（參考課件）梅毒的實驗室診斷.ppt

梅毒的實驗室診斷,1,一、概述-梅毒病原體,（一）、名詞由梅毒螺旋體感染引起的一種慢性全身性性傳播疾病是我國衛(wèi)生部規(guī)定的8種重點(diǎn)防治性病之一中華人民共和國傳染病防治法規(guī)定的乙類傳染病世界衛(wèi)生組織列為世界上最常見的50種傳染病之一梅毒螺旋體（Treponemapallidum，TP）是梅毒的病原體，因其透明，不易著色，故又稱蒼白螺旋體,2,（二）、生物學(xué)特性小而纖細(xì)的螺旋狀微生物長520m，粗細(xì)0.2m有612個規(guī)則的螺旋基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體，為兩層膜所圍繞行動緩慢而有規(guī)律-圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)中前后移動-伸縮其圈間之距離而移動-全身彎曲如蛇行,3,（三）、繁殖繁殖方式與其生活環(huán)境有關(guān)近年來電子顯微鏡觀察，在培養(yǎng)條件下或在體內(nèi)適宜環(huán)境中為橫斷分裂，分裂時將軀干分裂成長短兩段分裂增代時間為3033小時當(dāng)條件不利時，以分芽子繁殖生活發(fā)育周期:顆粒期、球形體期及螺旋體期，與所致疾病周期、隱伏發(fā)作及慢性病程有關(guān),4,（四）、培養(yǎng)一般不能人工培養(yǎng)Nichols株（有毒株）能接種在家兔睪丸中或眼前房內(nèi)繁殖，能保持毒力轉(zhuǎn)種至加有多種氨基酸的兔睪丸組織碎片的特殊培養(yǎng)基中，25厭氧環(huán)境下能使螺旋體保持運(yùn)動能力4-7天1981年Fieldsteel等采用棉尾兔單層上皮細(xì)胞在1.5%氧的大氣環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)9-12天孵育后，螺旋體數(shù)比接種數(shù)平均增加49倍，對兔仍保持毒力Reiter株能生長繁殖，已喪失致病力Nichols株和Reiter株已廣泛用作多種梅毒血清學(xué)的診斷抗原,5,(五）、生存條件厭氧寄生物，在人體內(nèi)可長期生存，體外不易生存干燥、肥皂水及一般消毒劑如1：1000苯酚、新潔爾滅、稀酒精均可于短時間將其殺死在血液中4經(jīng)3日可死亡，故在血庫冰箱冷藏3日以上的血液就無傳染性溫度的影響：41-42時可生活1-2小時，在48僅半小時即失去感染力，100立即死亡。對寒冷抵抗力大，在0時，可生活48小時，如將梅毒病損標(biāo)本置于冰箱內(nèi)，經(jīng)1周仍可致病。在低溫（-78）保存數(shù)年，仍可保持其形態(tài)、活動及毒性在封存的生理鹽水稀釋的組織液中可生活10小時左右在潮濕的器具或濕毛巾中，亦可生存數(shù)小時在干燥環(huán)境中可見迅速死亡。,6,（六）、宿主梅毒螺旋體只感染人類人是梅毒的唯一傳染源,7,（七）、毒力因子目前未證明具有內(nèi)毒素或外毒素粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子莢膜樣的粘多糖能保護(hù)菌體免受環(huán)境中不良因素的傷害，在體內(nèi)可阻止大分子物質(zhì)（如抗體）穿透，從而保護(hù)菌體，還有抗吞噬作用粘多糖酶與對組織細(xì)胞的吸附，對組織基質(zhì)的分解和莢膜的合成有密切關(guān)系,8,（八）、致病性由于其表面有賴以生存的莢膜樣的粘多糖，莢膜中含有的N-乙酰-D-半乳糖胺，不能自行合成，須從宿主細(xì)胞獲得其粘多糖酶吸附含粘多糖的組織細(xì)胞表面的粘多糖受體上，分解宿主細(xì)胞的粘多糖、獲取合成莢膜所需的物質(zhì)由于粘多糖是宿主組織和血管支架的重要基質(zhì)成分，粘多糖被梅毒螺旋體分解后，組織受到損傷破壞，從而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管腔閉合性動脈內(nèi)膜炎，動脈周圍炎及壞死，潰瘍等病變,9,（九）、抗原1表面特異性抗原：刺激機(jī)體產(chǎn)生特異凝集抗體及密螺旋體制動或溶解抗體，后者加補(bǔ)體可溶解螺旋體2螺旋體內(nèi)類屬抗原：可產(chǎn)生補(bǔ)體結(jié)合抗體，與非病原性螺旋體有交叉反應(yīng)3，螺旋體與宿主組織磷脂形成的復(fù)合抗原：當(dāng)螺旋體侵入組織后，組織中的磷脂可粘附在螺旋體上，形成復(fù)合抗原，此種復(fù)合抗原可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗磷脂的自身免疫抗體，稱為反應(yīng)素（Aegagin），可與牛心肌或其他正常動物心肌提取的類脂質(zhì)抗原起沉淀反應(yīng)（康氏試驗）或補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（華氏試驗）,10,(十）、免疫以細(xì)胞免疫為主，體液免疫只有一定的輔助防御作用當(dāng)螺旋體從體內(nèi)清除后可再感染，而且仍可出現(xiàn)一期梅毒癥狀此病周期性潛伏與再發(fā)的原因可能與體內(nèi)產(chǎn)生的免疫力有關(guān)機(jī)體免疫力強(qiáng)，螺旋體能變成顆粒形或球形，在體內(nèi)一些部位潛伏起來，一旦機(jī)體免疫力下降，螺旋體又可侵犯體內(nèi)某些部位而復(fù)發(fā)。,11,二、檢測方法-病原體檢查,梅毒螺旋體檢查是診斷早期梅毒的最佳方法。診斷一期梅毒、二期梅毒時，可取患者的滲出液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下觀察螺旋體的特征性形態(tài)和運(yùn)動方式.病原學(xué)檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法,12,暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色和熒光抗梅毒螺旋體單克隆抗體等檢查方法，直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。暗視野顯微鏡檢查已被世界衛(wèi)生組織指定為性病實驗室必備項目之一。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，,13,14,暗視野顯微鏡檢查,15,鍍銀染色,16,檢測方法-血清學(xué)檢測,根據(jù)檢測所用抗原不同，臨床血清試驗分為兩大類：1.非梅毒螺旋體抗原血清試驗2.