組試管中 另取7個(gè)青霉素小瓶對應(yīng)試管編號 從對照管中分別吸2mL溶液入相同編號的試驗(yàn)組小瓶中 用打孔器在葉片中部靠近主脈附近打取葉圓片 隨機(jī)取樣 每試驗(yàn)組小瓶中放入30片葉圓片 加塞 放置30min 其間搖動(dòng)數(shù)次 植物組織水勢的測定 實(shí)驗(yàn)步驟到時(shí)間后 用解剖針沾取少許甲烯藍(lán)粉末加入小瓶中 并震蕩 此時(shí)溶液呈藍(lán)色 用7支毛細(xì)滴管從試驗(yàn)組小瓶中依次吸取著色的液體少許 伸入同號對照組溶液的中部 緩慢放出藍(lán)色溶液 輕輕取出滴管 觀察藍(lán)色液滴的移動(dòng)方向 根據(jù)公式計(jì)算葉片細(xì)胞的水勢 w icRTi為解離系數(shù) 蔗糖為1 c為小液滴在其中基本不動(dòng)的溶液的濃度 單位為mol L R為摩爾氣體常數(shù) R 0 0083L MPa mol K T為熱力學(xué)溫度 單位K 植物組織水勢的測定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 植物組織水勢的測定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果在0 05 0 1mol L溶液中液滴下降 說明葉片細(xì)胞水勢小于外液水勢 細(xì)胞吸水 外液密度變大 在0 3 0 4 0 5 0 6mol L溶液中液滴上升 說明葉片細(xì)胞水勢大于外液水勢 細(xì)胞失水 外液密度變小在0 2mol L溶液中液滴基本不動(dòng) 說明細(xì)胞水勢與此外液的滲透勢相等實(shí)驗(yàn)所測葉片細(xì)胞水勢 1 0 2 0 0083 273 20 0 48638MPa實(shí)驗(yàn)溫度為20 植物的元素缺乏癥 實(shí)驗(yàn)原理植物的生長發(fā)育 除需要充足的陽光和水分外 還需要礦質(zhì)元素 否則植物就不能很好地生長發(fā)育甚至死亡 應(yīng)用溶液培養(yǎng)技術(shù) 可以觀察礦質(zhì)元素對植物生活的必需性 用溶液培養(yǎng)做植物的營養(yǎng)實(shí)驗(yàn) 可以避免土壤里的各種復(fù)雜因素 植物的元素缺乏癥 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分析天平 培養(yǎng)缸 燒杯 移液管實(shí)驗(yàn)材料玉米 或番茄 蓖麻 小麥 種子 植物的元素缺乏癥 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)試劑按下表配制貯備液 植物的元素缺乏癥 實(shí)驗(yàn)步驟材料準(zhǔn)備種子用漂白粉溶液滅菌30min 用無菌水沖洗數(shù)次 然后放在洗凈的石英砂中發(fā)芽 加蒸餾水 等幼苗長出第一真葉時(shí)待用 植物的元素缺乏癥 配制缺元素培養(yǎng)液 植物的元素缺乏癥 配制時(shí)先于棕色瓶中加入300mL蒸餾水 然后加貯備液 最后配成500mL 用稀酸 堿調(diào)節(jié)至pH5 6 選取大小一致的植株 小心剝?nèi)ナＳ嗯呷?用棉花包裹莖部 穿過瓶蓋小孔 使根部浸入培養(yǎng)液 將培養(yǎng)瓶移到溫室中 注意管理并觀察記錄植株的生長情況 各種元素缺乏癥的癥狀及出現(xiàn)的部位 植物的元素缺乏癥 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 硝酸還原酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)原理硝酸還原酶是植物氮素代謝作用中的關(guān)鍵性酶 與作物吸收和利用氮肥有關(guān) 它作用于NO3 使之還原為NO2 NO3 NADH H NO2 NAD H2O產(chǎn)生的NO2 可以從組織內(nèi)滲透到外界溶液中 并積累在溶液中 測定反應(yīng)液中NO2 含量的增加 即表現(xiàn)該酶活性的大小 硝酸還原酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)原理NO2 含量的測定用磺胺 對氨基苯磺酸胺 比色法 在酸性溶液中磺胺與NO2 形成重氮鹽 再與 萘胺偶聯(lián)形成紫紅色的偶氮染料 反應(yīng)液的酸度大 則增加重氮化作用的速度 但降低偶聯(lián)作用的速度 顏色比較穩(wěn)定 增加溫度可以增加反應(yīng)速度 但降低重氮鹽的穩(wěn)定度 所以反應(yīng)需要在相同條件下進(jìn)行 這種方法非常靈敏 能測定每毫升含0 5 g的NaNO2 硝酸還原酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì) 注射器 溫箱 天平 鉆孔器 