培養(yǎng)條件決定由戊糖乳桿菌LPS26生產(chǎn)的兩種細(xì)胞外多糖的平衡.doc

應(yīng)用和環(huán)境微生物學(xué)，2006年12月，第 7495頁到7502頁0099-2240/06/08.00美元，0 DOI：10.1128/AEM.01078-06版權(quán)所有2006年，美國微生物學(xué)會。保留所有權(quán)利培養(yǎng)條件決定由戊糖乳桿菌LPS26生產(chǎn)的兩種細(xì)胞外多糖的平衡 第一個(gè)作者：,比亞特麗絲,nchez Jorge-Ignacio Sa Mart,拉斐爾Guille nez號,第二個(gè)作者：nez-DJime Rufino,阿塞拜疆和guez Rodr安娜第一個(gè)作者來自：cteos研究所的產(chǎn)品IPLA-CSIC,阿斯圖里亞斯()。號/ s Infiesto、西班牙、Villaviciosa 33300；第二個(gè)作者來自：IG-CSIC研究所(脂肪),向國務(wù)院食品,Biotecnolog,分段、西班牙塞維利亞41012 1078收到日期：2006年5月10日 ；接受日期2006年9月19日 從綠橄欖自然發(fā)酵物中分離得到的戊糖乳桿菌LPS26，可以生產(chǎn)一類由兩種胞外多糖(EPS)組成的莢膜多聚物：EPS A，一種高分子量胞外多糖，由葡萄糖和鼠李糖（3：1）組成；EPS B，一種低分子量胞外多糖，由葡萄糖和甘露糖（3：1）組成。通過使用不同碳源（葡萄糖、果糖、甘露醇和乳糖）的化學(xué)半限定培養(yǎng)基及溫度和pH影響的分析表明培養(yǎng)基的條件對于由菌株LPS26生產(chǎn)的EPS的類型和濃度有很明顯的影響。當(dāng)溫度下降,增加合成兩EPS檢測。pH值的控制增強(qiáng)EPS B生產(chǎn)。在這方面,最大總EPS生產(chǎn)(514 mgliter1was增長達(dá)到理想溫度(20C)和pH值6.0。連續(xù)化培養(yǎng)表明,EPSA的合成,主要是在低貧化率合成,顯然是依賴于增長速率,而EPS B合成幾乎沒有影響。EPS產(chǎn)生中發(fā)現(xiàn)了補(bǔ)充脫脂牛奶,但是發(fā)酵牛奶的粘度沒被增加也沒記錄。這可能與高的比例的對比度在這些條件下的培養(yǎng)中所觀察到的產(chǎn)生低分子量的多糖，總體而言,目前的研究表明,培養(yǎng)條件產(chǎn)生了顯著影響的類型和濃度的EPS LPS26產(chǎn)生的壓力,因此,這些條件應(yīng)該仔細(xì)選擇優(yōu)化和適應(yīng)-陽離子的研究。最后,需要注意的是,這是,據(jù)我們所知第一篇關(guān)于由戊糖乳桿菌產(chǎn)EPS的報(bào)道。 微生物胞外多糖（EPS）是一類范圍廣泛的分泌多聚物，既可以緊密連接在細(xì)胞表面（莢膜多糖），胞外多糖也可以粘物質(zhì)分泌到胞外?；蚍植嫉恼骋涸谥車募?xì)胞單元(20)。在自然環(huán)境下，多糖可能帶有毒性和細(xì)胞抵御干燥、滲透壓力,抗生素、有毒化合物,和噬菌體或原生動(dòng)物攻擊(11,40)。在一些分子在食品應(yīng)用程序作為乳化劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、粘稠劑,這些分子是已知的(40)。在微生物EPS,那些乳酸菌(LAB)正逐漸受到重視,因?yàn)檫@些微生物有一個(gè)“食品級的”狀態(tài)。流變適當(dāng)?shù)年P(guān)系產(chǎn)生的EPS實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一種重要的應(yīng)用于發(fā)酵乳制品中，如酸奶,奶酪,或發(fā)酵的牛奶,盡管他們在發(fā)酵肉類和蔬菜(2,33 ，42 ,45)也扮演了一個(gè)角色，此外,他們還被證明對人體健康產(chǎn)生有利影響,如降低膽固醇、增加免疫力，鎮(zhèn)道德活動(dòng)和益生元的效果(8,29,37)。