以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略.ppt

2010 12 31 以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略 DC腫瘤疫苗的主要影響因素 樹突狀細(xì)胞dendriticcell DC 1973美國學(xué)者Steinman小鼠的脾細(xì)胞 因其成熟時(shí)伸出許多樹突樣或偽足樣突起而得名目前所知的功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞 CD34骨髓干細(xì)胞 腫瘤疫苗dendriticcellvaccineDCvaccine 1 增強(qiáng)腫瘤的免疫原性2 增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答3 打破腫瘤免疫耐受 核心問題 誘導(dǎo)主動(dòng)性免疫刺激宿主產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答安全 無不良反應(yīng)能為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)提供保護(hù)性的長期免疫記憶功能 理想腫瘤疫苗 腫瘤疫苗的研究進(jìn)展 疫苗的出現(xiàn)1796EdwardJenner接種疫苗 天花 腫瘤疫苗嘗試性研究提高腫瘤自身免疫原性的方法增加機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)1 WiUiamColey丹毒患者的活的鏈球菌 注射腫瘤患者腫瘤結(jié)節(jié)內(nèi) 激發(fā)起腫瘤患者機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答 2 牛痘病毒感染的腫瘤細(xì)胞 腫瘤溶解物 注射人體3 混合卡介苗或短小棒狀桿菌 經(jīng)過照射滅活的腫瘤細(xì)胞 共孵育 注射人體 理論基礎(chǔ)的奠定1971BurnetThomas免疫監(jiān)視學(xué)說 臨床和實(shí)驗(yàn)證據(jù)1 免疫缺陷 尤其是細(xì)胞免疫缺陷 腫瘤發(fā)生率 2 幼兒期 免疫功能未發(fā)育成熟 和老年期 免疫功能衰退 腫瘤發(fā)生率比其他年齡 3 經(jīng)抗淋巴細(xì)胞血清處理或胸腺摘除的小鼠腫瘤發(fā)生率高 腫瘤疫苗研究的飛躍20世紀(jì)末90年代初以基因修飾腫瘤細(xì)胞為基礎(chǔ)的疫苗發(fā)展腫瘤疫苗真正成為能夠應(yīng)用于臨床的腫瘤治療方法1997年美國Jefferson大學(xué)約60 的黑色素細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移患者注射腫瘤疫苗后存活5年以上1998年波士頓研究人員制成一種經(jīng)生物工程改造的腫瘤疫苗 它包含一種可以刺激機(jī)體免疫系統(tǒng) 使 細(xì)胞保持較長時(shí)間的攻擊力 一 全腫瘤細(xì)胞疫苗1 經(jīng)物理 化學(xué)等方法處理的疫苗2 轉(zhuǎn)基因疫苗3 感染病毒類疫苗4 細(xì)胞融合疫苗 二 腫瘤抗原及抗原類分子疫苗該類疫苗的研究最為廣泛 該類疫苗特異性高 但免疫原性低1 抗原疫苗2 多肽類疫苗3 抗獨(dú)特型抗體疫苗4 熱休克蛋白 肽類復(fù)合物疫苗 三 核酸疫苗 四 重組病毒 病菌疫苗 五 樹突狀細(xì)胞疫苗 腫瘤疫苗新熱點(diǎn)近10年來以樹突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的腫瘤抗原特異性疫苗 1991年Steinman首次發(fā)現(xiàn)DC這一強(qiáng)大的抗原遞呈功能以來 DC就被用于腫瘤的免疫治療研究 轉(zhuǎn)基因疫苗 表達(dá)的共刺激分子 細(xì)胞因子 通過激活 細(xì)胞使更多的抗原被攝取呈遞 臨床試驗(yàn)效果不如動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 瘤細(xì)胞獲取復(fù)雜 滅活要求高 基因?qū)氲陌踩珕栴} 直接攜帶腫瘤抗原的DC細(xì)胞作用則更為直接 可以活化靜息 細(xì)胞 激發(fā)更強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng) DC疫苗 VS 易獲取 操作簡便 效果和轉(zhuǎn)基因疫苗相當(dāng)甚至更好 美國密執(zhí)安大學(xué) 瑞士蘇黎世大學(xué)等應(yīng)用樹突狀細(xì)胞分別攜帶乳腺癌 黑色素瘤抗原制備疫苗Dukes大學(xué)則應(yīng)用腫瘤細(xì)胞 轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞均已進(jìn)入 期或 期臨床試驗(yàn) 2005年中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院研發(fā)出一種除了干細(xì)胞移植 化療等常規(guī)治療方法外的白血病治療方法 白血病DC疫苗已在14位患者身上獲得明顯療效 國內(nèi)尚屬首創(chuàng) 1 腫瘤的免疫原性較弱 并具有抗原調(diào)變能力 2 MHC I類分子表達(dá)下降或消失 B7 ICAM 1等共刺激分子在癌細(xì)胞上的表達(dá)異常 腫瘤細(xì)胞高水平表達(dá)包括唾液酸在內(nèi)的粘多糖或其他的凝聚系統(tǒng) 血清中的封閉因子 封閉抗體 封閉腫瘤表面抗原表位 漏逸的少量腫瘤細(xì)胞不能引起足夠的免疫應(yīng)答 反而可以刺激腫瘤不斷生長 產(chǎn)生免疫刺激 存在于某些腫瘤組織內(nèi)的淋巴細(xì)胞可以為腫瘤細(xì)胞提供某些腫瘤營養(yǎng)因子并刺激腫瘤細(xì)胞生長 Sakaguchi 等在1995年發(fā)現(xiàn)鼠源性的CD4CD25雙陽性T細(xì)胞亞群 能通過細(xì)胞與細(xì)胞間接觸以及分泌細(xì)胞因子顯著抑制多種免疫細(xì)胞的功能 