特種蛋白的免疫測(cè)定及臨床意義ppt課件.ppt

特定蛋白的免疫測(cè)定及臨床意義 特定蛋白的免疫測(cè)定方法 基本原理 免疫沉淀反應(yīng)免疫透射比濁免疫散射比濁 免疫沉淀反應(yīng)的發(fā)展歷史 1897年 Kraus發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)液與其相應(yīng)抗血清混合后出現(xiàn)肉眼可見的沉淀反應(yīng)1902年Ascoli建立了環(huán)狀沉淀試驗(yàn) 1905年Bechhold將抗體混溶在明膠中 然后再將相應(yīng)特異抗原加于其上 抗原抗體的特異結(jié)合可在明膠中出現(xiàn)沉淀 1946年Oudin報(bào)道了試管單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) 1965年Mancini又提出了平板單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn) Grabar和Williams在1953年報(bào)道了免疫電泳 對(duì)流免疫電泳 火箭免疫電泳和免疫固定電泳 上述為經(jīng)典免疫沉淀試驗(yàn)發(fā)展階段 測(cè)定范圍窄 10 100 g ml 靈敏度低 繁瑣費(fèi)時(shí) 不能自動(dòng)化 免疫沉淀反應(yīng)的發(fā)展歷史 1959年 Schultze等報(bào)道了透射比濁法 Transmissionturbidimetry 1967年 Ritchie等報(bào)道了散射比濁法 nephelometry 1977年 Sternberg等進(jìn)一步發(fā)展建立了速率散射比濁法 Ratenephelometry 免疫比濁測(cè)定方法與免疫沉淀方法相比 靈敏度高 重復(fù)性好 測(cè)定范圍寬 已用于臨床體液特定蛋白含量的測(cè)定 現(xiàn)已有多種自動(dòng)化檢測(cè)儀器應(yīng)用于臨床檢驗(yàn) 尤其是免疫散射比濁測(cè)定 免疫透射比濁 基本原理 一定波長(zhǎng)光線通過抗原抗體反應(yīng)混合液時(shí) 被其中的免疫復(fù)合物 IC 反射或遮擋 吸收而減弱 在一定范圍內(nèi) 透射光被吸收的量與免疫復(fù)合物的量呈正比 后者又與相應(yīng)抗原和抗體的量呈函數(shù)關(guān)系 抗體量一定 即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線獲知抗原的量 由于要求抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量足夠 并且顆粒要足夠大 35 100nm 本法的測(cè)定靈敏度和準(zhǔn)確度相對(duì)較低 缺點(diǎn) 免疫散射比濁 基本原理 光線通過檢測(cè)溶液時(shí) 被其中所含的抗原抗體復(fù)合物折射而部分偏轉(zhuǎn) 產(chǎn)生散射光 根據(jù)雷利散射公式 在一定條件下 透射光與微粒濃度成正比 散射光與微粒濃度成反比 散射比濁可分為終點(diǎn)和速率散射比濁兩種 光源熒光 高壓汞燈發(fā)射 入射光波長(zhǎng) 355nm 散射夾角 為90 激光 氦氖燈 663nm 15 35 碘鎢光 碘鎢燈 400 500nm 70 免疫散射比濁儀器 得靈 貝克曼等美國(guó)THEBIDINGSITE MINIPEPH德國(guó)美創(chuàng) D dimer武漢艾爾夫深圳國(guó)賽 特定蛋白測(cè)定的臨床意義 D 二聚體 D dimer 生理學(xué)背景 纖維蛋白溶解系統(tǒng) FDP意義 肺栓塞和深V血栓及A血栓的診斷溶栓監(jiān)測(cè) 胱抑素C 特定蛋白測(cè)定的臨床意義 血液中含有多種功能蛋白 如載體蛋白 免疫球蛋白 抗體 酶 凝血因子等 其含量變化通常與多種疾病有密切關(guān)系 