（有機(jī)化學(xué)專業(yè)論文）優(yōu)化大觀霉素提取工藝.pdf

山東人學(xué)碩l 學(xué)位論文 u m l m p a m o i l m 3 h 符號(hào)說(shuō)明 效價(jià) 含量 壓力 濃度 流量 i i i 附件一 原創(chuàng)性聲明 本人鄭重聲明 所呈交的學(xué)位論文 是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下 獨(dú)立進(jìn) 行研究所取得的成果 除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外 本論文不包含任何 其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果 對(duì)本文的研究作出重要貢 獻(xiàn)的個(gè)人和集體 均已在文中以明確方式標(biāo)明 本聲明的法律責(zé)任由本人 承擔(dān) 論文作者簽名 蟬日期 嗶 關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明 本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留 使用學(xué)位論文的規(guī)定 同意學(xué)校保 留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版 允許論文被查閱 和借閱 本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān) 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索 可以采用影印 縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本 學(xué)位論文 保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定 論文作者簽名 乏拉導(dǎo)師簽名 繼日期 之乏 竺 山東人學(xué)碩十學(xué)位論文 摘要 大觀霉素 s p e c t i n o m y c i n 又稱奇放線菌素或壯觀菌素 a c t i n o s p e c t a c i n 是一種堿性水溶性抗生素 這是一族由氨基環(huán)醇 為主體和氨基糖甙類以甙鍵結(jié)合而成的抗生素 大觀霉素是一種廣譜抗生素 對(duì)革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性菌均有 抗菌作用 l 臨床上它專門治療奈瑟氏林球菌 n e i s s e r i ag o n o r r h o e a e 引發(fā)的感染 目前大觀霉素以代替青霉素作為治療急性淋病的首選藥 物 此外 大觀霉素的抗菌譜廣和低毒性也使它作為飼料添加劑 以 提高農(nóng)作物產(chǎn)量或促進(jìn)牲畜生長(zhǎng) 近年來(lái) 由于性傳播疾病在我國(guó)呈上升趨勢(shì) 其中以淋病的發(fā) 病率最高 相對(duì)于渠道復(fù)雜而且價(jià)格昂貴的同類藥品 大觀霉素更具 有安全和價(jià)格優(yōu)勢(shì) 因而國(guó)內(nèi)臨床上的需求量不斷增加 雖然大觀霉 素以實(shí)現(xiàn)了國(guó)產(chǎn)化 但基礎(chǔ)理論研究和生產(chǎn)水平與國(guó)外還存在差距 要開(kāi)拓市場(chǎng) 實(shí)現(xiàn)大觀霉素走性國(guó)際化 除了加快國(guó)外的g m p 和f d a 認(rèn)證步伐外 還需要提高產(chǎn)品自身的質(zhì)量 綜上 本文在提高大觀霉素提取過(guò)程中的產(chǎn)品質(zhì)量和收率方面 作了以下三個(gè)方面的工作 一 優(yōu)化了大觀霉素發(fā)酵液的酸化p h 值 使得發(fā)酵液中的蛋 白雜質(zhì)去除更加徹底 而且有利于酸化液過(guò)濾 濾餅中的殘留效價(jià)進(jìn) 山東人學(xué)壩 學(xué)位論文 一步降低 提高了過(guò)濾收率和濾液的質(zhì)量 有利于下一步離子交換樹(shù) 脂的吸附 二 利用l k 1 2 離子交換樹(shù)脂代替l k 1 l 樹(shù)脂 提高了樹(shù)脂 的吸附容量 解析液效價(jià)升高 灰分降低 在提高解析液質(zhì)量的同時(shí) 交換收率提高了3 2 三 3 k d 超濾膜的試驗(yàn) 3 k d 分子量陶瓷膜對(duì)大觀霉素中間 體中含有的大分子有機(jī)雜質(zhì)去除效果良好 在應(yīng)用于生產(chǎn)后可大副降 低脫色加碳量 以減少大觀霉素的損失 降低原輔料消耗 去除雜質(zhì) 的效果特別明顯 降低脫色液或濃縮液中的熱原和濁度的效果非常顯 著 可徹底解決原生產(chǎn)工藝難解決的濁度 熱原及成品純度等問(wèn)題 關(guān)鍵詞 大觀霉素 提取 樹(shù)脂 結(jié)晶 2 山東大學(xué)碩i 學(xué)位論文 a b s t r a c t s p e c t i n o m y c i n i sak i n d o fa n t i b i o t i c sw i t ha l k a l e s c e n c ea n d w a t e r s o l u b i l i t y i ti sa l s oc a l l e da c t i n o s p e c t a c i n i ti saf a m i l yo f a n t i b i o t i c s w h i c hi s m a d eu po fa m i n o c y c l i t o l t h em a i nb o d y a n d a m i n o s u g a r g l y c o s i d ec l a s s g l y c o s i d eb o n d s p e c t i n o m y c i ni s ab r o a ds p e c t r u ma n t i b i o t i c w h i c hh a sa ne f f e c t o fb e i n g a g a i n s tg r a mn e g a t i v ea n dg r a mp o s i t i v eb a c t e r i u m i t s p e c i a l i z e di nt r e a t i n gi n f l a t i o nc a u s e db yn e i s s e r i ag o n o r r h o e a ei n c l i n i c r i g h tn o ws p e c t i n o m y c i ni st h ef i r s tc h o i c eo ft r e a t i n ga c u t e g o n o r r h e a t a k i n gp l a c eo fp e n i c i l l i n i na d d i t i