局部微環(huán)境的腫瘤抗原可顯著誘導(dǎo)特異Treg細(xì)胞生成 稱為腫瘤特異Treg細(xì)胞 很多資料顯示Treg細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境及患者外周血中富集存在 腫瘤免疫抑制因子可以使腫瘤細(xì)胞躲避局部免疫效應(yīng)細(xì)胞的攻擊 還能進(jìn)入外周血循環(huán) 抑制宿主全身抗腫瘤免疫功能 Lyon小組應(yīng)用 微量樣本多指標(biāo)流式蛋白定量技術(shù) CytometricBeadArray CBA 對(duì)35例確診乳癌患者及24例疑似患者的樣本進(jìn)行了檢測(cè)對(duì)比 得出在所測(cè)的IL 1B IL 2 IL4 IL 5 IL 6 IL 7 IL 8 IL 10 IL 12 p70 IL 13 IL 17 G CSF GM CSF IFN MCP 1 MIP 1B和TNF 細(xì)胞因子中 除了GM CSF INF 外 其他因子都有顯著的增高 Ishigami等的研究顯示 胃癌組織中DC數(shù)量與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 臨床分期和周圍浸潤呈負(fù)相關(guān) 1 未成熟DC與腫瘤細(xì)胞的直接接觸影響了DC的成熟 2 腫瘤細(xì)胞釋放的可溶性免疫抑制因子影響著全身的DC的成熟和功能 包括VEGF TNF TGF M CSF GM CSF IL 6和IL 10等 腫瘤局部DC浸潤數(shù)量可作為判斷腫瘤預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo) 以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略 以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略 以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗策略 1 腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC 1 腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC 1 腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC Yasuda 1 腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞提取物沖擊DC 2 蛋白質(zhì)沖擊DC 對(duì)于抗原表位尚不了解的腫瘤 可以可溶性蛋白作為抗原裝載DC在腫瘤動(dòng)物模型和腫瘤患者中 以腫瘤抗原蛋白轉(zhuǎn)染的DC在體外和體內(nèi)均可誘導(dǎo)出針對(duì)腫瘤的抗原特異性CTL反應(yīng) 3 腫瘤抗原肽沖擊DC 以腫瘤特異性抗原或腫瘤相關(guān)抗原肽裝載DC的腫瘤疫苗 4 腫瘤抗原DNA RNA沖擊DC 載體 4 腫瘤抗原DNA RNA沖擊DC DNA RNA疫苗可在體外合成而大量獲得 并可包含多個(gè)抗原表位 還可經(jīng)修飾使其功效加強(qiáng) RNA疫苗只在宿主細(xì)胞的胞質(zhì)中表達(dá) DNA疫苗需進(jìn)入細(xì)胞核后轉(zhuǎn)錄 癌變的潛在危險(xiǎn)DNA疫苗穩(wěn)定性好 功效長久 5 腫瘤抗原在體內(nèi)沖擊DC 腫瘤抗原 GM CSF IL 4 脂質(zhì)體 DC裝載抗原策略 免疫佐劑的使用 DC的體外擴(kuò)增 免疫途徑 臨床病人的選擇 DC腫瘤疫苗的主要影響因素 DC的來源 DC的分離純化 DC的培養(yǎng)基 DC培養(yǎng)使用的細(xì)胞因子 DC細(xì)胞的鑒定 DC的培養(yǎng)技術(shù) DC的來源 骨髓 取材有限 HSC含量極少 大約為1 105單個(gè)核細(xì)胞 BM為侵入性操作 患者不容易接受 其增殖及多向分化能力隨供者年齡增加體質(zhì)衰弱而減弱 在體外培養(yǎng)過程中有自發(fā)分化和衰老的現(xiàn)象 且BM有病毒污染的可能 DC的來源 外周血 其端粒及端粒酶活性均長于和高于BM及PBHSC HPC 并且低表達(dá)或不表達(dá)細(xì)胞凋亡配基CD95 Fas 故體外生存期更長 DC的來源 臍帶血 臍帶血 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 產(chǎn)量大 純度高等母嬰無不良影響 不涉及社會(huì) 倫理及法律等方面的爭論 受胎盤屏障保護(hù) 被污染概率低 CB量較少 通常只有50 150ml CBHSC對(duì)理化變化較敏感 洗滌 分離或運(yùn)用傳統(tǒng)方法去除紅細(xì)胞的方法均會(huì)導(dǎo)致HSC的嚴(yán)重丟失 分離純化 聯(lián)合 DC的培養(yǎng)基 細(xì)胞因子 GM CSF IL 4 IL 4通過抑制單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞方向的分化而誘導(dǎo)其向DC方向分化 IL 4可以增加并穩(wěn)固GM CSF誘導(dǎo)的CD1a的表達(dá) IL 4與極低濃度GM CSF協(xié)同刺激iDC后 促進(jìn)DC成熟 上調(diào)MHC 和共刺激分子表達(dá) IL 4還能促進(jìn)IL 12分泌 TNF DC的鑒定 形態(tài)學(xué)鑒定表面特異性標(biāo)記物的鑒定 CD1a CD83 功能學(xué)鑒定 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)促T細(xì)胞增殖作用DC分泌IL 12的檢測(cè) DC的鑒定 形態(tài)學(xué)鑒定表面特異性標(biāo)記物的鑒定 CD1a CD83 功能學(xué)鑒定 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)促T細(xì)胞增殖作用DC分泌