三角燒瓶 移液管 燒杯 試管實(shí)驗(yàn)試劑0 1mol L磷酸緩沖液 pH7 5 0 2mol LKNO3 磺胺試劑 萘胺試劑 NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)驗(yàn)材料蓖麻 向日葵 油菜 小麥或棉花的葉子 硝酸還原酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)步驟將新鮮取回的葉片水洗 用吸水紙吸干 然后用鉆孔器打葉圓片 用蒸餾水洗滌2 3次 吸干水分 于分析天平上稱取等重的葉圓片兩份 每份約0 3 0 4g 或每份取50個(gè)圓片 分別置于含下列溶液的燒瓶中 0 1mol L磷酸緩沖液5mL 蒸餾水5mL 0 1mol L磷酸緩沖液5mL 0 2mol LKNO35mL 用注射器抽氣 至葉圓片沉于溶液中 將燒瓶放入30 溫箱中 避光保溫30min 硝酸還原酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)步驟分別吸取反應(yīng)液1mL于試管中 加入磺胺試劑2mL及 萘胺試劑2mL 混合搖勻 靜置30min 用分光光度計(jì) 520nm 進(jìn)行測定 記下OD值 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出NO2 含量 再計(jì)算酶的活性 硝酸還原酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)步驟用5 g mLNaNO2母液稀釋成0 5 1 2 3 4 g mL的梯度濃度的NaNO2溶液 分別吸取0 5 1 2 3 4 5 g mL的NaNO21mL于試管中 加入磺胺試劑2mL及 萘胺試劑2mL 混合搖勻 靜置30min 用分光光度計(jì) 520nm 進(jìn)行測定 記下OD值 以O(shè)D值為縱坐標(biāo) NaNO2濃度為橫坐標(biāo) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 硝酸還原酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線 注意 比色空白用1mL水加同樣顯色劑同樣反應(yīng)條件標(biāo)出根據(jù)對照反應(yīng)液和反應(yīng)液的比色OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出的NaNO2含量 硝酸還原酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果酶的活性 單鹽毒害及離子拮抗 實(shí)驗(yàn)原理離子間的拮抗現(xiàn)象的本質(zhì)是復(fù)雜的 它可能反映不同離子對原生質(zhì)親水膠粒的穩(wěn)定性 原生質(zhì)膜的透性 以及對各類酶活性調(diào)節(jié)等方面的相互制約作用 從而維持機(jī)體的正常生理狀態(tài) 單鹽毒害及離子拮抗 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器燒杯 紗布 石蠟實(shí)驗(yàn)試劑0 12mol LKCl 0 06mol LCaCl2 0 12mol LNaCl 所用藥品均需用分析純 實(shí)驗(yàn)材料小麥種子 單鹽毒害及離子拮抗 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)前3 4天選擇飽滿的小麥種子100粒浸種 在室溫下萌發(fā) 待根長1cm時(shí)可用作材料 取4個(gè)小燒杯 分別加入下列溶液0 12mol LKCl0 06mol LCaCl20 12mol LNaCl0 12mol LNaCl100mL 0 06mol LCaCl21mL 0 12mol LKCl2 2mL 單鹽毒害及離子拮抗 實(shí)驗(yàn)步驟小燒杯用涂石蠟的紗布蓋上 挑選大小相等及根系發(fā)育一致的小麥幼苗16株 小心種植在紗布蓋的孔眼里 使根系接觸到溶液 在室溫下培養(yǎng)2 3周后 觀察幼苗根的生長情況 培養(yǎng)期間注意補(bǔ)充水分 可更換一次培養(yǎng)液 單鹽毒害及離子拮抗 實(shí)驗(yàn)結(jié)果在單鹽溶液中小麥幼苗生長受阻 特別是根部出現(xiàn)畸形 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)原理葉綠體色素是植物吸收太陽光能進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì) 主要由葉綠素a 葉綠素b 胡蘿卜素和葉黃素組成 根據(jù)它們在有機(jī)溶劑中的溶解特性 可用丙酮將它們從葉片中提取出來 