臨床常見標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)..ppt

,臨床常見標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn),主要內(nèi)容,1.臨床常見標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本二、痰及下呼吸道標(biāo)本三、尿液標(biāo)本四、大便標(biāo)本五、生殖道系統(tǒng)標(biāo)本六、化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本七、穿刺液標(biāo)本八、眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本九、組織標(biāo)本,一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本,（一）血培養(yǎng)檢測(cè)采血指征臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血液感染的患者1.發(fā)熱（38）或低溫（36）2.寒戰(zhàn)3.白細(xì)胞增多（10109/l，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞增多）4.粒細(xì)胞減少（成熟的多核白細(xì)胞104cfu/ml時(shí)有臨床診斷意義。（不是絕對(duì)的，受多因素影響，綜合判斷）2.尿液標(biāo)本的采集和培養(yǎng)中的問(wèn)題是污染雜菌，故應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。3.尿標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，以免污染，尿液中不得加防腐劑和消毒劑。,4.除非是流行病學(xué)調(diào)查，長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管患者常規(guī)尿培養(yǎng)沒(méi)有臨床意義，大量病原菌常可在這類患者中檢出，導(dǎo)尿管留置時(shí)間延長(zhǎng)易導(dǎo)致與引起患者尿道感染不一致的微生物定植生長(zhǎng)；5.不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本，集尿袋內(nèi)的尿液也不能用于培養(yǎng)，可能會(huì)引起污染；6.臨床常讓患者留取清潔中段尿，應(yīng)該在醫(yī)護(hù)人員監(jiān)督指導(dǎo)下讓患者正確的留取清潔中段尿；7.由于種種原因，患者常常不能正確地留取清潔中段尿，實(shí)驗(yàn)室只是針對(duì)尿液標(biāo)本培養(yǎng)的結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，或常常由于分析前尿液標(biāo)本污染了多種細(xì)菌無(wú)法正確解釋的結(jié)果，可能延誤了臨床的正確診斷和治療。,下列因素可使尿液中細(xì)菌數(shù)量減少，判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)注意,使用抗生素治療，細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制；尿液稀釋，尿比重1.003，營(yíng)養(yǎng)成分減少，細(xì)菌生長(zhǎng)遲緩；尿ph5.0或8.5，細(xì)菌生長(zhǎng)受阻；尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短，菌落數(shù)減少；尿道口消毒液混入標(biāo)本中，影響細(xì)菌繁殖，菌落數(shù)減少；不同種類的細(xì)菌生長(zhǎng)速度不同、營(yíng)養(yǎng)要求不同，菌落計(jì)數(shù)有所不同。,接種方式,接種于血平板；置于35普通溫箱；18-24小時(shí)后觀察。采用1ul或者10ul定量接種環(huán)。,尿培養(yǎng)的劃線方式,1ul接種環(huán)：菌落數(shù)*1000/ml10ul接種環(huán)：菌落數(shù)*100/ml5ul接種環(huán)：菌落計(jì)數(shù)*200/ml,尿培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià),正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無(wú)菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受到下尿道中正常菌群的污染而出現(xiàn)細(xì)菌。因此對(duì)不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正確評(píng)價(jià)，才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般認(rèn)為，清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)105cfu/ml可能為感染；5104cfu/ml可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行評(píng)估（表1）。