C反應(yīng)蛋白 CRP 免疫球蛋白及亞類 補(bǔ)體C3和C4 抗鏈球溶血素O ASO 類風(fēng)濕因子 RF 前白蛋白 Prealbumin 白蛋白 Albumin 微白蛋白 Microalbumin 2微球蛋白 2Microglobulin 1抗胰蛋白酶 1AT 銅藍(lán)蛋白 Caeruloplasmin 結(jié)合珠蛋白 Haptoglobin 轉(zhuǎn)鐵蛋白 Transferrin 載脂蛋白A APO A1 載脂蛋白B APO B 等 C反應(yīng)蛋白 CRP 超敏CRP 是一種由肝細(xì)胞合成的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白 是在炎癥和組織壞死疾病的急性期出現(xiàn)于病人血清中的一種糖蛋白 它能與肺炎雙球菌的莢膜成分C 多糖蛋白質(zhì)起反應(yīng) 故稱為C 反應(yīng)蛋白 具有激活補(bǔ)體和促進(jìn)粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞吞噬作用 正常值為 800 8000 g L CRP是急性時(shí)相反應(yīng)的一個(gè)極為靈敏的指標(biāo) 血漿中CRP濃度在急性心肌梗死 創(chuàng)傷 感染 炎癥 外科手術(shù) 腫癌浸潤(rùn)時(shí)迅速顯著地增高 可達(dá)正常水平的2000倍 結(jié)合臨床病史 有助于隨訪病程 特別在炎癥過程中 CRP可作為風(fēng)濕病 系統(tǒng)性紅斑狼瘡 白血病等的隨訪指標(biāo) 細(xì)菌和病毒感染鑒別 細(xì)菌感染急性期一般均增高 病毒感染多數(shù)不變 國(guó)外有研究認(rèn)為 CRP是引發(fā)心臟病的最強(qiáng)烈的危險(xiǎn)因素 其危險(xiǎn)程度是血液中過量膽固醇的2倍 CRP含量高的人患高血壓的危險(xiǎn)率比膽固醇高的人大1倍 如果炎癥和過高的膽固醇同時(shí)出現(xiàn)的話 那么患心臟病和中風(fēng)的危險(xiǎn)率比正常的人要高出9倍 由此可見 CRP含量高和患心臟病呈正相關(guān) 此外 最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn) 血中高濃度的CRP是結(jié)腸癌發(fā)病的危險(xiǎn)因素 并認(rèn)為CRP可能是結(jié)腸癌的一個(gè)早期標(biāo)志物 免疫球蛋白及亞類 其濃度在不同年齡段有所差異 在某些疾病情況下 這些指標(biāo)的濃度將出現(xiàn)升高或降低 從而具有疾病診斷價(jià)值 IgG 正常情況下 臍血7 6 17g L 新生兒7 0 14 8g L 0 5 6月3 10 0g L 6月 2歲5 12g L 2 6歲5 13g L 6 12歲7 16 5g L 12 16歲7 15 5g L 成人6 16g L 在慢性肝病 亞急性或慢性感染 結(jié)締組織疾病 骨髓瘤 無癥狀性單克隆 病等 出現(xiàn)增高 在遺傳性或獲得性抗體缺乏癥 混合性免疫缺陷綜合癥 選擇性 缺乏癥 蛋白丟失性腸病 腎病綜合癥 強(qiáng)直性肌營(yíng)養(yǎng)不良 免疫抑制劑治療等降低 免疫球蛋白及亞類 IgA 正常情況下 臍血0 50mg L 新生兒0 22mg L 0 5 6月3 820mg L 7月 2歲140 1080mg L 2 6歲230 1900mg L 6 12歲290 2700mg L 12 16歲810 2320mg L 成人760 3900mg L 在慢性肝病 亞急性或慢性感染性疾病 如結(jié)核 真菌感染等 自身免疫性疾病 如 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 囊性纖維化 家族性嗜中性粒細(xì)胞減少癥 乳腺癌 腎病 骨髓瘤等情況下增高 在遺傳性或獲得性抗體缺乏癥 免疫缺陷病 選擇性 缺乏癥 無 球蛋白血癥 