o n b r o a ds p e c t r u m a n t i b i o t i ce f f e c ta n dl o w t o x i c i t ym a k es p e c t i n o m y c i nb e c o m eaf e e d a d d i t i v e t op r o m p tt h et u r n o u to fc r o pa n dt h eg r o w t ho fl i v e s t o c k i nt h er e c e n ty e a r s t h es e x o r i g i n a t e dd i s e a s ei sr o a r i n g i nw h i c h t h eg o n o r r h e at a k et h eb i g g e s tp a r t c o m p a r i n gw i t ht h es i m i l a rb u t u n c e r t a i na n de x p e n s i v em e d i c a m e n t s p e c t i n o m y c i nh a st h ea d v a n t a g e o fs a f e t ya n db e i n gc h e a p s ot h er e q u i r e m e n to fs p e c t i n o m y c i ni s r i s i n g n o ws p e c t i n o m y c i nc a nb ep r o d u c e dd o m e s t i c a l l y b u tw es t i l l f a l lb e h i n dw i t hf o r e i g n p r o d u c e r si n b a s i ct h e o r yr e s e a r c h i n ga n d p r o d u c t i o nl e v e l i no r d e rt oe x p e n dt h em a r k e ta n dr e a l i z et h e i n t e r n a t i o n a l i z a t i o no fp r o d u c t i o n b e s i d e so fa t t a i n i n gt h ec e r t i f i c a t e o fg m pa n df d ai nf o r e i g nc o u n t r i e s w en e e dt o p r o m p tt h eq u a l i t y o fo u rp r o d u c t s a b o v e t h i sa r t i c l ef o c u s e so nt h r e ep a r t s 1 t oo p t i m i z et h ea c i d i t yo fp ho fs p e c t i n o m y c i n f e r m e n t a t i o nb r o t h i no r d e rt or e m o v et h ep r o t e i ni m p u r i t ym u c hm o r e c o m p l e t e l y i ti sa l s oi nf a v o ro fa c i d i f y i n gt h ef e r m e n t a t i o nb r o t ha n d r e d u c i n gt h et i t e ro fl e f t o v e ro ff i l t e rc a k es oa st op r o m p tt h ey i e l d 2 t o m a k el k 12i o n i ce x c h a n g i n gr e s i nt a k ep l a c eo f l k i1r e s i n i no r d e rt oe n h a n c et h ev o l u m eo fa d s o r p t i o na n dt h et i t e r 山東大學(xué)碩十學(xué)位論史 o fr e s o l v i n gs o l u t i o na n dr e d u c et h ea s h w h e ne n h a n c i n gt h eq u a l i t y o fr e s o l v i n gs o l u t i o n t h ee x c h a n g i n gy i e l dp r o m p t s3 2 3 3 k du l t r a f i l t r a t i o nf i l mt e s t 3 k dm 0 1 e c u l a rw e i g h t c e r a m i c sf i l mc a nr e d u c et h em a e r o m o l e c u l eo r g a n i ci m p u r i t yo ft h e i n t e r m e d i a t eo fs p e c t i n o m y c i ne f f e c t i v e l y w h e na p p l i e dt op r o d u c t i o n i tc a nr e d u c et h ea m o u n to ft h ec a r b o ni nd e e l o r i n gs o a st or e d u c et h e l o s so fr a wm a t e r i a l sa n ds u p p l e m e n t a r ym a t e r i a l s i th a sad i s t i n c t i v e e f f e c to fr e d u c i n gi m p u r i t ya n dl o w e r i n gt h ep y r o g e na n dt u r b i d i t yo f d e c o l o r i n gs o l u t i o na n dc o n c e n t r a t i n gs o l u t i o n t h e r e b y t h ep r o b l e m s o fp y r o g e n t u r b i d i t y p u r i t yo ff i n i s h e d p r o d u c t s i nt h e o r i g i n a l l y c r a f t so fp r o d u c t i o na r es o l v e dc o m p l e t e l y k e y w o r d s p e c t i n o m y c i n e x t r a c t i o n r e s i n c r y s t a l 4 山東人學(xué)碩i 學(xué)位論文 第一章前言 一 大觀霉素簡(jiǎn)介 大觀霉素 s p e c t i n o m y c i n 又稱奇放線菌素或壯觀菌素 a