,表1不同方法采集的尿標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià),標(biāo)本來(lái)源菌落數(shù)cfu/ml結(jié)果評(píng)價(jià),清潔中段尿,5104,無(wú)意義，僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng),純培養(yǎng)有意義，報(bào)告菌落計(jì)數(shù)和菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果；混合菌生長(zhǎng)無(wú)意義，僅做革蘭染色鏡檢，并報(bào)告鏡檢結(jié)果,(510)104,純培養(yǎng)或混合菌生長(zhǎng)，其中某種細(xì)菌數(shù)105者有意義，需進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)意義，報(bào)告標(biāo)本污染,105,3種以內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)都有意義，對(duì)2種主要生長(zhǎng)菌需進(jìn)行菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)意義，報(bào)告標(biāo)本污染,103,導(dǎo)尿,都有意義，所有細(xì)菌均需做菌種鑒定及藥敏試驗(yàn),任意數(shù)目,恥骨上膀胱穿刺,陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告,培養(yǎng)48h無(wú)菌落生長(zhǎng)，即為陰性。接種1ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)103cfu/ml”；接種10ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)102cfu/ml”。,陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告,應(yīng)報(bào)告細(xì)菌種屬名稱、菌落計(jì)數(shù)和藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。如：大腸埃希菌生長(zhǎng)，菌落計(jì)數(shù)105cfu/ml，藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果：,菌落計(jì)數(shù)105cfu/ml只是診斷尿路感染的一般標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言，如果僅使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋，那么若標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)松，將會(huì)造成抗生素濫用和不必要的資源浪費(fèi)；制定過(guò)嚴(yán)，將有可能導(dǎo)致尿路感染的漏診。所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在與臨床醫(yī)生密切合作的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的情況制定不同的解釋標(biāo)準(zhǔn)。尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影響，在一些患者即使菌落計(jì)數(shù)較少，也有明顯的臨床意義，所以對(duì)菌落計(jì)數(shù)5104cfu/ml，“規(guī)范”中認(rèn)為無(wú)意義的陽(yáng)性結(jié)果，不應(yīng)隨意丟棄，必要時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)生聯(lián)系后，決定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。,四、大便培養(yǎng)標(biāo)本,最常見于感染性腹瀉：1.吸收不良性腹瀉；輪狀病毒、腺病毒、隱孢子蟲、致病性大腸埃希菌.2.分泌性腹瀉（腸毒素性腹瀉）；霍亂弧菌、產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌.3.侵襲性腹瀉（滲出性腹瀉）；沙門菌屬、耶爾森菌、溶組織內(nèi)阿米巴、侵襲性大腸埃希菌4.抗生素相關(guān)性腹瀉,（一）采集時(shí)間腹瀉患者應(yīng)在急性期，并盡可能在使用抗生素之前采集新鮮糞便；傷寒患者在發(fā)病2周以后。（二）采集方法1自然排便采集法自然排便后，挑取有膿血或黏液部位的糞便2-3g，液狀糞便取絮狀物盛于無(wú)菌的容器內(nèi)或置于保存液或增菌液中送檢。2直腸拭子采集法對(duì)不易獲得糞便或排便困難的患者及嬰幼兒，可采用直腸拭子法采集標(biāo)本，其方法是將拭子前端用甘油濕潤(rùn)。然后插入肛門約45cm（幼兒約23cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦取直腸表面粘液后取出，盛入無(wú)菌試管或保存液中送檢。