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機能學實驗設計大綱實驗名稱:觀察不同抗高血壓藥對腎血管性高血壓的降壓作用課題來源:自選設計班級:04級臨本乙班設計人員:王仕全 廖周 唐浪 曾雷設計日期:2006.10.10指導老師:張曉 榮成 成都醫(yī)學院實驗技術教研室2006年制一、實驗設計的目的與意義,國內外研究現(xiàn)狀,存在的問題,解決問題的思路。目的與意義: 通過本實驗驗證聯(lián)合用藥能有效治療高血壓且副作用少,從而改變單一用藥副作用多易反彈。國內外研究現(xiàn)狀:(1)高血壓是一種嚴重危害人體健康影響生活質量的一種疾病,臨床表現(xiàn)有關頭痛且多發(fā)生在后腦部。還可有頭暈,頭脹,頸部扳住感,耳鳴,眼花,健忘,失眠,煩悶。乏力,四肢麻木,心悸等。也是造成肢體偏癱,心力衰竭,腦梗塞,腦出血,腎衰竭的重要原因。臨床上由高血壓發(fā)生致殘致死的病例屢見不鮮,故稱之為“隱形殺手”1。(2)高血壓最常見的疾病之一,按1991年全國高血壓抽樣調查的患病率和1990年普查城鄉(xiāng)男女所占百分比計算,我過1574歲年齡段中,城市男女患高血壓人數(shù)分別為1700和1300萬,農村分別為3500萬和3000萬。合計全國約有9500萬名高血壓病人,遠遠超過英國,法國和德國,加拿大等西方國家的一國人口總數(shù)。1991年我國高血壓患病率比1979-1980約增加25%,并且此種患病率增加的趨勢仍在繼續(xù)。與高血壓相關的人腦血管疾病,已在我國很多地方成為超過世界腫瘤的最主要殺手,它對國民經濟和人民生命財產造成的巨大損失難以計算;已成為我國治病防治工作面臨的巨大挑戰(zhàn)2。(3)美國FDA和美國NIH的全組顧問委員會負責人認為,絕大多數(shù)基因治療臨床實驗沒有明顯的和不可預測的風險,基因治療的主流是好的,是具有廣闊前景的領域,應該堅持而不放棄。2000年3月,為進一步加強臨床監(jiān)察力度,F(xiàn)DA和NIH公布了。兩項新措施:制定基因治療臨床試驗監(jiān)察計劃和定期開辦基因治療安全性專題研討會。相比之下,腺病毒作為載體受到廣泛關注,因為腺病毒DNA不整合到宿主細胞基因中,對人體無遺傳毒性。自從FDA1995年批準重組腺病毒用于人體實驗至今,沒有任何使用腺病毒而引發(fā)腫瘤及其它遺傳性疾病的報道3。(4)目前有效的降壓藥物中,推薦使用CCB、ACE1或ARB及利尿劑、B-阻斷劑在高血壓藥物治療的地位逐漸下降。高血壓指南中所推薦的聯(lián)合用藥治療再一次被臨床試驗所證實。ASCOT-BPLA研究首次證明了一種優(yōu)化組合方案在長期高血壓治療中的益處。藥物干預可以預防和推遲高血壓的發(fā)生,我國近1億人處于高血壓前期,這個數(shù)據(jù)遠高于美國。如果采用一種方法、預防或推遲這一人群發(fā)展高血壓,將對我們經濟尚不發(fā)達的國家具有重要意義。鹽替代法可以對高血壓進行敢于,CSSS研究證明,利用鹽替代法可以降血壓4。存在的問題:目前高血壓患者漸趨增多,且市場上抗高血壓藥種類繁多。由于缺乏相關知識,很多高血壓患者出現(xiàn)濫用藥物的情況,為了尋找更好的藥物,我們設計此實驗驗證是否聯(lián)合用藥優(yōu)于單一用藥。解決問題的思路:復制腎性高血壓模型,采用注射不同的降壓藥觀察并記錄用藥前后血壓值,本實驗采用自身對照。參考文獻:1.北京諾華制藥有限公司。健康田地。挑戰(zhàn)高血壓2 黃峻。王海燕主編。高血壓現(xiàn)代治療。前言,江蘇科學技術出版社。20003 藥立波主編。馮作化。周春燕副主編。醫(yī)學分子生物學?;蛑委?。基因治療現(xiàn)狀。人民出版社。第2版4中國醫(yī)藥雜志 2006第8卷第4期雙月刊 269 2715腎臟病與透析移植雜志 2006.4 第15卷第2期 144-1516藥理學 第6版 楊寶峰 蘇定馮 244-2547內科學 第6版 葉任高 陸再英 260-261二、實驗設計方案(實驗設計目標,擬解決的主要問題, 實驗動物設計,實驗專業(yè)設計,實驗統(tǒng)計設計,實驗方法設計,可行性分析,預期結果,實驗設計工作時間安排)。(一)實驗設計目標,擬解決的關鍵問題 設計目標:探討聯(lián)合抗高血壓藥和單一用抗高血壓藥對腎性高血壓的降壓情況。并進一步了解聯(lián)合用降壓藥是否優(yōu)于單一用藥,從而為臨床治療高血壓提供依據(jù)。擬解決的主要問題:復制腎血管性高血壓模型。對腎血管性高血壓模型進行分組與實驗結果分析。(二)實驗設計1、實驗動物設計我們選用家兔作為實驗動物,有以下幾點理由:(1)、家兔易得到,容易飼養(yǎng),在科研工作中被廣泛利用。(2)、腎血管性高血壓升高明顯,持久和恒定,較易反映出藥物的降壓作用。(3)、形成高血壓所需要的時間短,工作量較少。2、實驗專業(yè)設計 選用家兔作為實驗動物,復制腎血管性高血壓模型后分別注射不同的降壓藥觀察血壓降壓情況來判斷藥物的療效,觀察并記錄結扎腎動脈前后的血壓(mmHg)及時間(h)等實驗指標。 