并可根據(jù)它們在不同有機(jī)溶劑中的溶解度不同以及在吸附劑上的吸附能力不同 將它們彼此分離開 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)原理葉綠素是一種雙羧酸的酯 可與堿發(fā)生皂化反應(yīng) 產(chǎn)生的鹽能溶于水 可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開 葉綠素在光照下可產(chǎn)生暗紅色的熒光 葉綠素中的鎂可被H 取代而生成褐色的去鎂葉綠素 加入銅鹽作用 后者則成為綠色的銅代葉綠素 銅代葉綠素很穩(wěn)定 在光下不易破壞 故常用此法制作綠色植物的浸漬標(biāo)本 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器大試管 臺(tái)天平 研缽 量筒 漏斗 橡皮塞 新華濾紙 毛細(xì)管 剪刀 分液漏斗 燒杯實(shí)驗(yàn)試劑丙酮 碳酸鈣 石英砂 無水硫酸鈉 四氯化碳 乙醚 甲醇 氫氧化鉀 鹽酸 醋酸銅實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的提取分離稱取新鮮葉片2g 放入研缽中加丙酮5mL 少許碳酸鈣和石英砂 研磨成均漿 再加丙酮10mL 以漏斗過濾之 即為色素提取液 把展層用的濾紙剪成2cm 20cm的紙條 將其一端剪去兩側(cè) 中間留一長約1 5cm 寬約0 5cm的窄條 用毛細(xì)管吸取葉綠素溶液點(diǎn)于窄條的上方 注意一次所點(diǎn)溶液不可過多 風(fēng)干后再點(diǎn) 重復(fù)多次 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的提取分離在大試管中加入四氯化碳3 5mL及少許無水硫酸鈉 然后將濾紙條固定于軟木塞上 插入試管內(nèi) 使窄條浸入溶劑中 色素點(diǎn)要略高于液面 蓋緊軟木塞 直立于陰暗處進(jìn)行層析 待四種色素帶清晰展開后 取出濾紙條 稍干后用鉛筆勾出色素帶邊緣 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒光現(xiàn)象取上述色素提取液少許于試管中 分別在反射光和透射光一側(cè)觀察提取液的顏色 銅代反應(yīng)取上述色素提取液少許于試管中 1滴1滴加濃鹽酸 直至溶液出現(xiàn)褐綠色 然后加醋酸銅晶體少許 慢慢加熱溶液 則又產(chǎn)生鮮亮的綠色 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素的理化性質(zhì)黃色素與綠色素的分離取上述色素提取液10mL 加到盛有20mL乙醚的分液漏斗中 搖動(dòng)分液漏斗 并沿漏斗邊緣加入30mL蒸餾水 輕輕搖動(dòng)分液漏斗 靜止片刻 溶液即分為兩層 色素已轉(zhuǎn)入上層乙醚中 棄去下層丙酮和水 再用蒸餾水沖洗乙醚溶液1 2次 然后加入5mL30 KOH甲醇溶液 用力搖動(dòng)分液漏斗 靜置約10min 再加蒸餾水約10mL 搖動(dòng)后靜置 則得到黃色素層和綠色素層 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果葉綠體色素的提取分離濾紙條自上而下的色素帶分別是橙色的胡蘿卜素黃色的葉黃素藍(lán)綠色的葉綠素a黃綠色的葉綠素b 葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒光現(xiàn)象銅代反應(yīng)黃色素與綠色素的分離 葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a b含量的測定 實(shí)驗(yàn)原理葉綠素和類胡蘿卜素都有光學(xué)特性 表現(xiàn)出一定的吸收光譜 可用分光光度計(jì)精確測定 如果混合液中的兩個(gè)組分 它們的光譜吸收雖然有明顯的差異 但吸收曲線彼此有些重疊 可根據(jù)Lambert Beer定律 通過代數(shù)方法 計(jì)算一種組分由于另一種組分存在時(shí)對光密度的影響 最后分別得到兩種組分的含量 葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a b含量的測定 實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)Lambert Beer定律 最大吸收光譜峰不同的兩個(gè)組分的混合液 它們的濃度C與光密度OD之間有如下關(guān)系 OD1 Ca ka1 Cb kb1OD2 Ca ka2 Cb kb2Ca為組分a的濃度 g L 1 Cb為組分b的濃度 g L 1 OD1為在波長 1 即組分a的最大吸收峰波長 時(shí) 混合液的光密度值 OD2為在波長 2 即組分b的最大吸收峰波長 