,（三）實(shí)驗(yàn)室檢查腸道細(xì)菌大多為革蘭陰性桿菌，且因糞便標(biāo)本中有各種正常菌群，形態(tài)上區(qū)分困難，因此一般不做直接涂片檢查。只有當(dāng)臨床懷疑腸道菌群失調(diào)或檢查霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌、疑似葡萄球菌或難辯梭菌引起的偽膜性腸炎以及真菌性腹瀉時(shí)，才做直接涂片檢查。疑似葡萄球菌引起的抗菌素相關(guān)性腸炎，可取水樣便或腸黏膜樣物涂片，革蘭染色后鏡檢，見革蘭陰性桿菌明顯減少，革蘭陽(yáng)性球菌大量散在或成堆（葡萄狀）排列，可提示腸道菌群失調(diào)。,（四）注意事項(xiàng),在腹瀉發(fā)病的正確時(shí)間收集標(biāo)本，病人應(yīng)盡量在急性期（3d）內(nèi)和用藥前采集標(biāo)本，以提高檢出率。大便標(biāo)本中含有很多雜菌，糞便標(biāo)本的采集須注意防止外界臟物污染，盡量采用無(wú)菌容器。為提高陽(yáng)性檢出率，要采集新鮮標(biāo)本，立即送檢。,標(biāo)本接種,一細(xì)菌性痢疾、傷寒感染（沙門、志賀）取標(biāo)本接種于ss瓊脂平板或麥康凱平板或xld平板，置于35普通溫箱，18-24小時(shí)后觀察。二偽膜性腸炎（難辨梭狀芽孢桿菌）接種于ccfa平板和厭氧血瓊脂平板，置于37普通溫箱，48小時(shí)后觀察。三霍亂感染標(biāo)本接種于堿性蛋白胨水，35培養(yǎng)6-8h后轉(zhuǎn)種于慶大霉素瓊脂平板或ss瓊脂平板，35普通溫箱，18-24小時(shí)后觀察。四其他感染真菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、空腸彎曲菌。,接種方式,四區(qū)劃線，每區(qū)均換環(huán)。,五、生殖道標(biāo)本,（一）送檢指征1.男性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)尿急、尿頻、尿痛尿道分泌物增多會(huì)陰部疼痛及陰囊疼痛性功能障礙泌尿生殖器畸形和缺損,2.女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)分泌物增多及性狀異常尿道口搔癢及膿性分泌物流暢下腹疼痛月經(jīng)失調(diào)陰道出血外陰搔癢外陰或陰道疼痛性功能障礙,（二）標(biāo)本采集生殖器官標(biāo)本包括子宮頸、陰道、前列腺；男性及女性外生殖器的分泌物及經(jīng)血等。應(yīng)根據(jù)感染的部位和可能的病原體決定用于病原學(xué)診斷的標(biāo)本種類、采集部位和采集方法等。陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。,尿道分泌物1.女性尿道：患者排尿1小時(shí)后采集，首先拭去尿道口的滲出物；再用拭子通過(guò)陰道，靠著恥骨聯(lián)合，按摩尿道，采集分泌物；如未獲得分泌物，清洗外尿道，用滅菌紗布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道24cm，旋轉(zhuǎn)拭子2秒。2.男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm，旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收。,陰道分泌物擦除過(guò)多的分泌物和排出液，用無(wú)菌棉拭子采取陰道口內(nèi)4厘米內(nèi)側(cè)壁或后穹窿處分泌物，如果需要涂片，需再用一個(gè)拭子。男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，沖洗尿道膀胱，從肛門用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用無(wú)菌容器收集。無(wú)肉眼可見膿液時(shí)，可用滅菌拭子輕輕伸入前尿道內(nèi)，旋轉(zhuǎn)拭子采集標(biāo)本。,（三）注意事項(xiàng)1.生殖器是開放性器官，標(biāo)本采集過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)程以減少雜菌污染。2.由于陰道正常菌群的存在而使細(xì)菌的分離鑒定受到干擾，所以在采集女性生殖道標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意盡量減少或避免正常菌群的污染。3.疑有宮腔感染，如遇產(chǎn)婦需行剖宮產(chǎn)，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時(shí)取嬰兒耳拭子一同送檢。4.沙眼衣原體和病毒均在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，取材時(shí)拭子應(yīng)在病變部位（移行上皮處稍內(nèi)）停留十幾秒鐘，并采集盡可能多的上皮細(xì)胞。,5.生殖道感染厭氧菌也較多見，疑有厭氧菌感染時(shí)，標(biāo)本采集和運(yùn)送應(yīng)避免與氧氣接觸，最佳方法是床邊采樣，直接接種至厭氧裝置內(nèi)。6.淋病奈瑟菌檢查時(shí)，取材的深度一定要夠，因?yàn)榱芮蚓冒l(fā)于柱狀上皮細(xì)胞而不是復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞。不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深轉(zhuǎn)動(dòng)并停留10-30s取樣送檢。