一些研究也相關(guān)涉及生產(chǎn)EPS的部分抗噬菌體感染，而乳制品行業(yè)(16,24)是主要問題一個(gè) 因此它生產(chǎn)的EPS引起了人們越來越多的興趣，LAB生產(chǎn)的EPS可以由一種糖單體構(gòu)成（同聚多糖），也可以由幾種單體構(gòu)成（雜多糖）。此外,由不同菌株生產(chǎn)的EPS在糖成分、鏈長、支化程度以及糖鍵類型上有所不同。所以這些因素決定了流變和促進(jìn)健康的道具屬性 EPS(36,37)。EPS可以產(chǎn)生可能是在一個(gè)生物反應(yīng)器中,然后是由相應(yīng)的下游加工處理對其進(jìn)一步用作食品添加劑,或在發(fā)酵過程中原位。因此,他們很大可能成為替代當(dāng)前使用的穩(wěn)定劑和粘稠劑。迄今為止，這些EPS作為生物組分在食品工業(yè)上的使用很大程度上受到了LAB低產(chǎn)量（40到600mg L-1）的限制。因此，高效地由LAB生產(chǎn)EPS的條件應(yīng)該被優(yōu)化，諸如黃原膠或結(jié)冷(10到25 g 每升)產(chǎn)生的非食品級微生物(11)。它還應(yīng)該注意到,homopolysaccharides產(chǎn)生一個(gè)更大程度上比人肝癌細(xì)胞。在這方面,條件的高效生產(chǎn)EPS在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)優(yōu)化。眾所周知,生物合成EPS是應(yīng)變依賴、受發(fā)酵條件和培養(yǎng)基成分(23)有關(guān)。 近年來由乳酸桿菌生產(chǎn)EPS已被報(bào)道。但迄今為止還沒有關(guān)于由戊糖乳桿菌生產(chǎn)EPS的特點(diǎn)的報(bào)道。對此，我們研究了由戊糖乳桿菌LPS26生產(chǎn)的兩種不同的EPS。事實(shí)上,根據(jù)我們的結(jié)果，兩種EPS的比率可以被調(diào)節(jié)并且產(chǎn)物水平，可通過培養(yǎng)條件而被優(yōu)化。 最近有報(bào)道EPS生產(chǎn)的乳酸桿菌（1.31，41，43）。不過，EPS生產(chǎn)的L.其特點(diǎn)是戊糖一直是這樣?？紤]到這一點(diǎn)，我們研究了兩個(gè)不同的EPSS BYL生產(chǎn)。其特點(diǎn)是戊糖一直是這樣?？紤]到這一點(diǎn)，我們研究了兩種不同的生產(chǎn)。戊糖LPS26，橄欖自然發(fā)酵的菌株。培養(yǎng)條件的影響，煤源，增長率EPS的產(chǎn)量和成分的報(bào)道。根據(jù)我們的研究結(jié)果，這兩個(gè)EPSS之間的比率可以被調(diào)制，和生產(chǎn)可以是優(yōu)化由水平培養(yǎng)條件。材料和方法 菌株及培養(yǎng)條件。 L. J.分離的西班牙風(fēng)格的綠色橄欖發(fā)酵戊糖LPS26 L.魯伊斯 - Barba和R. EPS隔離和糖組成。在發(fā)船重工研究所（塞維利亞，西班牙）。這株，以前分類ASL。根據(jù)煤炭桿菌發(fā)酵個(gè)人資料（25），最近被確定為L戊糖（JL魯伊斯 - 巴爾巴，未發(fā)表資料）由olecular技術(shù)（44）。乳酸乳球菌乳酸亞種。 IPLA947球菌分離ROM工匠奶酪（9）。株常規(guī)培養(yǎng)在30C MRS或者M(jìn)17肉湯（Scharlab，巴塞羅那，西班牙），分別在80C的甘油20（體積/體積）。 