c t i n o s p e c t a c i n 是一種堿性水溶性抗生素 最初的文獻(xiàn)報(bào)道將它 歸屬為氨基壞醇類抗生素 a m i n o c y c l i t 0 1 八十年代后重新劃分為 氨基糖甙類抗生素 a m i n o g l y c o s i d e 這是一族由氨基環(huán)醇為主體和 氨基糖甙類以甙鍵結(jié)合而成的抗生素 所以也有學(xué)者特別指出該類抗 生素嚴(yán)格定義應(yīng)為 氨基環(huán)醇一氨基糖甙類抗生素 中國(guó)藥典2 0 0 0 年版 美國(guó)藥典2 4 版均收錄了該藥物 1 9 6 0 年 美國(guó)a b b o t t 實(shí)驗(yàn)室和u p j o h n 公司的m a s o n 等人第一 次從大觀鏈霉菌中提取出大觀霉素 大觀霉素肌肉注射吸收快 易于 腸道吸收 一般制成無(wú)菌懸浮注射劑 臨床使用采用大觀鹽的形式 最初為硫酸鹽 分子式為c l4 h 2 4 n 2 0 7 h 2 s 0 4 4 h 2 0 七十年代初研制 出更適于懸浮注射的溶解度更大的鹽酸鹽 鹽酸大觀霉素為米白色晶 體 分子式為c 1 4 h 2 4 n 2 0 7 2 h c i 5 h 2 0 分子量為4 9 5 3 5 結(jié)構(gòu)如圖 1 一l 所示 山東大學(xué)碩 學(xué)位論文 h n o 圖1 1 赫酸大觀霉素結(jié)構(gòu)式 f i 9 1 1 s t r u c t u r eo fs d p c h 3 h 2 h c l 5 h 2 0 大觀霉素是一種廣譜抗生素 對(duì)革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性菌均 有抗菌作用 臨床上它專門治療奈瑟氏林球菌 n e i s s e r i a g o n o r r h o e a e 引發(fā)的感染 近年來(lái) 由于抗淋病藥物的非正規(guī)使用 及林球菌通過(guò)質(zhì)粒和 或 染色體介導(dǎo)的耐藥菌株的同益流行率日趨 增高 以前首選的青霉素因國(guó)內(nèi)流行的淋菌株對(duì)其耐藥率己達(dá)5 3 5 8 l 而被逐漸淘汰 目前大觀霉素以代替青霉素作為治療急性淋病 的首選藥物 此外 大觀霉素的抗菌譜廣和低毒性也使它作為飼料添 加劑應(yīng)用于農(nóng)藥或獸藥學(xué)領(lǐng)域 以提高農(nóng)作物產(chǎn)量或促進(jìn)牲畜生長(zhǎng) 作為氨基糖甙類抗生素的一員 大觀霉素具有這類物質(zhì)的通 性 結(jié)構(gòu)中含有羥基和胺基親水集團(tuán) 游離堿及其鹽類均易溶于水 難溶于有機(jī)溶媒 穩(wěn)定性明顯受水分 p h 值 溫度和雜質(zhì)的影響 6 山東入學(xué)壩i 學(xué)位論文 在空氣中易潮解 含水量增加后穩(wěn)定性顯著下降 在不同程度的酸性 或堿性條件下發(fā)生降解反應(yīng) 分子中的許多不對(duì)稱碳原子帶來(lái)旋光性 等 目前大觀霉素的生產(chǎn)采用微生物法 首先是長(zhǎng)生菌的斜面制備 然后以淀粉 葡萄糖等為原料進(jìn)行發(fā)酵 通過(guò)離子交換樹(shù)脂提取發(fā)酵 液中的大觀霉素 樹(shù)脂經(jīng)酸沈脫 沈脫液濃縮后經(jīng)溶媒結(jié)晶得到產(chǎn)品 二 大觀霉素的菌種選育 誘變育種 細(xì)胞融合育種和基因工程育種是菌種選育的二條主 要途徑 1 誘變育種這是一種傳統(tǒng)的 非常有效的育種手段 隨著科學(xué)技 術(shù)的發(fā)展 一些新的誘變手段不斷出現(xiàn) 為這種傳統(tǒng)的育種方法注入 了新的活力 向砥 2 0 1 等通過(guò)離子注入法選育高產(chǎn)大觀鏈霉菌 獲得 了大觀霉素效價(jià)較出發(fā)菌株提高1 0 2 3 的變異株 王宏斌 1 9 1 等通過(guò) 原生質(zhì)體誘變技術(shù)使大觀霉素產(chǎn)量提高了1 7 但是 由于誘變的 隨機(jī)性 要得到各方面性狀都比較優(yōu)良的菌株難度很大 大多數(shù)情況 下得到的往往是某一個(gè)性狀有缺陷的菌株 如大觀霉素發(fā)酵效價(jià)高的 菌株其生長(zhǎng)速度可能較慢 而生長(zhǎng)速度快的突變株發(fā)酵效價(jià)可能不很 理想 在這種情況下 對(duì)這兩類菌株進(jìn)行原生質(zhì)體融合將是一種有效 的育種手段 有可能篩選到既有較高發(fā)酵效價(jià) 又生長(zhǎng)迅速的融合菌 株 馬秀芬f 8 1 等人研究發(fā)現(xiàn)1x1 0 6 和5x1 0 6 的微量稀土元素能夠 7 山東人學(xué)碩i 學(xué)位論文 明顯促進(jìn)菌體生長(zhǎng) 增加抑菌圈直徑和搖瓶效價(jià) 促進(jìn)抗生素的合成 能力 而且孢子生活力強(qiáng) 4 c 下保存五周和連續(xù)傳至第六代時(shí) 生 產(chǎn)能力保持不變 韓香玲 1 1 等利用紫外線照射引起d n a 變化后將其 涂布在含有大觀霉素的培養(yǎng)基上 使i i i 自身產(chǎn)物的突變株得以生產(chǎn) 選育出了具有耐自身產(chǎn)物的高產(chǎn)突變株 王雪榮 2 1 等通過(guò)對(duì)大觀霉素 生產(chǎn)菌株自然分離 應(yīng)用紫外線照射和離子束注入等誘變方法 經(jīng)過(guò) 抗自身產(chǎn)物積累篩選了高產(chǎn)菌株 發(fā)酵效價(jià)比對(duì)照提高了6 9 4 原生質(zhì)體融合育種將兩親本菌株培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 在高滲溶液 中用溶菌酶處理 制備成原生質(zhì)體 然后用聚乙二醇 p e g 等化學(xué)觸 合劑或電刺激等物理手段使兩原生質(zhì)體融合 在再生培養(yǎng)基上篩選出 符合要求的融合子 有資料顯示 放線菌的原生質(zhì)體融合頻率可達(dá) l o 2 1 0 因此 既使不對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行了標(biāo)記 也可方便地篩選 到所需融合子 因?yàn)樯L(zhǎng)迅速的菌株菌落往往較大 發(fā)酵效價(jià)高的菌 株一般耐大觀霉素能力強(qiáng) 因此可在大觀霉素梯度平板上篩選得到 2 基因工程育種基因工程育種十一種分子水平上的育種技術(shù) 它 可通過(guò)定向地增加某些有用基因或敲除某些不利基因來(lái)提高抗生素 的表達(dá)量 研究發(fā)現(xiàn) 合成大觀霉素的一系列基因通常位于同一基因 串 g e n ee l u s l e r 上 韓國(guó)學(xué)者利用c o s m i d 質(zhì)粒構(gòu)建了大觀霉素生物 合成基因的基因文庫(kù) c o s m i dg e n el i b r a r y 發(fā)脫其中有一個(gè)c o s m i d 包含了2 1 