7.淋病奈瑟菌抵抗力低，對(duì)外環(huán)境變化頗為敏感，對(duì)寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后要盡快送檢，立即接種，標(biāo)本離體時(shí)間越短越好。,直接接種于巧克力培養(yǎng)基，置于5%co2溫箱內(nèi)，18-24小時(shí)后觀察。,六、化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本,組織或器官的化膿性感染，其病原菌的來(lái)源可分為兩類：內(nèi)源性：感染源是炎癥局部周圍器官中的正常菌群，由于損傷等因素進(jìn)入無(wú)菌狀態(tài)的組織內(nèi)，發(fā)生感染。外源性：感染源是存在于人體外部自然界的微生物，由于外傷和直接接觸通過(guò)人體表面進(jìn)入人體，造成感染。膿液的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于確定感染的種類（結(jié)核性或非結(jié)核性等）、提供藥物敏感結(jié)果和指導(dǎo)臨床治療有重要的意義。,（一）標(biāo)本采集1開放性感染和已潰破的化膿灶標(biāo)本采集前先用滅菌生理鹽水拭去表面滲出物，盡可能用抽吸或?qū)⑹米由钊雮?，緊貼傷口前沿取樣，從膿腫底部或膿腫壁取樣，效果最好。慢性感染，污染嚴(yán)重，很難分離到致病菌，可取感染部位下的組織，研磨成組織勻漿接種于適宜的培養(yǎng)基。2封閉性膿腫局部消毒后用針及注射器抽吸膿腫壁，將所有物質(zhì)置于無(wú)菌試管內(nèi)送檢，疑為厭氧菌感染時(shí)立即作床邊接種或置于厭氧轉(zhuǎn)運(yùn)裝置送檢（針頭插一橡皮塞隔絕空氣）。但取樣時(shí)，可能會(huì)帶入與感染過(guò)程無(wú)關(guān)的定植細(xì)菌。3大面積創(chuàng)傷感染：可取感染組織塊或沾有膿汁的內(nèi)層敷料送檢。,（二）注意事項(xiàng)細(xì)菌對(duì)干燥敏感或只能采集少量標(biāo)本時(shí)，用棉拭子采集標(biāo)本后立即放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，或采標(biāo)本前先將棉拭子沾少許肉湯以保持標(biāo)本濕度。對(duì)于不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4保存，培養(yǎng)淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。盡可能在用藥前采集標(biāo)本。采樣前病灶局部應(yīng)避免用抗菌藥物或消毒劑。革蘭染色對(duì)標(biāo)本進(jìn)行評(píng)估。涂片中如出現(xiàn)上皮細(xì)胞提示標(biāo)本已被污染。沒(méi)有上皮細(xì)胞而有白細(xì)胞說(shuō)明標(biāo)本采集正確。有的創(chuàng)傷均可有細(xì)菌污染，但不一定發(fā)生感染，因此對(duì)分離到的細(xì)菌要根據(jù)創(chuàng)傷的情況、菌量和種數(shù)，收集標(biāo)本的處理過(guò)程、機(jī)體免疫力及抗生素的使用情況等多種因素來(lái)分析判斷。,標(biāo)本處理,直接涂片，做出初步判斷；接種于血平板，置于35普通溫箱；18-24小時(shí)后觀察。,七、穿刺液標(biāo)本,穿刺液主要包括:腦脊液膽汁胸水腹水心包液關(guān)節(jié)液鞘膜液在正常人體中，上述體液均是無(wú)菌的。有感染的情況下檢出的細(xì)菌，在排除污染后應(yīng)視為病原菌，及時(shí)給予正確的治療，使病人早日恢復(fù)健康。,送檢指征,腦脊液：癥狀指征：發(fā)熱等感染性全身癥狀、顱內(nèi)壓升高、腦膜刺激癥狀、神經(jīng)麻痹癥狀、腦脊液常規(guī)及生化變化；懷疑腦膜炎時(shí)。胸水：多伴有胸痛、發(fā)熱、胸腔積液；疑似胸膜炎、胸腔積水；腹水：有積液伴腹痛、嘔吐、肌緊張、腸鳴音弱或消失等。疑似原發(fā)或繼發(fā)性腹膜炎；膽汁：腹痛、黃疸、右上腹壓痛、肌緊張、膽囊區(qū)深吸氣時(shí)有觸痛；疑似膽石癥、膽囊炎、肝膽系統(tǒng)感染等。心包液：發(fā)冷、發(fā)熱、心悸、出汗、乏力及精神癥狀；心前區(qū)疼痛、心包摩擦音、心音明顯減弱、心電圖改變等。疑似心包炎；5關(guān)節(jié)液：關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)周圍肌肉發(fā)生保護(hù)性痙攣；疑似化膿性關(guān)節(jié)炎。,（一）腦脊液1.采集時(shí)間：懷疑為腦膜炎的病人，應(yīng)立即采集腦脊液，最好在使用抗菌藥物以前采集標(biāo)本。2.采集方法：用腰穿方法采集腦脊液35ml，分裝到3個(gè)無(wú)菌試管中，每個(gè)試管12ml。第一管用于細(xì)菌培養(yǎng)!也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶,用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。,3.標(biāo)本運(yùn)送和保存：腦膜炎奈瑟菌離體后會(huì)迅速自溶,肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌也很容易死亡,因此,標(biāo)本應(yīng)立即送檢,并注意保溫、防干燥。