戊糖乳酸桿菌LPS26 （L. pentosus LPS26）乳酸乳球菌乳酸亞種IPLA947 （Lactococcus lactis subsp. lactis IPLA947 ）對于EPS生產(chǎn)，可在優(yōu)化的半合成培養(yǎng)基SDM中培養(yǎng)獲得細(xì)胞外多糖（EPS）培養(yǎng)基組成：吐溫80（Tween 80 ） 1g/L， 檸檬酸銨 2g/L乙酸鈉 5g/L，MgSO47H2O 0.1g/L，MnSO4 0.05g/L K2HPO4 2g/L， 酵母浸粉 5g/L ， 蛋白胨1 0g/L pH 6.0 為進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)基成分，添加不同碳源進(jìn)行 對細(xì)胞表面進(jìn)行化學(xué)處理A、每10ml樣品過夜培養(yǎng)后以5ml以下任何一種溶液重懸處理：30質(zhì)量分?jǐn)?shù)的十二烷基磺酸鈉45C下處30min B、0.05M NaOH于20C處理30min C、蛋白酶K（1.5mg/ml）于50C處理30min EPS的分離純化 在前人方法上進(jìn)行改進(jìn)如下：10ml樣品以30W 1Hz超聲波處理了10min 用10質(zhì)量分?jǐn)?shù)的三氯乙酸攪拌處理30分鐘 410000g離心10min以去除細(xì)胞核蛋白 以2倍體積的酒精沉淀過夜 ，重溶于1ml蒸餾水中 4中透析48h，期間每12h換水一次 純凈的EPS被凍干以便于進(jìn)行進(jìn)一步定量和成分分析 EPS的定量 對含EPS的樣品進(jìn)行高壓液相色譜(HPLC)系統(tǒng)進(jìn)行過濾層析(SEC) ，組分用一個(gè)以TSK-Gel precolumn柱保護(hù)的TSK-Gel G5000 PWXL柱收集。HPLC條件如下：A. 流動(dòng)相是0.1M的NaNO3B. 柱溫是40C. 流速是0.6ml/minD. 進(jìn)樣量是50ul 單糖的分析 存在兩種EPS (EPS A and EPS B)1. 分離得到的EPS蒸餾水透析48h以去除來自流動(dòng)相的NaNO3然后將其凍干2. 依靠根據(jù)alditol acetate方法進(jìn)行的氣相色譜來測定多糖成分3. 樣品以丙酮（1ul對應(yīng)每ug EPS）溶解4. 通過Hewlett-Packard 5972選擇性質(zhì)量檢測器連接Series II Hewlett-Packard 5890儀和按流注射模式操作的一根石英毛細(xì)管（0.25 mm by 30 m; SPTM 2330）進(jìn)行分析5. 烤箱的溫度保持在220 發(fā)酵條件所有的發(fā)酵實(shí)驗(yàn)都是在一個(gè)750ml的含葡萄糖20g/L） 的SDM培養(yǎng)基中進(jìn)行的 ，以30C過夜培養(yǎng)的培養(yǎng)物按2體積分?jǐn)?shù)接種 ，通過一個(gè)連續(xù)發(fā)酵：3000/225探針進(jìn)行測量后自動(dòng)補(bǔ)加5.7N的NH4OH來控制pH轉(zhuǎn)速為150rpm 當(dāng)菌體達(dá)到指數(shù)生長期時(shí)，補(bǔ)加新鮮的培養(yǎng)基使之開始從最低稀釋度下進(jìn)行發(fā)酵分別對多種碳源（葡萄糖、乳糖、果糖和甘露醇），不同糖濃（5，20，30和40g/L），不同溫度（20，25和30C）以及不同pH水平（6.0，5.0和不進(jìn)行控制）進(jìn)行了實(shí)驗(yàn) 對細(xì)菌的生長情況（以CUF/ml表示），pH（未控制pH培養(yǎng)物）和產(chǎn)物EPS的量進(jìn)行了測定，HPLC對糖和有機(jī)酸進(jìn)行檢測 動(dòng)力學(xué)參數(shù)最大生長率maxln（X1-X0）/（t1t0），其中X1和X0是CFU/ml的數(shù)，t0和t1是對數(shù)生長期起止時(shí)間EPS產(chǎn)率(YEPS)以每克糖產(chǎn)生的EPS毫克數(shù)表示單位體積產(chǎn)率(Pv)以每小時(shí)每升培養(yǎng)液中產(chǎn)生的EPS毫克數(shù)表示 以牛奶進(jìn)行培養(yǎng)在商品UHT培養(yǎng)基添加了2的脫脂乳糖粉末作為兩種菌的培養(yǎng)基，兩種菌分別在MRS和M17培養(yǎng)基上過夜培養(yǎng)，以它們作為接種體在25C下培養(yǎng)72小時(shí)后每毫升戊糖乳酸桿菌LPS26長出了2107個(gè)菌落，乳酸乳球菌乳酸亞IPLA947則長出了7.5106個(gè) 