時(shí) 混合液的光密度值 ka1和ka2分別為組分a的比吸收系數(shù) kb1和kb2分別為組分b的比吸收系數(shù) 葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a b含量的測定 實(shí)驗(yàn)原理葉綠素a和b的80 丙酮溶液的比吸收系數(shù)將數(shù)據(jù)代入上式經(jīng)整理后 并把濃度單位改為mg LCa 12 7OD663 2 69OD645Cb 22 9OD663 4 68OD645CT Ca Cb 8 02OD663 20 21OD645 葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a b含量的測定 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì) 離心機(jī) 臺(tái)天平 研缽 量筒 剪刀 移液管實(shí)驗(yàn)試劑丙酮 碳酸鈣 石英砂實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片 葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a b含量的測定 實(shí)驗(yàn)步驟稱取新鮮葉片1g 放入研缽中加丙酮5mL 少許碳酸鈣和石英砂 研磨成均漿 再加80 丙酮5mL 將勻漿轉(zhuǎn)入離心管 并用80 丙酮洗滌研缽 一并轉(zhuǎn)入離心管 離心后去沉淀 上清液用80 丙酮定容至20mL 取上述色素提取液1mL 加80 丙酮6mL稀釋 轉(zhuǎn)入比色杯中 以80 丙酮為對照 在400 500nm波長區(qū)每隔10nm 在500 600nm波長區(qū)每隔20nm 在600 700nm波長區(qū)每隔10nm 測定光密度 以繪制吸收光譜 另外測定645nm和663nm處的光密度 以計(jì)算葉綠素a和b的含量 葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a b含量的測定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果吸收光譜葉綠素a和b含量計(jì)算 離體葉綠體光還原反應(yīng) 希爾反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)原理在低溫下以等滲溶液制備完整的葉綠體 將其懸浮于適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)介質(zhì)中 并有氧化劑如2 6 二氯酚靛酚 簡稱DCIP 存在時(shí) 在光照下會(huì)放出O2 同時(shí)將染料還原 這就是葉綠體中進(jìn)行的光還原反應(yīng) 染料被還原后 顏色從藍(lán)色變?yōu)闊o色 因此可根據(jù)溶液OD值的變化進(jìn)行測定 該變化在4 5min內(nèi)呈線性關(guān)系 離體葉綠體光還原反應(yīng) 希爾反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器離心機(jī) 研缽 天平 紗布 試管 100W燈泡 722型分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)試劑提取介質(zhì)50mmol L pH7 5 Tris HCl緩沖液 內(nèi)含0 4mmol L蔗糖 10mmol LNaCl 1mmol L2 6 DCIP 2 6 二氯酚靛酚 溶液 用上述提取介質(zhì)配制 實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉片 離體葉綠體光還原反應(yīng) 希爾反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)步驟離體葉綠體的提取稱取10g新鮮菠菜葉片 去除粗葉脈 剪碎 加10mL預(yù)冷的提取介質(zhì) 分兩次加入 和少許石英砂 冰浴中迅速研磨成勻漿 再加10mL提取介質(zhì) 用4層紗布將勻漿過濾于一離心管中 2500r min離心3min 棄沉淀 上清液4000r min離心10min 棄上清 所得沉淀即為完整葉綠體 用15mL提取介質(zhì)使葉綠體懸浮 置冰浴中備用 離體葉綠體光還原反應(yīng) 希爾反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體光還原反應(yīng)的測定取3支潔凈試管 分別編號 按下表加入試劑 注 2號管加熱煮沸 然后加染料 3號管為比色時(shí)的空白對照將試管置于離100W燈光60cm處照光 3min后于620nm處測光密度 離體葉綠體光還原反應(yīng) 