切不可置冰箱保存,否則會(huì)影響檢出率。腦脊液標(biāo)本送檢的理想時(shí)間為15分鐘內(nèi)，半小時(shí)送檢是可接受的，如果送檢時(shí)間超過(guò)1小時(shí)，則會(huì)影響結(jié)果。如不能及時(shí)送檢，可使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時(shí)，請(qǐng)勿使用血培養(yǎng)瓶）,（二）膽汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）1.采集時(shí)間懷疑感染存在，應(yīng)盡早采集標(biāo)本，一般在患者使用抗菌藥物之前或停止用藥后2-3天采集。2.采集方法無(wú)菌操作穿刺抽取標(biāo)本或外科手術(shù)采集標(biāo)本。標(biāo)本采集量應(yīng)1ml;胸腔積液、腹水可抽取10ml;心包液、關(guān)節(jié)液等可抽取25ml。標(biāo)本采集后注入無(wú)菌小瓶或無(wú)菌試管中送檢也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶，用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。為防止穿刺液的凝固，應(yīng)在無(wú)菌試管中預(yù)先加入滅菌肝素，再注入穿刺液。,標(biāo)本處理,腦脊液：1.若腦脊液標(biāo)本明顯紅色或渾濁，直接接種；若腦脊液清晰透明，應(yīng)以3000r/min離心10-15分鐘后，取沉淀物進(jìn)行接種。2.一般選擇血瓊脂平皿、巧克力平皿、麥康凱或中國(guó)藍(lán)平皿、沙保羅平皿、硫羥乙酸鹽肉湯。3.接種前將平板置于溫箱中預(yù)溫30min，保存平皿表面干燥。4.采用10ul定量環(huán)接種進(jìn)行4區(qū)劃線。接種后37、5%co2溫箱培養(yǎng)24h，若不見生長(zhǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)。,注意：1.腦脊液標(biāo)本不推薦接種與增菌肉湯，其營(yíng)養(yǎng)條件較弱，不易苛養(yǎng)菌生長(zhǎng)：2.腦脊液標(biāo)本不能使用血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，由于培養(yǎng)瓶中含有的聚茴香胺硫酸鈉（sps）對(duì)腦膜炎奈瑟菌有毒性。,胸腹水、膽汁、心包液、關(guān)節(jié)液等標(biāo)本的接種,標(biāo)本處理：將標(biāo)本取10ul直接接種于血瓊脂平皿、巧克力平皿、麥康凱或中國(guó)藍(lán)平皿、沙保羅平皿上，除巧克力平皿放入37、5%co2溫箱外，其余平板均放入35普通溫箱。備注：由于該方法檢出率低，目前國(guó)內(nèi)使用新的接種方法：無(wú)菌操作將標(biāo)本與肉湯按11-12比例加入到已配置的血液增菌肉湯管中，輕輕搖勻。置于35普通溫箱，24h后轉(zhuǎn)種到血瓊脂平皿上，再次培養(yǎng)24h觀察。,八、眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本,正常眼部、中耳及鼻竇內(nèi)是無(wú)菌的，而咽峽部有口腔的常在菌叢。耳、鼻、咽部的細(xì)菌感染病原菌多源于口腔，口腔中既有需氧菌也有厭氧菌，所以，其周圍組織器官的感染不僅考慮是需氧菌，也須檢查厭氧菌。,（一）標(biāo)本采集1.眼結(jié)膜：分別用（無(wú)菌鹽水預(yù)濕）拭子繞每一個(gè)結(jié)膜??；采集完即接種培養(yǎng)基；將拭子涂片在兩個(gè)玻片上染色。角膜刮擦：滴兩滴局部麻醉液；用無(wú)菌鏟刮擦膿腫或潰瘍，將刮擦物直接接種于培養(yǎng)基；將剩余材料涂于兩個(gè)干凈的玻片上染色。液體或抽吸物：備眼，用針頭抽吸液體。先用無(wú)菌生理鹽水沖洗眼部，然后用棉拭子拭干，再用無(wú)菌棉拭子采集分泌物。,2.耳內(nèi)耳：對(duì)復(fù)雜的、反復(fù)的或慢性頑固的中耳炎做鼓膜穿刺術(shù)，接觸耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器收集液體；對(duì)破裂的鼓室，借助耳科診視器，用軟桿拭子收集液體。外耳：用濕拭子將耳道的任何碎屑或痂皮拭去；在外耳道用力旋轉(zhuǎn)拭子取樣。3鼻或鼻咽分泌物直接用拭子涂抹病灶部位，切勿接觸周圍粘膜或皮膚，標(biāo)本立即送檢。4咽分泌物先用清水漱口，用壓舌板將舌向下向外壓，將咽拭子在咽后壁或懸雍垂后側(cè)涂抹數(shù)次，插入運(yùn)送培養(yǎng)基。切勿接觸口腔和舌粘膜。,（二）標(biāo)本運(yùn)送和保存標(biāo)本采集時(shí)，無(wú)菌手續(xù)以稍蘸肉湯的拭子采集病變明顯處的膿液和分泌物。采取后拭子應(yīng)置于運(yùn)送培養(yǎng)基或培養(yǎng)拭子運(yùn)送，以防干燥。立即送檢，如不能及時(shí)送檢，應(yīng)置于冰箱保存，超過(guò)48h不可使用。,（三）標(biāo)本的接種,一.直接涂片：取拭子制成2張涂片，1張行革蘭染色，1張行美藍(lán)或異染顆粒染色。做初步報(bào)告，便于選擇培養(yǎng)基。二.接種于培養(yǎng)基：一般細(xì)菌接種于血平皿、巧克力平皿、中國(guó)藍(lán)或麥康凱上，置于35