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)依靠電腦軟件進(jìn)行了差異分析和最小差異意義監(jiān)測分析驗(yàn)證（P0IPLA947 （Lactococcus lactis subsp. Lactis IPLA947 ）實(shí)驗(yàn)結(jié)果EPS的組成 對表中英語翻譯：尺寸排阻色譜顯示兩個(gè)EPS byL產(chǎn)生。戊糖 LPS26。虛線旁邊的分?jǐn)?shù)收集糖成分分析的兩個(gè)EPS。圖1.高壓液相色譜分析L.戊糖LPS26產(chǎn)生的EPS分析顯示存在分別對應(yīng)兩個(gè)峰的兩種多聚物，一種大分子量（high-Mw）多聚物（EPS A），分子量1.9106Da，另一種小分子量多聚物（EPS B)，分子量3.3104Da。EPS隔離和糖組成；L戊糖LPS26was生長在SDM補(bǔ)充葡萄糖（30克每升）在30C環(huán)境下72小時(shí)的pH值控制。起初，沒有EPS可以從培養(yǎng)物上清液中分離，表明它應(yīng)該完全附著到細(xì)胞表面。由于事實(shí)上，溫和的聲波處理培養(yǎng)物的時(shí)間允許從離心后的細(xì)胞表面，形成硬的，非粘性的沉淀中的釋放的EPS。這些觀測表明，產(chǎn)生的EPS由戊糖LPS26 L.是一個(gè)莢膜多糖。 EPS，隨后從上清液中提取和應(yīng)用上的SEC柱在HPLC系統(tǒng)。該分析揭示了存在兩個(gè)峰，對應(yīng)于高分子量（高分子量）聚合物（EPS甲）和一個(gè)低Mwpolymer（EPS乙）與分子大小為分子量1.9106Da和分子量3.3104Da（圖1，分別）。由氣體色譜/質(zhì)譜法分析顯示不同的單糖組成的兩個(gè)EPS(表1)。EPS是由一個(gè)葡萄糖和鼠李糖在摩爾比約為3:1,而EPS B包括葡萄糖和甘露糖在一個(gè)類似的比例EPS生產(chǎn)批量文化EPS生產(chǎn)批量文化幾個(gè)參數(shù),如碳源和濃度、pH值、溫度、被測試,以確定最優(yōu)的生產(chǎn)條件,每個(gè)每股收益。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果EPS A&B組成 對表格中英文翻譯：完成30C批次培養(yǎng)，沒有pH值控制在SDM補(bǔ)充葡萄糖(30 g liter1)作為碳源 氣相色譜-質(zhì)譜分析顯示兩種EPS的單糖組成是不同的。EPS A由葡萄糖和鼠李糖組成，其物質(zhì)的量之比近似為3：1，然而EPS B由葡萄糖和甘露糖組成，比例相似。 碳源的影響在增長和研究了EPS生產(chǎn)在SDM與葡萄糖、果糖、甘露醇(糖出現(xiàn)在橄欖果肉)和乳糖。濃度的碳源是liter1 30克,和溫度30C的孵化。表2總結(jié)了獲得的結(jié)果。甘露醇和果糖提供最高(2.4 109 cfuml1)和最低(1.5的ml1中引入108 cfu)可行的計(jì)數(shù),分別檢測無顯著差異之間甘露醇和葡萄糖(P - 0.01)。果糖和甘露醇支持降低EPS合成(P 0.01),而葡萄糖和乳糖更有利的糖來源EPS生產(chǎn)。合成高M(jìn)w EPS(EPS)似乎更依賴于碳源比低Mw EPS(EPS B)因?yàn)檩^大的變化中都檢測前(表2)。的比例較高,EPS聚苯B獲得與甘露醇、葡萄糖、和乳糖。然而,一個(gè)反比例wasith果糖(表2)。contituent單糖稍有不同,在兩EPS中觀察到不同碳源。葡萄糖含量范圍從71到80%,鼠李糖含量范圍從29%到,而在EPS一個(gè)葡萄糖含量從76%到不等,甘露糖含量范圍從24到30%在EPS B(數(shù)據(jù)沒有顯示)。對于后續(xù)的化驗(yàn),葡萄糖被選為碳源。