個(gè)完整的開(kāi)放閱讀框架 o r f 和2 個(gè)不完整的丌放閱讀框 8 山東人學(xué)頎i 學(xué)位論文 架 并推導(dǎo)出大觀霉素生物合成所需的1 6 個(gè)蛋白質(zhì) s p e r n t a b c d x e y f g h i j k w a l k e r i 1 發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺 氨基環(huán)醇氮基轉(zhuǎn)移酶 g l u l a m i n e a m i n o e y c l i t o l a m i n o t r a n s t e r a s e 和二氨環(huán)醇氮基轉(zhuǎn)移酶 d i a m i n o e y e l i t o la m i n o l r a n s f e m s e 在大觀霉素合成中有重要作用 j o t l 6 1 等發(fā)現(xiàn)d t d p 葡萄糖合成酶 肌醇單磷酸酶和肌醇脫氫酶參與 的反應(yīng)是大觀霉素生物合成的早期步驟 h y u n 等 和s o h n g 等還把 編碼d t d p 葡萄糖合成酶和d t d p d 葡萄糖4 6 脫水酶的基因通過(guò) c o s m i d 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中 使相關(guān)基因得到表達(dá) 因此 如果 能用穿梭質(zhì)粒作為載體 將大觀霉素生物合成基因轉(zhuǎn)化到大觀鏈霉菌 中 有可能使大觀霉素產(chǎn)量大大提高 3 高效篩選菌株的篩選氏菌種選育過(guò)程中最為關(guān)鍵的步驟 馬秀 芬等通過(guò)菌落形態(tài)變異來(lái)篩選高產(chǎn)菌株 研究發(fā)現(xiàn)梅花型菌落的抗菌 活性最高 圓形菌落次之 光禿型菌落幾乎沒(méi)有抗菌活性 于廣成 1 7 1 等通過(guò)產(chǎn)色素變化和自身耐藥濃度的變化來(lái)選育高產(chǎn)菌株 菌落形態(tài) 和產(chǎn)色素突變雖是一些比較容易判斷的形態(tài)指標(biāo) 但這些指標(biāo)與大觀 霉素產(chǎn)量之間缺乏科學(xué)的相關(guān)依據(jù) 用大觀霉素梯度平板來(lái)篩選自身 耐藥菌株是一個(gè)不錯(cuò)的選擇 因?yàn)榇笥^霉素高產(chǎn)菌株首先必須要耐受 高濃度的大觀霉素 但是 能耐大觀霉素的菌株卻不一定是高產(chǎn)菌株 因?yàn)橐呀?jīng)發(fā)現(xiàn)大脫霉素的抗性與大觀霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶 s p e c t i n o m y c i n 9 山東入學(xué)壩i 學(xué)位論文 p h o s p h o r a n s f e r a s e 等某些大觀霉素抗性酶有關(guān) l y u t z k a n o v a 等還從 大觀霉素產(chǎn)生菌s f l a v o p e r s i c u s 中克隆了大觀霉素的抗性決定子 發(fā)現(xiàn)其含4 個(gè)開(kāi)放閱讀框架 其中的一個(gè)與氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶相 似 另一個(gè)與鏈霉素生物合成基因串中的調(diào)節(jié)蛋白相似 因此即使用 梯度平板法 大規(guī)模的篩選仍不可避免 研究者曾經(jīng)丌發(fā)過(guò)一個(gè)用于 微生物菌種選育的高效篩選模型 該模型利用多孔板進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng) 一次可處理幾萬(wàn)個(gè)突變株 濕室培養(yǎng)后可從透光率判斷菌體的生長(zhǎng)情 況 將多孔板漫至氯化鈣溶液中 使孔內(nèi)液體固化后 還可直接覆蓋 于涂有指示菌的培養(yǎng)基上 進(jìn)行抑菌能力的測(cè)定 使篩選效率大大提 高 三 大觀霉素的發(fā)酵和提取 l 大觀霉素的發(fā)酵 菌種和發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量是決定發(fā)酵水平的兩個(gè)重要因素 優(yōu)良的 菌種可以達(dá)到事半功倍的效果 發(fā)酵培養(yǎng)基組分成分復(fù)雜 它包括碳 源 氮源 無(wú)機(jī)鹽 微量元素 前提和促進(jìn)劑等 發(fā)酵是生物合成大觀霉素的關(guān)鍵步驟 在大觀霉素研究初期 m a s o n 等人就強(qiáng)調(diào)了發(fā)酵過(guò)程中溫度 p h 值 時(shí)間的重要性 美國(guó) a b b o t t 實(shí)驗(yàn)室和u p j o h n 一直從事著它的生產(chǎn)研究工作 1 9 7 2 年 t r o b i c i n 大觀霉素的商品名 中文譯為淋必治 的生產(chǎn)商 美國(guó) o p j o h n 公司在大觀霉素產(chǎn)生菌的培養(yǎng)條件方面已取得顯著成果 確 1 0 山東大學(xué)頎 學(xué)位論文 定了培養(yǎng)基中碳源 氮源 無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)物的組成 探討出了有利于 提高產(chǎn)量的發(fā)酵溫度和時(shí) 日j 以及發(fā)酵分離方法 g o m e s 和m e n a w a t 對(duì)大觀霉素的發(fā)酵過(guò)程進(jìn)行了系統(tǒng)研究 找出了蔗糖料液的最佳濃度 并提出了 活化一反應(yīng)一抑制 的合成模式 抗生素是微生物的次級(jí) 代謝產(chǎn)物 由于微生物產(chǎn)生抗生素的生化代謝途徑較復(fù)雜 通過(guò)遺傳 學(xué)研究 結(jié)合現(xiàn)代生理學(xué)研究技術(shù) 目前基本搞清了大觀霉素的生物 合成途徑 大觀霉素是由葡萄糖經(jīng)一系列反應(yīng)生成的放線胺 a c t i r l a i r l i n e 和大觀糖 s p e c t i n o s e 經(jīng)酶促縮合而成的 見(jiàn)圖1 2 葡萄糖盟鱉盒盛墮 青蟹肌糖氨莖壁整墮宣譬肌胺 鏈霉胺 放線胺葡萄糖萄萄糖 6 磷酸 葡萄糖 1 磷酸 葡萄糖合成酶叫 d t d p d 葡萄糖瞪水酶 d t d p 大觀糖 放線胺 d t d p 大觀糖太觀簍蠢金盛醛式觀霉素 圖1 2 大觀霉素生物合成途徑 f i g 1 2t h es y n t h e s i sp a t h w a yo fs p e c t i n o m y c i n 山東人學(xué)顧i 學(xué)位論文 對(duì)大觀霉素這類次生代謝產(chǎn)物來(lái)說(shuō) 其發(fā)酵效價(jià)除了與遺傳特性 有關(guān)外 還受到環(huán)境條件的影響 于廣成等曾對(duì)大觀霉素發(fā)酵培養(yǎng)基 