3、實驗統(tǒng)計設計 實驗統(tǒng)計設計中應始終貫徹隨機、對照、重復三大原則。(1)隨機:選正常成年健康體重相近的家兔30只,將30只家兔按體重由小變大編號后,從隨機數(shù)字表中查取隨機數(shù)字,依次抄錄于家兔編號下。具體方法:動物編號為130號,隨機數(shù)字從11行第一個數(shù)字開始接著抄寫30個,按照能被3除的規(guī)律:不余到A組,余1到B組,余2到 C組 .每組10只。 (2)對照:本組實驗采用自身對照, 在前面的專業(yè)設計里已經提及。(3)重復:本實驗采用的是每實驗小組有 10只家兔,具有一定的重復性。(4)統(tǒng)計數(shù)據(jù)收集:本實驗搜集計量資料,初步確定對各組實驗數(shù)據(jù)的比較分為組內和組間比較,分別采用均數(shù)和方差分析。表1家兔腎動脈高血壓模型復制(血壓變化值) 動物序號 結扎前血壓值(mmHg) 結扎后血壓值(mmHg) 1 2 29 30 均數(shù) X1 X2表2用藥前后血壓及差值記錄 序號 A組B組C組注射利尿劑(n=10) 注射卡托普利(n=10) 聯(lián)合注射利尿劑與卡托普利(n=10) 用藥前 用藥后 差值 用藥前 用藥后 差值 用藥前 用藥后 差值 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 均數(shù) Ua1 Ua2 A Ub1 Ub2 B Uc1 Uc2 C 方差 Sa2 Sb2 Sc2 (5)統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析表1兩樣本采用均數(shù)比較,再采用t檢驗,如X1與X2兩均數(shù)的比較,其方法如下:(1) 建立檢驗假設 H0:=(兩組血壓總體均值相等) H1:、不等或不全相等,0.05。(2)計算統(tǒng)計量 X=(X1+X2+X3+Xn)/n =(Xi-X)2/(n-1) t=(x-u)/Sx ( 3 ) 查t值表,確定P值,得出結論:若且、差值為20mmHg時,說明高血壓模型復制成功。 本實驗采用計量資料來測定各種指標的數(shù)值,所有數(shù)據(jù)均采用平均數(shù)標準差(s)表示,三組間實驗數(shù)據(jù)比較行完全隨機單因素方差分析,組間血壓差值兩兩比較行q檢驗, A.B.C組內均數(shù)兩樣本比較采用t檢驗,均以0.05作為顯著性檢驗水準。實驗數(shù)據(jù)記錄如表2。三組間實驗數(shù)據(jù)比較行完全隨機單因素方差分析,如各組血壓總體均值的比較,其方法如下:(1)、建立檢驗假:H0:=(各組血壓總體均值相等)。H1:、不等或不全相等,0.05。(2)計算統(tǒng)計量 利用統(tǒng)計學專業(yè)軟件SPSS做One-way ANOVA 。(3) 查F值表,確定P值,得出結論。4、實驗方法設計實驗技術路線家兔B組實驗組C組實驗組水A組實驗組 聯(lián)合注射利尿劑與卡托普利注射利尿劑注射卡托普利記錄血壓值記錄血壓值記錄血壓值 統(tǒng)計并分析數(shù)據(jù) 實驗技術方法(1)隨機抽樣:隨機30只正常的家兔,并分別編號,再隨機平分成三組,并稱重 (2)實驗分組:如統(tǒng)計設計所述。(3)實驗手術:取兔,稱重(嬰兒秤)后固定于兔臺上,剪去頸部長毛(換藥碗裝水)。用1%普魯卡因局麻(大約三公分長,不同點局麻),切開頸部皮膚(輕點,不要損傷氣管和血管),呈鈍形分離出氣管(分離干凈),做倒T形切口,插入氣管插管并結扎固定,分離頸外靜脈,靜脈插管。(4)模型復制:a.在距脊椎1-2cm處,從右側肋骨下緣往下切開皮膚,切口長4-5cm.b.切開皮下組織和腰背筋膜,并在內斜肌筋膜與外斜肌筋膜連接出切開內斜肌筋膜,即可見腎周圍組織。用手摸到腎臟及腎盂部分的腎動脈,分離出腎動脈。c.用線將腎動脈結扎,造成腎動脈部分狹窄。為了便于控制狹窄程度,結扎時在血管表面放置一相當于腎動脈直徑1/2的鐵絲,結扎后取出鐵絲。d.當?shù)谝淮问中g引起的血壓升高下降到正常后,進行第二次手術(左側)方法同第一次:注射降壓藥:(按照分組情況進行操作);觀察實驗兔的血壓變化情況并記錄 。(三)可行性分析:1、家兔易得到,容易侍養(yǎng),在科研工作中被廣泛利用。2、腎血管性高血壓升高明顯,持久和恒定,較易反映出藥物的降壓作用。3、形成高血壓所需要的時間短,工作量較少。4、手術器材和設備均為實驗室常用,手術方法我們也相對熟練。(四)預期效果:1、腎血管性高血壓升高明顯,持久和恒定。2、單一用藥有降壓作用,但作用不很理想。 3、聯(lián)合注射利尿劑與卡托普利比其它兩組降壓作用明顯且穩(wěn)定。(五)實驗設計工作時間安排:1、共計1D 完成藥物準備。2、共計 1W完成實驗動物模型制備和取材 3、共計0.5D完成統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析4、總共實驗在一周多完成。三、完成實驗的條件1、儀器設備情況:本實驗

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