確定任何效果的葡萄糖濃度、批處理文化在30C進(jìn)行72 h、聚合物合成實(shí)驗(yàn)結(jié)果碳源的影響對表頭翻譯：碳源的影響在增長和EPS生產(chǎn)L戊糖LPS26a對表中英語翻譯：在分批培養(yǎng)30C沒有pH值控制72 h在SDM補(bǔ)充30克的每個(gè)碳源1升；數(shù)據(jù)的平均值(n= 3)。在相同的列,是指在同一上標(biāo)字母沒有明顯差異(P大于 0.01)。數(shù)據(jù)的平均值(n =3)。在列,是指在同一上標(biāo)字母沒有明顯差異(P大于 0.01)。甘露醇和果糖分別提供了最高和最低的活菌數(shù)，但是甘露醇和葡萄糖之沒有檢測到明顯的差別。果糖和甘露醇導(dǎo)致較低的EPS合成，然而葡萄糖和乳糖則是更適合EPS產(chǎn)生的糖源。EPS A似乎比EPS B更依賴于特定碳源用甘露醇，葡萄糖和乳糖發(fā)酵得到的EPS A占有更高的比率。但是，用果糖發(fā)酵則得到相反的比率。用不同碳源發(fā)酵，兩種EPS的單糖組成的差異都很小。實(shí)驗(yàn)結(jié)果糖濃度的影響對表中英語翻譯：在分批培養(yǎng)30C不同pH值控制72 h在SDM補(bǔ)充葡萄糖作為碳源。數(shù)據(jù)的平均值(n =3)。在相同的列,是指在同一上標(biāo)字母沒有明顯差異(P大于0.01)。數(shù)據(jù)的平均值(n =3)。在列,是指在同一上標(biāo)字母沒有明顯差異(P大于 0.01)。1隨著糖源濃度增加，活菌數(shù)增多。2EPS隨著初始葡萄糖濃度的增加而增加。3葡萄糖濃度在5克每升時(shí)，EPS產(chǎn)量最大，2040g/L時(shí)，EPS產(chǎn)量持在很窄的范圍內(nèi)，且EPS A和EPS B的比率不受葡萄糖濃度的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果溫度的影響溫度影響兩種EPS的產(chǎn)量，從EPS A的產(chǎn)量可以看出溫度與EPS的產(chǎn)量呈負(fù)相關(guān)性。20的總多聚物量是25條件下的1.2倍、是30條件下的1.6倍。20條件下的EPS產(chǎn)量也比25和30條件下的多。相反的，通過20和25的顯著不同可以得出低溫降低活菌數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果pH的影響 翻譯圖底部：圖2。效應(yīng)溫度對增長和EPS生產(chǎn)byL。戊糖 LPS26。分批培養(yǎng)不受pH控制在SDM補(bǔ)充葡萄糖(30 g liter1)。這些數(shù)據(jù)意味著值(n =3)。在相同的變量(即。,EPS生產(chǎn)、細(xì)胞生長,EPS產(chǎn)量),是指在同一小寫字母沒有明顯差異(P 大于0.01)。翻譯圖底部：圖3。pH值的影響在增長和EPS生產(chǎn)byL。pentosus LPS26。分批培養(yǎng)20C的批處理文化在SDM upplemented與葡萄糖(30 g liter1)。這些數(shù)據(jù)意味著值(n =3)。在變量(即。,EPS生產(chǎn)、細(xì)胞生長,EPS產(chǎn)量),是指在同一小寫字母沒有明顯差異(P 大于0.01)。 EPS生產(chǎn)連續(xù)文化培養(yǎng)。連續(xù)培養(yǎng)被用來精確的研究影響的增長率在合成兩每股收益。考慮到生長條件,提供了最高水平的EPS在批處理文化中,一系列的稀釋率(D)(0.02到0.11 h1)是化驗(yàn)。正如預(yù)期的那樣,穩(wěn)步增長,按CFU 每毫升中引入,維持在不同的稀釋率從關(guān)鍵的增長率(0.12 h1)對應(yīng)于麥克斯計(jì)算從批處理文化不超過。最高的EPS生產(chǎn)(336.3毫克liter1)時(shí)發(fā)現(xiàn)D 0.02 h1(14%的max),和更高的稀釋率導(dǎo)致了一個(gè)相當(dāng)大的減少(圖4)。