進(jìn)行過(guò)優(yōu)化 探討了碳氮源的種類及配比對(duì)發(fā)酵的影響 馬秀芬等就 環(huán)境因子對(duì)大觀鏈霉菌發(fā)酵的影響進(jìn)行過(guò)實(shí)驗(yàn) 發(fā)現(xiàn)無(wú)機(jī)磷酸鹽抑制 大觀霉素的合成 硝酸鹽促進(jìn)其合成 此外 他們還發(fā)現(xiàn)稀土元素不 但可以促進(jìn)大觀鏈霉菌的生長(zhǎng) 而且發(fā)酵效價(jià)也能提高7 8 左 右 但到同前為止 有關(guān)酶的誘導(dǎo) 分解代謝產(chǎn)物的解阻遏 能荷的 調(diào)節(jié) 產(chǎn)物的反饋抑制 抗生素的分泌特性等研究尚沒(méi)有得到很好地 開(kāi)展 國(guó)外在這方面的工作由于技術(shù)保密等原因而少見(jiàn)報(bào)道 只有 g o m e s 等對(duì)分批培養(yǎng)下大觀霉素的生物合成進(jìn)行過(guò)研究 提出了氧傳 遞速率是限制發(fā)酵效價(jià)的關(guān)鍵因素這一論斷 微生物在合成次級(jí)代謝產(chǎn)物時(shí) 一般都同時(shí)產(chǎn)生結(jié)構(gòu)上類似的多 種副產(chǎn)物 大觀鏈霉菌也不例外 在合成大觀霉素的同時(shí) 也會(huì)合成 二氫大觀霉素和二羥大觀霉素等結(jié)構(gòu)類似物因此 如果能從生理上搞 清大觀霉素及其他副產(chǎn)物的合成途徑 就可有的放矢地采取生理和遺 傳的手段抑制代謝旁路的進(jìn)行 使大觀霉素在發(fā)酵液中得到富集 大觀霉素的分泌特性對(duì)發(fā)酵收率也有較大的影響 通過(guò)生理或 遺傳學(xué)手段改變細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的組分 可加速大觀霉素的分泌 減 少由于大觀霉素積累而造成的反饋抑制 從而提高抗生素的產(chǎn)量 1 2 山東大學(xué)碩 學(xué)位論文 2 大觀霉素的分離提純 抗生素的分離純化工序是從發(fā)酵液中提取制備符合國(guó)家藥典要 求的抗生素成品 大觀霉素能夠解離成陽(yáng)離子 當(dāng)它經(jīng)弱酸性陽(yáng)離子 交換樹(shù)脂時(shí)將進(jìn)行選擇性交換 吸附于樹(shù)脂 然后用洗脫劑把它沈脫 下來(lái) 如此得到的大觀霉素濃縮液帶有許多雜質(zhì) 主要是熱原 無(wú)機(jī) 鹽和有機(jī)物 熱原是發(fā)酵代謝產(chǎn)物 它是一種內(nèi)毒素 注射后會(huì)使人 感到惡寒高熱 發(fā)酵時(shí)加入的鉀 鈣 鈉 鎂等無(wú)機(jī)鹽和離子交換樹(shù) 脂中的某些不確定的有機(jī)雜質(zhì)都將與大觀霉素共存于洗脫液中 從濃 縮液中提取大觀霉素的工藝隨具體情況不同而不同 一種是調(diào)p h 值 到堿性 去除無(wú)機(jī)物和有機(jī)雜質(zhì) 最后回調(diào)p h 值到酸性 結(jié)晶大觀 鹽 另一種是控制結(jié)晶 步直接得到大觀鹽 1 發(fā)酵液草酸酸化預(yù)處理的原理 放罐后的大觀霉素發(fā)酵液中 除了大觀霉素外 還含有大量的菌 絲體 未用完的培養(yǎng)基 各種蛋白質(zhì)膠狀物和色素 重會(huì)屬離子及抗 生素產(chǎn)生菌的其他代謝產(chǎn)物等 這些雜質(zhì)有些是可溶的 有些是不可 溶的 為了有效的分離和提取大觀霉素 必須對(duì)發(fā)酵也進(jìn)行預(yù)處理 以便通過(guò)過(guò)濾除去大部分的雜質(zhì) 發(fā)酵液中的雜質(zhì)很多 其中金屬離子和蛋白質(zhì)對(duì)提取的影響最 大 金屬離子和蛋白質(zhì)的存在用離子交換法提取時(shí) 會(huì)影響離子交換 樹(shù)脂的吸附量 因此 發(fā)酵預(yù)處理的重點(diǎn)是去除會(huì)屬離子和蛋白質(zhì)以 山東人學(xué)碗i 學(xué)位論文 及盡可能使抗生素轉(zhuǎn)入便于以后處理的相中 為了達(dá)到以上目的 采用調(diào)節(jié)p h 值至酸性的方法達(dá)到 酸化劑 采用草酸 因?yàn)椴菟崴嵝詼睾?腐蝕性小 并能與發(fā)酵液中的鈣鎂離 子結(jié)合 形成不溶性的鹽沉淀析出 同時(shí)起釋放抗生素的作用 蛋白質(zhì)的去除 生產(chǎn)中采用等電點(diǎn)法 用草酸做酸化劑 調(diào)節(jié)發(fā) 酵液的p h 值 使其達(dá)到蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)以沉淀蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)是一 種兩性化合物 在等電點(diǎn)時(shí) 由于沒(méi)有相同電荷而互相排斥的影響 其顆粒極易相互碰撞凝聚而產(chǎn)生沉淀 因此 蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí) 其 溶解度最小 最易形成沉淀 此時(shí)其他許多物理性質(zhì) 如粘度 膨脹 度 滲透壓等都變小 而有利于發(fā)酵液的過(guò)濾 大觀霉素采用新菌種發(fā)酵后 發(fā)酵液過(guò)程中的代謝發(fā)生變化 發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)成分也相應(yīng)變化 因此 優(yōu)化草酸草酸p h 值 尋 找最合理的p h 值 將發(fā)酵液中的蛋白質(zhì)大部分除去 以減輕離子交 換樹(shù)脂的工作壓力 提高料液質(zhì)量 2 大孔離子交換樹(shù)脂的吸附原理 在抗生素的提取分離中 利用離子交換法將抗生素從濾液中有選 擇性的交換到離子交換樹(shù)脂上 然后在適宜的條件下將其沈脫下來(lái) 這樣能使體積縮小到幾十分之一 從而使抗生素被分離提取 離子交換樹(shù)脂是一種具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)的高分子多元酸或多元 堿的聚合物 其結(jié)構(gòu)優(yōu)良部分組成 一部分是網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子基團(tuán) 1 4 山東人學(xué)碩l 學(xué)位論殳 性質(zhì)穩(wěn)定 不溶于酸堿和有機(jī)溶劑 是樹(shù)脂的骨架 另一部分是在網(wǎng) 狀結(jié)構(gòu)骨架上的被溶液中陽(yáng)離子 陰離子 交換的活性離子 當(dāng)交換樹(shù)脂與溶液接觸時(shí) 溶液中的陽(yáng)離子 陰離子 即與交換 生產(chǎn)的三個(gè)階段 成功的將l k 1 2 樹(shù)脂用于大觀霉素離子交換 提 高了交換收率和解析液的質(zhì)量 離子交換過(guò)程的機(jī)理雖然復(fù)雜 但可通過(guò)以下五個(gè)階段來(lái)進(jìn)行 1 a 