希爾反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1號管的OD620值2號管的OD620值說明 環(huán)境因素對光合作用的影響 葉圓片上浮法 實(shí)驗(yàn)原理植物光合強(qiáng)度的大小受光強(qiáng) 光質(zhì) CO2濃度 溫度等環(huán)境條件的影響 利用真空滲入法排除細(xì)胞間隙的空氣 使葉片沉于水中 由于光合作用放出的O2在水中溶解度很小 而在細(xì)胞間積累 結(jié)果使原來下沉的葉片上浮 根據(jù)上浮所需時(shí)間長短 即能比較光合作用的強(qiáng)弱 環(huán)境因素對光合作用的影響 葉圓片上浮法 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器打孔器 注射器 100W燈泡 小燒杯實(shí)驗(yàn)材料新鮮青菜葉片 環(huán)境因素對光合作用的影響 葉圓片上浮法 實(shí)驗(yàn)步驟選取健壯 葉齡相似的成熟葉片 用打孔器避開主脈打取葉圓片共60片 置于注射器中 注入水 抽氣至葉片沉入水中 取6只小燒杯 各倒入20mL冷開水 用吸管向其中5只小燒杯的水中吹氣 使CO2達(dá)到飽和 然后于6只小燒杯中各放入10片葉圓片 分別置于不同的條件下 環(huán)境因素對光合作用的影響 葉圓片上浮法 實(shí)驗(yàn)步驟記錄各燒杯中每一葉圓片上浮所需的時(shí)間 計(jì)算各處理中葉圓片上浮所需的平均時(shí)間或一定時(shí)間內(nèi)上浮的葉圓片數(shù) 比較不同條件下光合作用的強(qiáng)弱 環(huán)境因素對光合作用的影響 葉圓片上浮法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 植物呼吸強(qiáng)度的測定 小籃子法 實(shí)驗(yàn)原理利用Ba OH 2溶液吸收呼吸過程中釋放的CO2 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后 用草酸溶液滴定殘留的Ba OH 2 從空白和樣品兩者消耗草酸溶液之差 即可計(jì)算出呼吸過程中釋放CO2的量 植物呼吸強(qiáng)度的測定 小籃子法 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器廣口瓶 酸式滴定管 紗布實(shí)驗(yàn)試劑0 05mol LBa OH 2 1 44mol L草酸溶液 每mL相當(dāng)于1mgCO2 指示劑實(shí)驗(yàn)材料萌發(fā)的小麥種子 植物呼吸強(qiáng)度的測定 小籃子法 實(shí)驗(yàn)步驟稱取萌發(fā)的小麥種子15g 包入紗布袋內(nèi) 將紗布袋掛在廣口瓶的橡皮瓶塞上 注意不要掛得太低 在廣口瓶中加0 05mol LBa OH 225mL 塞上瓶塞 用熔化的石蠟密封瓶口 防止漏氣 每10min左右輕輕搖動(dòng)廣口瓶 破壞溶液表面的BaCO3薄膜 以利對CO2的吸收 1h后 打開瓶塞 迅速加2滴指示劑 用1 44mol L草酸滴定 直到綠色變成紫色為止 記錄所耗用的草酸溶液的體積 mL 數(shù) 植物呼吸強(qiáng)度的測定 小籃子法 實(shí)驗(yàn)步驟另取同樣重量的煮沸殺死的小麥種子 作同樣測定 以次作為對照 計(jì)算呼吸強(qiáng)度 植物呼吸強(qiáng)度的測定 小籃子法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果死種子裝置滴定所耗草酸量 V0 活種子裝置滴定所耗草酸量 V1 呼吸強(qiáng)度 CO2 mg g h V0 V1 種子鮮重 g 時(shí)間 h 過氧化物酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)原理過氧化物酶廣泛存在于植物的各個(gè)組織器官中 在有過氧化氫存在下 過氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化 生成茶褐色物質(zhì) 可用分光光度計(jì)測量生成物的含量 過氧化物酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器分光光度計(jì) 離心機(jī) 天平 研缽實(shí)驗(yàn)試劑愈創(chuàng)木酚 30 過氧化氫 20mmol LKH2PO4 100mmol L磷酸緩沖液 pH6 0 反應(yīng)混合液 100mmol L磷酸緩沖液 pH6 0 50mL 加入愈創(chuàng)木酚28 L 加熱攪拌至愈創(chuàng)木酚溶解 冷卻后加入30 過氧化氫19 L 混合均勻 保存于冰箱中 實(shí)驗(yàn)材料馬鈴薯塊莖 