另一方面,是生產(chǎn)EPS B似乎并沒有影響到經(jīng)濟(jì)增長ratesince少量(50毫克liter1)是在dilutionrates生產(chǎn)從0.02到0.07不等h1。在最高的D值(92%的max),EPS B是很難發(fā)現(xiàn)(2.5毫克liter1)。因此,總EPS,主要由EPS, 對pH進(jìn)行調(diào)節(jié)可提高兩種EPS的產(chǎn)量，而且EPS B的效果尤為明顯pH5.0時(shí)可檢測出更多的活菌數(shù)。EPS產(chǎn)量在pH6.0 時(shí)明顯高于 pH5.0 和不調(diào)節(jié) pH的兩組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果最優(yōu)培養(yǎng)條件根據(jù)不同溫度和不同pH條件下的實(shí)驗(yàn)，確定了一個(gè)適合L. pentosus LPS26的生長條件用于生產(chǎn)EPS。L. pentosus LPS26培養(yǎng)于SDM中，葡萄糖含量30g/L，pH6.0，20培養(yǎng)。我們可以確定總EPS的產(chǎn)量為511mg/L。實(shí)驗(yàn)結(jié)果連續(xù)培養(yǎng)的影響翻譯圖表底部：圖4。稀釋率的影響在增長和EPS生產(chǎn)byL。pentosus LPS26在連續(xù)的文化。在20度下反應(yīng)了和pH值6.0在SDM補(bǔ)充葡萄糖(30 g liter1)。這些數(shù)據(jù)是兩個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)手段。 在D0.02 h-1時(shí)得到最大的EPS A產(chǎn)量，而更高的稀釋度會導(dǎo)致產(chǎn)量顯著下降。從0.02到0.07 h-1的稀釋度范圍內(nèi)，只得到很少的EPS B（50mg每升），因此，EPS B的產(chǎn)量似乎不受生長率的影響。極稀的稀釋度下（0.02到0.04 h-1），葡萄糖消耗量和乳酸鹽的生成量相似。在更高的D值（0.07到0.11 h-1）下，殘留的葡萄糖增多，而乳酸鹽濃度降低。在D0.02 h-1時(shí)，EPS產(chǎn)量最大（18.9mgEPS/g葡萄糖），單位體積產(chǎn)率Pv最大（7.08mgL1h1）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果牛奶培養(yǎng)基的影響翻譯表底部：圖5。增長和EPS生產(chǎn)EPS由L戊糖LPS26在純和混合奶制品的培養(yǎng)。是在25C培養(yǎng)72 h?！?sp)”表示牛奶補(bǔ)充葡萄糖(0.5%(wt /卷)和酵母提取物(0.5%(wt /卷)。這些數(shù)據(jù)意味著值(n =3)。在相同的變量(即。,EPS生產(chǎn)、細(xì)胞生長,EPS產(chǎn)量),是指在同一小寫字母沒有明顯差異(P 大于0.01)。 顯示一個(gè)最高(354.3毫克liter1)以最低的D值(0.02 h1)。剩余的葡萄糖檢測整個(gè)范圍的稀釋率。類似的糖消耗(ca。67%的初始濃度)和乳酸生產(chǎn)(150毫米)被觀察到低維(0.02到0.04 h1)。在更高的D值(0.07到0.11 h1),增加剩余葡萄糖和減少乳酸濃度檢測。有機(jī)酸除了乳酸,如酯(16.5毫米)和甲酸(4.1毫米),也發(fā)現(xiàn)在此范圍的稀釋率,根本變化在他們的濃度(數(shù)據(jù)沒有顯示)。應(yīng)該注意到,細(xì)菌生長,尤其是EPS生產(chǎn)尤其是高等在D 0.02 h1這D值提供了最大EPS收益率(18.9毫克EPS克葡萄糖1)和一個(gè)容積效率的7.08毫克升每升 生產(chǎn)EPS在牛奶 在牛奶和補(bǔ)加葡萄糖和酵母提取物的牛奶中，對LPS26和酸化的L.lactis進(jìn)行聯(lián)合培養(yǎng)。