離子自溶液中擴(kuò)散到樹(shù)脂顆粒表面 2 a 離子透過(guò)樹(shù)脂表面進(jìn)入樹(shù)脂內(nèi)部的活性中心 3 a 離子與素質(zhì)活性中心r b 上的離子起交換反應(yīng) 4 交換下來(lái)的b 離子自活性中心擴(kuò)散到樹(shù)脂表面 5 b 離子再?gòu)臉?shù)脂表面擴(kuò)散到溶液中 現(xiàn)在大觀霉素提取用的是l k 一1 l 樹(shù)脂 是一種弱酸型陽(yáng)離子大 孔交換樹(shù)脂 樹(shù)脂柱采用固定式 每支樹(shù)脂柱中裝入4 0 4 5 噸的 樹(shù)脂 采用正吸附的方式 大觀霉素離子交換樹(shù)脂的優(yōu)化選型 是為了尋找一種更適于大 觀霉素吸附 而且吸附容量大 樹(shù)脂強(qiáng)度高的新型離子交換樹(shù)脂 樹(shù) 脂分廠生產(chǎn)的l k 1 2 樹(shù)脂為我們提供了選擇 l k 1 2 樹(shù)脂的選型我們 經(jīng)歷了小試 中試 上生產(chǎn)三個(gè)階段 山東人學(xué)瑣卜學(xué)位論文 四 大觀霉素的檢測(cè)方法 大觀霉素極性強(qiáng) 紫外最大吸收波長(zhǎng)在1 9 0 r i m 附近 屬于末端 吸收區(qū) 加之結(jié)構(gòu)中4 少位置的礦一酮一半縮酮非常不穩(wěn)定 容易降解 使大觀霉素的含量分析較為棘手 國(guó)內(nèi)鹽酸大觀霉素的檢測(cè)方法有以 下幾種 管碟法 生物效價(jià)法 萃取光度法 旋光法 高效毛細(xì)管 電泳法 高效液相法 高效液相色譜一蒸發(fā)光散射檢測(cè)法 電化學(xué)法 等 管碟法 生物效價(jià)法 使用肺炎球菌 k 7 1 為試驗(yàn)菌 p h 7 0 磷酸鹽緩沖液為稀釋液 但此菌種不穩(wěn)定 使用時(shí)須轉(zhuǎn)種2 3 代的 新鮮培養(yǎng)物 菌液保存時(shí)間不能超過(guò)3 天 而且此菌的存活溫度低 檢測(cè)時(shí)加菌量多 不易掌握 檢測(cè)周期長(zhǎng) 含量檢測(cè)誤差較大 黃莉 1 9 1 王艷秋f 8 l 等 采用藤黃八疊球菌代替肺炎球菌 以p h 7 8 磷酸鹽 緩沖液為稀釋液 得出的抑菌圈清晰 直徑大小符合藥典要求 效價(jià) 結(jié)果準(zhǔn)確 而且克服了肺炎球菌的菌種缺陷 但此方法也存在檢測(cè)周 期長(zhǎng)的缺點(diǎn) 車寶泉 l 包麗穎 引等采用高效毛細(xì)管電泳法 h p c e 毛細(xì) 管柱 5 0 m x5 4 6c m 有效長(zhǎng)度為5 0c m 可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器 1 0m m o l l 的硼砂 p h 9 3 溶峰 并以0 4 5p m 的微孔濾膜過(guò)濾 操作電壓1 8k v 檢測(cè)波長(zhǎng)1 9 2n m 此法不需要有機(jī)溶劑 排除了試 劑的干擾 出峰時(shí)f 日j 短 5 分鐘 該法的重現(xiàn)性和回收率較好 測(cè) 1 6 山東人學(xué)壩l 學(xué)位論文 定結(jié)果可靠 而且檢測(cè)的成本低 萃取光度法 7 是簡(jiǎn)單的一種含量測(cè)定方法 萃取溶劑 二硫化碳 吡啶 異丙醇 3 0 2 0 5 0 顯色劑 水 吡啶 1 5 l 并加入0 0 0 2 m o l l 氯化銅配制 在7 2 1 分光光度計(jì)上于4 7 0n m 處測(cè)量鹽酸大觀 霉素的吸光度 該法操作雖然快速 簡(jiǎn)便 但特異性不強(qiáng) 測(cè)定誤差 大 在實(shí)際工作中很少采用 旋光法ho l 使用w z z i s 數(shù)字式自動(dòng)旋光儀 測(cè)定鹽酸大觀霉素含 量較穩(wěn)定 附加劑 溫度 時(shí)間及酸度等因素對(duì)旋光度測(cè)定基本沒(méi)有 影響 操作簡(jiǎn)便 快速 重現(xiàn)性好 適用于醫(yī)院 制藥企業(yè)進(jìn)行批量 生產(chǎn)時(shí)質(zhì)量控制和快速分析 吳燕 l 等采用高效液相色譜一蒸發(fā)光散射檢測(cè)法 h p l c e l s d 引入蒸發(fā)光散射檢測(cè)器作為檢測(cè)手段 同時(shí)在流動(dòng) 相中添加了離子對(duì)試劑 選用三氟醋酸 t f a 水溶液與一定比例的 乙腈作為流動(dòng)相 乙腈作為改性劑的加入 由于其較強(qiáng)的溶劑化作用 在適當(dāng)?shù)谋壤龡l件下 可縮短藥物的分析時(shí)間 而且不影響色譜的分 離效果 該法操作簡(jiǎn)便 省時(shí) 克服了微生物檢驗(yàn)周期長(zhǎng) 結(jié)果波動(dòng) 性大的不足 可測(cè)定赫酸大觀霉素的準(zhǔn)確含量 結(jié)果重現(xiàn)性好 可有 效的監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量 高效液相色譜 h p l c 法 是近年來(lái)大觀霉素的一種理想的檢測(cè) 方法 結(jié)果準(zhǔn)確 檢測(cè)周期短 大約9 分鐘出峰 可用于大觀霉素生 1 7 山東大學(xué)碩士學(xué)位論文 分大于n 分時(shí)稱為a 行為 當(dāng)n 分大于a 分時(shí)稱為n 行為 當(dāng)n 分等于a 分時(shí)稱 為m 行為 5 家庭環(huán)境量表中文版 f e s c v 1 4 9 1 該量表由m o s s 于1 9 8 1 年編制 引進(jìn)我國(guó)后進(jìn)行了三次修改 具有較好的效 度和信度 該量表廣泛用于描述不同類型正常家庭的特征和危機(jī)狀態(tài)下的家庭狀況 評(píng) 價(jià)家庭干預(yù)下的家庭環(huán)境變化 以及對(duì)家庭環(huán)境與家庭生活的其它方面進(jìn)行比 較 該量表分為1 0 個(gè)分量表 分別評(píng)價(jià)1 0 個(gè)不同的家庭特征 所評(píng)價(jià)的家庭特 征包括 1 親密度 即家庭成員之間相互承諾 幫助 支持的程度 2 情感 表達(dá) 鼓勵(lì)家庭成員公開(kāi)活動(dòng) 直接表達(dá)其情感的程度 3 矛盾性 家庭成員 之間公開(kāi)表示憤怒 攻擊和矛盾的程度 4 獨(dú)立性 家庭成員的自尊 自信和 自主的程度 5 成功性 指將一般的活動(dòng)變成成就性或競(jìng)爭(zhēng)性活動(dòng)的程度 6 知識(shí)性 指對(duì)政治 社會(huì) 智力 文化活動(dòng)的興趣大小 7 娛樂(lè)性 即參加社 交和娛樂(lè)活動(dòng)的程度 8 道德宗教觀 指對(duì)倫理 宗教和價(jià)值的重視程度 9 組織性 指安排家庭活動(dòng)和責(zé)任時(shí)有明確的組織和結(jié)構(gòu)的程度 1 0 控制性 使用固定家規(guī)和程序來(lái)安排家庭生活的程度 該量表所有的項(xiàng)目按選擇的答案進(jìn)行評(píng)分 