梅毒螺旋體抗原血清試驗,17,檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗,性病研究實驗室試驗（VDRL）不加熱血清反應(yīng)素試驗（USR）血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR、TRUST）,18,檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗,所有的非梅毒螺旋體血清試驗的抗原基本成分都一樣,其基本成分是心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似,19,檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗,RPR試驗特點(diǎn)：在USR試劑成分的基礎(chǔ)上加入黑色碳顆粒作為沉淀的指示物用白色的硬紙片替代玻片血清不需要滅活不需要顯微鏡觀測結(jié)果可作定量試驗有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便操作簡單價格便宜試驗的結(jié)果可長期保存,20,檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗,甲苯胺紅試驗(TRUST)特點(diǎn)：其原理和成分與RPR試驗相同用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒其余的特點(diǎn)均與RPR相同,21,非梅毒螺旋體血清試驗原理示意圖,22,RPR結(jié)果,23,TRUST結(jié)果,24,檢測方法非梅毒螺旋體血清試驗臨床意義,非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。,25,檢測方法-非梅毒螺旋體血清試驗特點(diǎn),前帶現(xiàn)象指非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進(jìn)行試驗，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。,26,檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗,采用梅毒螺旋體作抗原，是特異性的抗原體反應(yīng)。梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TP-PA）熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）、梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗（ELSA-TP）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB-Test）,27,檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗,TPPATPPA試驗原理與TPHA試驗基本相同。TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒替代TPHA試驗中致敏羊紅細(xì)胞，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性。明膠粒子為洋紅色，在操作部步上也較為方便，出結(jié)果較快。,28,檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗,FTA-ABSFTA-ABS試驗是檢測梅毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗。其原理是將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter螺旋體制備而成）吸收過的梅毒患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FTIC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，形成熒光的抗原抗體復(fù)合物。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯出蘋果綠色的熒光，即為陽性反應(yīng)。,29,+,Sheepredcell,T.pallidum,+,Sensitisedcell,Sensitisedcell,SpecificAntibody,Hemagglutination,TPPA/TPHA,30,檢測方法-梅毒螺旋體血清試驗的臨床意義,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA試驗仍可陽性，故TPPA試驗陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。TPPA陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進(jìn)行診斷。,31,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗結(jié)果解釋示意圖,早期,晚期,一期,二期,早期潛伏,晚期潛伏,三期,治療前治療后,陽性,陰性,32,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗結(jié)果解釋示意圖,早期,一期,二期,早期潛伏,晚期,晚期潛伏,三期,治療前治療后,陽性,陰性,33,梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果的臨床意義總匯,USRTPHA意義RPRTPPAVDRLFTA-ABS_排除梅毒一期梅毒的早期艾茲病患者合并梅毒+現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生的嬰兒除外)+-生物學(xué)假陽性-+早期梅毒經(jīng)治療后,34,梅毒血清假陽性反應(yīng),技術(shù)性假陽性反應(yīng)：如實驗室操作錯誤，標(biāo)本溶血等，如重復(fù)試驗，無梅毒患者血清試驗成為陰性。生物學(xué)假陽性反應(yīng)：因非螺旋體抗原血清試驗是非特異性的，在其它一些疾病，尤以感染性疾病，也可釋放心擬脂至血液中，產(chǎn)生反應(yīng)素，如麻風(fēng)、麻疹、瘧疾、傳染性肝炎、病毒性肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出現(xiàn)陽性，但這類患者血清反應(yīng)滴度低，很少超過1：8。而且半年內(nèi)漸轉(zhuǎn)成陰性。另外可用特異性的梅毒血清反應(yīng)證實。如用FTAABS試驗,35,假陰性反應(yīng),在梅毒螺旋體感染后12周內(nèi)可呈陰性反應(yīng)梅毒螺旋體感染不久即開始治療晚期梅毒患者的血清中反應(yīng)素含量低，敏感性低的梅毒血清試驗易出現(xiàn)陰性反應(yīng)在二期梅毒時RPR試驗也可出現(xiàn)陰性反應(yīng)，前帶現(xiàn)象(proz