在牛奶培養(yǎng)基中，EPS產(chǎn)量很低，但主要產(chǎn)生的是EPS B。對牛奶培養(yǎng)基進(jìn)行補(bǔ)充后，不僅微生物量有了明顯的增加（LPS26 2.5108CFU ml-1和IPLA947 1.8109CFU ml-1）而且EPS B有了極大的增長，所以EPS總產(chǎn)量也有了明顯的增長（162.9mg/L）作為一個(gè)整體,補(bǔ)充牛奶signifcantly影響了EPS生產(chǎn)和可行的計(jì)數(shù)(P 大于 0.01)。不幸的是,沒有不同粘度的發(fā)酵牛奶在LPS26 eps生產(chǎn)菌株被觀察到存。分析討論這是,據(jù)我們所知,是第一個(gè)報(bào)道EPS所產(chǎn)生的應(yīng)變L戊糖。LPS26,分離在綠色橄欖發(fā)酵,生產(chǎn)一個(gè)莢膜聚合物組成兩個(gè)EPS,大小不一,糖成分。合成一種以上的EPS由LAB之前已經(jīng)報(bào)道過(11,18,26)。例如,兩種聚合物的生產(chǎn)8.5 *105年和4 *104 da和不同的糖成分進(jìn)行了觀察EP56植物乳桿菌(41)。 迄今特征葡萄糖和鼠李糖存在于EPS中，是通常組成許多EPS(22,34),其機(jī)制的合成糖核苷酸前和摻入到多糖鏈?zhǔn)潜娝苤?12)。相比之下,沒有數(shù)據(jù)在文獻(xiàn)中關(guān)于代謝路線,可以解釋整合甘露糖單位在人肝癌細(xì)胞(比如說EPS B)產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)室,盡管存在這種糖已經(jīng)描述(21)。一些作者建議檢測糖如甘露糖、阿拉伯糖,或者木糖是由于污染物質(zhì)來自細(xì)胞壁組件存在于介質(zhì)組成中,如甘露從酵母提取物或蛋白胨,干擾、分離、和結(jié)構(gòu)表征EPS(6)不過,使用一個(gè)媒介如SDM最小化了存在這些干擾組件(19)。此外,分析在未經(jīng)孕育的介質(zhì)進(jìn)行處理培養(yǎng)一樣，淡沒有顯示任何出現(xiàn)的聚合物(數(shù)據(jù)沒有顯示),確認(rèn)甘露糖是一個(gè)真正的組成EPS B。我們的結(jié)果顯示,有一個(gè)明確的培養(yǎng)條件 影響經(jīng)濟(jì)增長和EPS生產(chǎn)我們的結(jié)果顯示培養(yǎng)條件對L.pentosus的生長和產(chǎn)生EPS有明顯的影響，并能夠證明用分批發(fā)酵時(shí)EPS產(chǎn)量高達(dá)511mg/L。在分批培養(yǎng)中,一個(gè)相對較高的價(jià)值相比那些對人肝癌細(xì)胞產(chǎn)生的一般所說的LAB,用來這EPS生產(chǎn)范圍在150和600毫克每升(7)。然而,這是遠(yuǎn)離EPS生產(chǎn)數(shù)量的L戊糖rw - 9595 m(1275毫克每升),描述為“最高eps生產(chǎn)菌株在實(shí)驗(yàn)室(14)。在我們的應(yīng)變測試條件的不同影響生產(chǎn)兩個(gè)EPS,。 .碳源對L.pentosus LPS26的生長和產(chǎn)生EPS的量以及兩種EPS的比率有明顯的影響。葡萄糖提供EPS的高產(chǎn)量而且明顯更支持EPS A 的合成。相反，果糖更利于EPS B 的合成。L.pentosus LPS26的生長和EPS的產(chǎn)生無直接聯(lián)系，因?yàn)樽畲蠡罹鷶?shù)量與EPS 的最大產(chǎn)量并不相符。2772年顯然支持一個(gè)合成了EPSB相比之下,果糖青睞的合成eported EPSB.類似的觀察為L戊糖無性系種群。這產(chǎn)生了一個(gè)高M(jìn)w EPS和一個(gè)低Mw,比例為1:1在葡萄糖,低Mw EPS幾乎是唯一一個(gè)在果糖(18)。