答 是 評(píng) 1 分 答 否 評(píng) 2 分 統(tǒng)計(jì)計(jì)分歸納為各量表得分以評(píng)價(jià)家庭特征 三 研究過(guò)程 調(diào)查時(shí)以班為單位 向家長(zhǎng)說(shuō)明此次調(diào)查的目地和意義及問(wèn)卷的填寫方法 所有問(wèn)卷和量表采用統(tǒng)一的指導(dǎo)語(yǔ) 由班主任發(fā)給學(xué)生家長(zhǎng)或直接撫養(yǎng)人填寫 填好后當(dāng)堂收回 確認(rèn)每份問(wèn)卷有效后 將問(wèn)卷輸入一i l 理軟件 統(tǒng)計(jì)分析 將調(diào)查問(wèn)卷統(tǒng)一整理 編碼后 將o d d 診斷篩查量表 r u t t e r c b c l f e s c v 量表數(shù)據(jù)輸入社會(huì)科學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件 s p s s l 3 0 數(shù)據(jù)庫(kù) 得出各個(gè) 量表的數(shù)據(jù) 將所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 篩查出o d d 兒童并將o d d 兒童與正 常兒童進(jìn)行對(duì)照 以探尋對(duì)立違抗性障礙的心理行為特征及發(fā)生的危險(xiǎn)因素 分 析方法包括一般描述性分析 t 檢驗(yàn) x 2 檢驗(yàn) 以下是自制兒童基本情況調(diào)查表各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)量化的方法 見(jiàn)表1 山東大學(xué)碩十學(xué)位論文 表1 各指標(biāo)數(shù)量化方法 項(xiàng)目數(shù)量化方法 性別 年齡 民族 身高 體重 父親收入 母親收入 家庭人均收入 父親文化程度 母親文化程度 父親健康 母親健康 父親性格 母親性格 父親嗜好 母親嗜好 家庭經(jīng)濟(jì)狀況 對(duì)孩花的時(shí)間金錢 家族精神病史 家庭結(jié)構(gòu) 家庭成員之間關(guān)系 父親與孩關(guān)系 母親與孩關(guān)系 其他家庭成員與孩關(guān)系 父親對(duì)孩未來(lái)期望 母親對(duì)孩未來(lái)期望 其他成員對(duì)孩未來(lái)期望 父親主要教養(yǎng)方式 母親主要教養(yǎng)方式 其他成員主要教養(yǎng)方式 家庭成員教養(yǎng)態(tài)度 孩對(duì)父親態(tài)度 孩對(duì)母親態(tài)度 孩對(duì)其他成員態(tài)度 孩入學(xué)年齡 班干部 孩身體健康狀況 個(gè)性特征 生活自理能力 適應(yīng)能力 自信心 自尊心 男 l 女 2 實(shí)際值 漢 1 其他 2 實(shí)際值 實(shí)際值 實(shí)際值 實(shí)際值 實(shí)際值 初中以下 i 高中中專 2 大專 3 本科及以上 4 初中以下 i 高中中專 2 大專 3 本科及以上 4 健康 l 一般 2 體弱多病 3 健康 l 一般 2 體弱多病 3 外向 1 中間 2 內(nèi)向 3 外向 l 中間 2 內(nèi)向 3 吸煙 l 喝酒 2 吸煙喝酒 3 都不 4 吸煙 l 喝酒 2 吸煙喝酒 3 都不 4 富裕 i 中等 2 差 3 少 i 一般 2 較多 3 非常多 4 有 1 無(wú) 2 主干家庭 1 核心家庭 2 單親家庭 3 寄養(yǎng)家庭 4 融洽 1 一般 2 不融洽 3 親切 i 一般 2 疏遠(yuǎn) 3 親切 l 一般 2 疏遠(yuǎn) 3 親切 1 一般 2 疏遠(yuǎn) 3 非常高 1 高 2 一般 3 低 4 非常高 i 高 2 低 3 非常高 1 高 2 一般 3 低 4 盡量滿足 1 耐心開(kāi)導(dǎo) 2 嚴(yán)厲粗暴 3 盡量滿足 l 耐心開(kāi)導(dǎo) 2 嚴(yán)厲粗暴 3 盡量滿足 l 耐心開(kāi)導(dǎo) 2 嚴(yán)厲粗暴 3 一致 l 有時(shí)不一致 2 經(jīng)常不一致 3 信任 i 一般 2 不信任 3 信任 l 一般 2 不信任 3 信任 i 一般 2 不信任 3 實(shí)際值 是 1 否 2 健康 i 般 2 體弱多病 3 外向 1 中問(wèn) 2 內(nèi)向 3 強(qiáng) l 較強(qiáng) 2 一般 3 較差 4 很差 5 強(qiáng) 1 較強(qiáng) 2 一般 3 較差 4 很差 5 強(qiáng) 1 較強(qiáng) 2 一般 3 較差 4 很差 5 強(qiáng) l 較強(qiáng) 2 一般 3 較差 4 很差 5 1 9 山東大學(xué)碩十學(xué)位論文 觀霉素泡騰片的報(bào)道外 還沒(méi)有其它劑型的相關(guān)報(bào)道 其次 加快大觀霉素工藝革新 在大觀霉素的生產(chǎn)工藝中 還 有許多可塑之處 需要科技人員去發(fā)現(xiàn) 優(yōu)化工藝 降低成本 提高 提取收率 另外 由于大觀霉素的微生物含量分析方法滯后生產(chǎn) 不能很 好的指導(dǎo)生產(chǎn) 高效液相分析方法雖然較微生物法簡(jiǎn)單快捷 但由于 其分析步驟繁多 作樣價(jià)格偏高 生產(chǎn)過(guò)程中還不能普遍使用 因此 加大大觀霉素的提取工藝改進(jìn)和分析方法的改進(jìn) 是近 一段時(shí)間大觀霉素生產(chǎn)的關(guān)鍵 山東人學(xué)碗j 學(xué)位論文 第二章優(yōu)化發(fā)酵液預(yù)處理酸化p h 值 一 優(yōu)化發(fā)酵液酸化p h 值的試驗(yàn) 2 1 1 試驗(yàn)儀器 1 0 0 0m l 玻璃燒杯 攪拌棒 草酸 p h 試紙 酸度計(jì) 氫氧化鈉溶液 秒表 濾紙 漏斗 1 0 0m l 量桶 2 i 2 試驗(yàn)方案 1 準(zhǔn)備好4 個(gè)1 0 0 0m l 的燒杯 2 各取發(fā)酵放罐液5 0 0m l 3 邊攪拌邊加入草酸 并不斷用p h 試紙檢測(cè)p h 值 分別將分發(fā)酵液 酸化到2 o o 2 5 0 3 o o 3 5 0 最終酸化p h 值以酸度計(jì)檢測(cè)為 準(zhǔn) 4 將濾紙折好 放在漏斗上面 漏斗下面接到l o om l 的量桶 5 分別過(guò)濾4 種酸化液 記錄到達(dá)2 0m l 濾液所需的時(shí) 日j 和2 分鐘時(shí)的 濾液體積 濾液送化驗(yàn)室檢測(cè)微生物效價(jià) 6 將濾液分別用氫氧化鈉溶液將p h 值調(diào)到9 0 0 和1 0 0 0 沉淀2 小時(shí) 比較濾液中的沉淀數(shù)量 2 1 3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 2 l 山東人學(xué)壩i 學(xué)位論文 批號(hào) 酸化2 分鐘的2 0 m l 所 p h 9 0p h l 0 微生物 