過氧化物酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)步驟粗酶液的提取稱取去皮馬鈴薯塊莖1g 加20mmol LKH2PO45mL 于研缽中研磨成均漿 以4000r min離心15min 收集上清液保存于冷處 所得殘?jiān)谟?mLKH2PO4溶液提取一次 合并兩次上清液 酶活性的測定取比色杯2只 于一只中加入反應(yīng)混合液3mL KH2PO41mL 作為校零對照 另一只中加入反應(yīng)混合液3mL 上述酶液1mL 立即于分光光度計(jì)470nm測量OD值 每隔1min讀數(shù)一次 以每分鐘OD變化值表示酶活性大小 過氧化物酶活性的測定 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 OD470 min 鮮重g 種子活力的快速測定 氯化三苯基四氮唑法 TTC法 實(shí)驗(yàn)原理凡有生命力的種子胚部 在呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng) 而無生命活力的種胚則無此反應(yīng) 當(dāng)TTC滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi) 并作為氫受體被脫氫輔酶 NADH或NADPH 上的氫還原時(shí) 便由無色TTC變?yōu)榧t色的TTF 種子活力的快速測定 氯化三苯基四氮唑法 TTC法 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器恒溫箱 燒杯 培養(yǎng)皿 鑷子 刀片實(shí)驗(yàn)試劑0 5 TTC溶液實(shí)驗(yàn)材料大麥 小麥 秈谷或粳谷的種子 種子活力的快速測定 氯化三苯基四氮唑法 TTC法 實(shí)驗(yàn)步驟浸種將待測種子在30 35 溫水中浸種 以增強(qiáng)種胚的呼吸強(qiáng)度 顯色取吸脹種子100粒 用刀片沿種子胚的中心線縱切為兩半 將其中的一半置于培養(yǎng)皿中 加入適量的0 5 TTC溶液覆蓋種子 然后置于30 恒溫箱中1h 觀察結(jié)果 將另一半在沸水中煮5min殺死胚 作同樣染色處理 作為對照觀察 種子活力的快速測定 氯化三苯基四氮唑法 TTC法 實(shí)驗(yàn)步驟計(jì)算活種子的百分?jǐn)?shù) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果煮沸殺死的種子胚部均為白色 未煮沸殺死的種子胚部大部分為紅色 少數(shù)為白色 活種子的百分率為 種子活力的快速測定 紅墨水法 實(shí)驗(yàn)原理凡活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力 而死的種子胚細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失這種能力 于是染料便能進(jìn)入死細(xì)胞而染色 種子活力的快速測定 紅墨水法 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器恒溫箱 燒杯 培養(yǎng)皿 鑷子 刀片實(shí)驗(yàn)試劑5 紅墨水實(shí)驗(yàn)材料大麥 小麥 秈谷或粳谷的種子 種子活力的快速測定 紅墨水法 實(shí)驗(yàn)步驟浸種將待測種子在30 35 溫水中浸種 以增強(qiáng)種胚的呼吸強(qiáng)度 顯色取吸脹種子100粒 用刀片沿種子胚的中心線縱切為兩半 將其中的一半置于培養(yǎng)皿中 加入5 紅墨水淹沒種子 染色10 15min 倒去紅墨水 用水沖洗種子 至沖洗液無色 觀察結(jié)果 種子活力的快速測定 紅墨水法 實(shí)驗(yàn)步驟將另一半在沸水中煮5min殺死胚 作同樣染色處理 作為對照觀察 計(jì)算活種子的百分?jǐn)?shù) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果煮沸殺死的種子胚與胚乳均染上紅色 未煮沸殺死的種子胚部大部分為白色或淺紅色 少數(shù)為紅色 活種子的百分率為 植物生長調(diào)節(jié)劑對植物插條不定根發(fā)生的影響 實(shí)驗(yàn)原理用植物生長調(diào)節(jié)劑 生長素類 處理插條 可以促進(jìn)細(xì)胞恢復(fù)分裂能力 誘導(dǎo)根原基發(fā)生 促進(jìn)不定根的生長 植物生長調(diào)節(jié)劑對植物插條不定根發(fā)生的影響 實(shí)驗(yàn)器材與試劑實(shí)驗(yàn)儀器電子天平 燒杯 移液管 量筒等實(shí)驗(yàn)試劑1000mg L吲哚乙酸溶液實(shí)驗(yàn)材料各種植物材料 植物生長調(diào)節(jié)劑對植物插條不定根發(fā)生的影響 實(shí)驗(yàn)步驟