在我們的例子中,生產(chǎn)發(fā)生在L戊糖乳酸桿菌中某些解偶聯(lián)之間增長和EPS,因?yàn)樽畲罂尚械挠?jì)數(shù)(12到24小時(shí)后發(fā)現(xiàn)的反應(yīng))不相對應(yīng)最大生產(chǎn)(檢測到72小時(shí)后反應(yīng))。這也被描述在其他乳酸菌(15)和Lactococcus(23)物種。我們只能觀察到的微小的差別EPS ，-導(dǎo)使用不同的葡萄糖濃度。并,EPS產(chǎn)生興趣,也就是說。,EPS的數(shù)量產(chǎn)生葡萄糖消耗,最高和最低的與糖濃度有關(guān),這表明過多的糖的來源是不需要刺激EPS合成,但它甚至可能降低效率的合成。 最低糖濃度時(shí)葡萄糖的單位產(chǎn)EPS量是最高的，糖原的過量并不能刺激EPS的合成，只會降低合成的效率。每股收益的增加生產(chǎn)在較低的溫度下,正如發(fā)生在EPS A和B,每股收益似乎是一個(gè)共同的特點(diǎn),在這EPSproducing嗜中溫實(shí)驗(yàn)室生長條件不佳導(dǎo)致改進(jìn)EPS生產(chǎn)(10)。為了解釋這種現(xiàn)象,這也暗示了緩慢增長慢很多細(xì)胞壁的細(xì)胞表現(xiàn)出更多的生物合成、聚合物脂質(zhì)載體前體分子可供EPS生物合成(40)?？刂频膒H值也提高了EPS生產(chǎn)byL。pentosus LPS26。pH值的控制主要的合成了EPS B,盡管EPS生產(chǎn)也贊成。再次,某些解偶聯(lián)之間增長和EPS生產(chǎn)是觀察,由于最大可行的數(shù)量均達(dá)到5.0,和pH值6.0 pH值了最大的EPS生產(chǎn),與先前的報(bào)道(17,28)。在低溫條件下，發(fā)生了EPS和EPS乙，增加的EPS生產(chǎn)似乎是一個(gè)常見的功能，的中溫EPSproducing的LAB，其中最理想的生長條件改善EPS生產(chǎn)（10）。為了解釋這個(gè)，它一直建議，緩慢生長的細(xì)胞表現(xiàn)出慢得多細(xì)胞壁聚合物的生物合成和有更多的脂質(zhì)載體可用于EPS的生物合成（40）的前體分子?？刂苝H值也提高了EPS生產(chǎn)BYL。戊糖LPS26?？刂苝H值培養(yǎng)主要是合成的EPS乙，雖然EPS的生產(chǎn)也贊成。.pH值的控制同樣可增強(qiáng)L.pentosus LPS26產(chǎn)生EPS的能力。同時(shí)，我們再次觀察到了菌體生長和EPS的生產(chǎn)之間并不偶聯(lián)，因?yàn)閜H 5.0時(shí)菌體數(shù)量達(dá)最大而pH6.0時(shí)EPS的產(chǎn)量達(dá)到最大。（17，28）。 較低溫度時(shí)EPS A和EPS B的產(chǎn)量會增加，這是產(chǎn)EPS嗜溫乳酸桿菌的共有特征。認(rèn)為緩慢生長的細(xì)胞顯現(xiàn)出緩慢的細(xì)胞壁復(fù)合物的生物合成，會有更多的脂質(zhì)運(yùn)載體的前體分子在EPS的合成中被利用。在菌種中的LAB，其中最理想的生長條件改善EPS生產(chǎn)（10）。為了解釋這個(gè)，它一直建議，緩慢生長的細(xì)胞表現(xiàn)出慢得多細(xì)胞壁聚合物的生物合成和有更多的脂質(zhì)載體可用于EPS的生物合成（40）的前體分子?？刂苝H值也提高了EPS生產(chǎn)BYL。戊糖LPS26?？刂苝H值培養(yǎng)主要是合成的EPSB，雖然EPS的生產(chǎn)也同樣，觀察到一定生長和EPS生產(chǎn)之間的解偶聯(lián)，因?yàn)樽畲蟮幕罹鷶?shù)達(dá)到在pH 5.0，pH值為6.0導(dǎo)致最大的EPS生產(chǎn)，在以前的報(bào)告（17，28）。 通過連續(xù)培養(yǎng)得到的結(jié)果表明EPS A和EPS B有著不同的生產(chǎn)動(dòng)力學(xué)。EPS A主要在一個(gè)非常低的稀釋率（0.02h-1），有較大產(chǎn)率。而EPS B的生產(chǎn)并不受生長速率的影響。在一個(gè)低的D(0.020.04h-1)下，