蛋白丟失性腸病 燒傷等 抗 抗體現(xiàn)象 免疫抑制劑治療 妊娠后期等情況下降低 免疫球蛋白及亞類 IgM 正常情況下 臍血40 240mg L 新生兒50 300mg L 0 5 6月150 1090mg L 6月 2歲430 2390mg L 2 6歲500 1990mg L 6 12歲500 2600mg L 12 16歲450 2400mg L 成人400 3450mg L 在胎兒宮內(nèi)感染 新生兒 癥群 慢性或亞急性感染 瘧疾 傳染性單核細(xì)胞增多癥 支原體肺炎 肝病 結(jié)締組織疾病 巨球蛋白血癥 無癥狀性單克隆 病等情況下增高 在遺傳性或獲得性抗體缺乏癥 混合性免疫缺陷綜合癥 選擇性 缺乏癥 蛋白丟失性腸病 燒傷 抗 抗體綜合癥 混合性冷球蛋白血癥 免疫抑制劑治療等情況下降低 IgG和IgA亞類 IgG有四種不同的亞類 IgA有兩種不同的亞類 每種亞類具有不同的功能 其含量過低或過高或者缺陷會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的免疫功能低下 造成相應(yīng)的疾病的發(fā)生 兒童常見的反復(fù)呼吸道感染 經(jīng)常腹瀉 發(fā)育遲緩等癥狀以及經(jīng)常發(fā)生的許多呼吸道疾病如中耳炎 鼻竇炎 肺炎 氣管炎 慢性阻塞性肺疾病 支氣管擴(kuò)張以及哮喘等疾病 往往都與IgG或IgA亞類缺陷有關(guān) 補(bǔ)體C3和C4 正常情況下 C3 1C 球蛋白 800 1550mg L C4 1E 球蛋白 130 370mg L 血液補(bǔ)體含量與活度在許多病理情況下都會(huì)發(fā)生變化 所以 臨床上應(yīng)動(dòng)態(tài)觀察補(bǔ)體水平的變化 補(bǔ)體含量下降并不一定代表免疫功能障礙或免疫缺陷 因?yàn)樵谌毖?凝固性壞死和中毒性壞死時(shí) 組織能釋放較多的蛋白分解酶 導(dǎo)致補(bǔ)體溶血活度和補(bǔ)體組分的下降 血補(bǔ)體濃度升高 見于各種炎癥性疾病及阻塞性黃疸 急性心肌梗塞 潰瘍性結(jié)腸炎 糖尿病 急性痛風(fēng) 急性和急性甲狀腺炎 急性風(fēng)濕熱 皮肌炎 多發(fā)性肌炎 混合性結(jié)締組織病 結(jié)節(jié)性動(dòng)脈周圍炎等 抗鏈球溶血素O ASO A群溶血性鏈球菌的代謝產(chǎn)物刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體 ASO升高見于A群溶血性鏈球菌感染及感染后免疫反應(yīng)所致的疾病 如 感染性心內(nèi)膜炎 扁桃體炎 風(fēng)濕熱 鏈球菌感染后急性腎小球腎炎 ASO在溶血性鏈球菌感染后一周開始升高 4 6周達(dá)高峰 并持續(xù)數(shù)月 故ASO增高提示曾有溶血性鏈球菌感染 但不一定是近期感染 鏈球菌感染后ASO動(dòng)態(tài)升高 結(jié)合CRP升高及血沉陽性 有利于風(fēng)濕熱的診斷 高膽固醇血癥 巨球蛋白血癥 多發(fā)行骨髓瘤患者 ASO也可升高 類風(fēng)濕因子 RF RF是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體 RF可分為IgM IgG IgA IgE四型 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 RA 患者的陽性率為70 80 其中尤其以病變廣泛 病情嚴(yán)重 病程長(zhǎng) 活動(dòng)期及有關(guān)節(jié)外病變者的陽性率高 滴度高并長(zhǎng)久存在 除類風(fēng)濕外 還見于正常人和其他疾病 例如正常人 尤其老年人 陽性率占 各種感染性疾病如乙肝 結(jié)核病 亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎和慢性支氣管炎等 結(jié)締組織病如紅斑狼瘡 干燥綜合征 皮肌炎 血管炎 