p h 值濾液m l 需的時(shí)的沉淀0 的沉效價(jià) 間s 淀 u m l 0 3 52 0 6172 2 55 66 43 8 9 7 2 5 32 11 5 04 25 34 0 2 4 3 o l 1 92 1 04 55 23 9 5 6 3 5 8 l82 455 06 13 9 1 9 0 3 62 0 32 1 51 5 0 5 6 5 94 0 4 6 2 5 42 21 5 05 25 64 l2 8 3 0 92 2 51 4 55 4 5 8 4 1 9 5 3 5 2 1 9 2 1 0 5 3 6 14 0 6 2 0 3 72 0 9172 3 05 15 93 8 9 3 2 5 21 9 51 5 54 95 44 0 1 2 3 0 3 1 81 5 04 85 53 9 7 6 3 5 71 7 52 155 25 73 9 2 4 0 3 82 0 22 01 4 54 86 04 2 1 0 2 5 8 2 3 5 1 4 0 4 5 5 64 2 9 4 3 0 3 2 2 1 4 5 4 9 5 64 2 3 5 3 5 22 12 1 04 85 84 1 7 8 2 1 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論 表2 1酸化試驗(yàn)數(shù)據(jù)表 從以上的酸化試驗(yàn)結(jié)果可以看出 酸化p h 值在2 5 0 時(shí) 酸化液過(guò) 濾速度最快 酸化液的堿性蛋白沉淀量較少 而且酸化液的效價(jià)較高 說(shuō)明在此酸化條件下 發(fā)酵液中的蛋白能有效去除 而且有利于發(fā)酵 液的過(guò)濾 山東人學(xué)碩j 學(xué)位論文 二 生產(chǎn)中優(yōu)化酸化p h 值試驗(yàn) 優(yōu)化酸化p h 值試驗(yàn)完成以后 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn) 酸化 p h 值在2 5 左右時(shí) 濾液質(zhì)量情況較好 而且此p h 值下的濾速較快 微生物效價(jià)較高 說(shuō)明對(duì)大觀霉素破壞較少 在生產(chǎn)中 將酸化p h 值調(diào)到2 5 左右 進(jìn)行了大生產(chǎn)試驗(yàn) 2 1 生產(chǎn)程序 1 發(fā)酵液放完罐后 與發(fā)酵放罐人員交接完體積后 打開(kāi)酸化池?cái)?拌 邊攪拌邊加入草酸 并用p h 試紙檢測(cè) 待接近3 0 時(shí) 改用化驗(yàn) 室酸度計(jì)檢測(cè) 最終p h 值控制在2 5 左右 2 酸化液繼續(xù)攪拌5 1 0 分鐘后即可通過(guò)轉(zhuǎn)鼓過(guò)濾 2 2 生產(chǎn)數(shù)據(jù)如下 山東人學(xué)碩卜學(xué)位論文 過(guò)濾濾餅所 日罐號(hào) 批放罐十 頂水 無(wú)菌 濾餅 時(shí)間含效價(jià)收率 期 號(hào)億m 3 h ht l m l 3 83 0 3 0 55 一 l3 8 6 4 5 干8 o914 58 9 5 2 3 9 3 0 8 0 5 6 一 l3 0 2 4 6濕6 o8l0 98 0 6 0 3 1 03 0 4 0 57 一 l3 9 4 l3 干5 09l2 18 8 2 5 3 1 l3 0 i 0 58 一 l3 6 9 4 4干6 08 5l l69 0 0 5 3 123 0 6 0 5 9 一 l2 9 58 7干6 08 l2 39 2 13 濕 3 133 0 2 0 6 0 一 l35 455 6 o8l0 79 8 2 2 粘 3 1 43 0 7 0 6 l 一 l3 7 3 0 l 濕6 o8 5l3 89 0 8 l 3 153 05 0 6 2 一 l3 6 8 8 9干6 091 2 4 8 0 13 3 163 0 3 0 6 3 一 l4 0 2 67干6 o8l3 09 2 5 9 濕 3 173 0 4 0 6 4 一 133 5 8 66 o9l l49 8 4 0 粘 3 183 0 l 0 6 5 一 l35 3 l2濕6 o8 51 l59 6 2 0 濕 3 1 93 0 2 0 6 6 一 13 9 4 l86 o8 1 0 69 1 0 6 粘 3 2 03 0 5 0 6 7 一 138 4 0 2 干 6 o7 12 29 3 58 濕 3 2 l 3 0 3 0 6 8 一 l3 9 5 lo6 08 5l2 09 0 3 l 粘 濕 3 2 2 3 0 4 0 6 9 一 l33 75 26 07 5l l8 8 7 7 4 粘 濕 3 2 33 0 i 0 7 0 一 l3 2 5 5 05 ol2l2 89 2 4 l 粘 表2 2 酸化試驗(yàn)批次過(guò)濾數(shù)據(jù)表 t a b 2 2f i l t e rd a t a0 fa c idt e s tb a t c h es 山東大學(xué)碩 1 學(xué)位論文 2 3 結(jié)果分析 調(diào)整酸化p h 值生產(chǎn) 轉(zhuǎn)鼓過(guò)濾情況良好 濾餅中所含效價(jià)比試驗(yàn) 前降低了3 i 過(guò)濾收率提高了2 4 2 7 山東人學(xué)碩i 學(xué)位論義 第三章離子交換樹(shù)脂的選型 一 l k 12 樹(shù)脂的選型的小試 實(shí)驗(yàn)共分二個(gè)階段進(jìn)行 第一階段 魯抗樹(shù)脂分廠生產(chǎn)的新型1 群 2 群樹(shù)脂與生產(chǎn)中在用的l k 1 1 樹(shù) 脂的吸附解析對(duì)照試驗(yàn) 比較3 種樹(shù)脂的質(zhì)量指標(biāo) 尋找更適合大 觀霉素生產(chǎn)的新型樹(shù)脂 3 1 1實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 三支小型的試驗(yàn)樹(shù)脂柱 膠皮管 塑料桶 燒杯 2m o i l 的鹽酸 氫氧化鈉溶液 0 6m o i l 的鹽酸溶液 純化水 3 1 2 試驗(yàn)過(guò)程 l 各取1 0 0m l 的三種樹(shù)脂 分別裝入樹(shù)脂柱 2 分剔用三倍樹(shù)脂體積的2 m o i l 的鹽酸和氧氧化鈉溶液處理2 遍 3 吸附大約4 0 倍樹(shù)脂體積的濾液 4 用0 6m o l l 的赫酸做解析劑進(jìn)行解析 3 1 3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 山東人學(xué)碩f 學(xué)位論文 序樹(shù)脂解析液解析液解折液解析液的 收率 號(hào)的效價(jià)的體積的灰分 色濁 u m lm l 色濁 1 群l6 2 4 92 7 52 9 4 2 l 9 7 9 7 l 2 撐l45 2827 53 4 4 2 l8 7 5 9 l k 1ll7 6 732 4 52 97 22 9 4 9 3 l 群2 0 7 952 2 82 98227 0 9 6 22 撐18 0 78 25 23