硬皮病 預(yù)防接種后以及某些惡性疾病 在這些疾病中 的陽性率可達(dá) 因此 在RA的診斷上 一般認(rèn)為RF只有參考價(jià)值而無特異性診斷價(jià)值 前白蛋白 Prealbumin 為肝內(nèi)合成的糖蛋白 血中半壽期極短 故可作為營(yíng)養(yǎng)不良的診斷 檢測(cè)及肝病的診斷 作為早期肝功能操作指示 比ALT特異 比白蛋白敏感 正常參考值范圍 成年男女為250 400mg L 兒童125 200mg LPA是負(fù)性急性時(shí)相蛋白 在炎癥和惡病質(zhì) 如惡性腫瘤等 中 CRP和酸性糖蛋白升高時(shí) PA則可見迅速降低 如果前白蛋白繼續(xù)保持低水平或進(jìn)一步降低 提示預(yù)后不良 在腸道或腎臟的耗蛋白性病變時(shí) 血清PA濃度也會(huì)相隨降低 何杰金氏及青春發(fā)育期少年 其血清PA濃度升高較顯著 白蛋白 Albumin 正常值 35 55g L高 脫水和血液濃縮 降低 白蛋白合成障礙 營(yíng)養(yǎng)不良 肝臟疾病 慢性消化道疾病 白蛋白消耗或丟失過多 消耗性疾病 惡病質(zhì) 腎病綜合征 急性大出血 嚴(yán)重?zé)齻?腹水形成等 其他 妊娠晚期 遺傳性無白蛋白血癥 2微球蛋白 2Microglobulin 2 微球蛋白是體內(nèi)有核細(xì)胞產(chǎn)生的一種小分子球蛋白 正常人血液中 2 微球蛋白濃度很低 血液中升高 腎小球?yàn)V過功能下降 炎癥或腫瘤 尿液中升高 腎小管受損時(shí) 對(duì) 2 微球蛋白 2 微球蛋白的重吸收減少 尿液中 2 微球蛋白排出增加 測(cè)定時(shí)升高 1抗胰蛋白酶 1AT 1 抗胰蛋白酶是一種特異性抑制絲氨酸蛋白水解酶的蛋白酶抑制物 血液中正常值 2 3g L 缺陷通常有遺傳原因 濃度低于正常水平的30 40 時(shí) 肝臟和肺部疾病相關(guān)的臨床表現(xiàn) 肝硬化 支氣管擴(kuò)張 胰腺纖維化 才會(huì)明顯出現(xiàn) 兒童通常受到肝臟疾病影響 而成人更多的為肺部疾病 DIC 甲亢和十二指腸潰瘍等 血中 1AT可減少 升高大多數(shù)是由于感染或炎癥的急性期反應(yīng)引起 這種情況下 1 抗胰蛋白酶濃度較正常情況3倍升高 在妊娠和口服避孕藥后 1 抗胰蛋白酶也可升高 銅藍(lán)蛋白 Caeruloplasmin CER 屬 2糖蛋白 是鐵氧化還原酶 又稱鐵氧化酶 由肝臟合成 含6 8銅原子而呈藍(lán)色 故名銅藍(lán)蛋白 升高者有妊娠 服雌性激素和甲狀腺素者 壞死 傳染 新近感染的一種指標(biāo) 惡性腫瘤 矽肺等 CER是塵肺最靈敏的早期診斷指標(biāo) 早于肺部X線片的改變 降低者有腎病綜合癥 低蛋白血癥 營(yíng)養(yǎng)不良 胃腸道患者 急性肝炎 嚴(yán)重肝損傷 多發(fā)性硬化等 Wilson氏病 肝竇狀核變性 是一種遺傳性病變 CRE明顯減少 轉(zhuǎn)鐵蛋白 Transferrin Tf Tf是一種能結(jié)合三價(jià)鐵的糖蛋白 是血漿中主要的含鐵蛋白質(zhì) 代表了機(jī)體鐵的貯量 它負(fù)責(zé)運(yùn)輸由消化道吸收的鐵和由紅細(xì)胞降介釋放的鐵 正常值 成人為2 20 4 0g L 新生兒為1 30 2 75g L降低可見于如下疾患 急性肝炎 開始 后 肝病 重癥肝炎 肝硬化 慢性肝 慢遷肝 急肝 腎病綜合癥 蛋白丟失癥 甲狀腺疾患 增高可見于 妊娠 缺鐵性貧血 急肝早期 結(jié)合珠蛋白 Haptoglobin 結(jié)合珠蛋白又稱觸珠蛋白 主要由肝臟合成 降低 血管內(nèi)溶血時(shí) 結(jié)合珠蛋白與紅細(xì)胞溶解釋放出來的血紅蛋白相結(jié)合 結(jié)合珠蛋白 血紅蛋白復(fù)合體很快就會(huì)從血中清除 從而導(dǎo)致結(jié)合珠蛋白濃度下降 嚴(yán)重溶血甚至可消耗光結(jié)合珠蛋白 各種溶血時(shí)血清結(jié)合珠蛋白均