結核感染T細胞斑點試驗的臨床應用PPT課件.pptVIP

1,結核感染T細胞斑點試驗的臨床應用,.,2,主要內(nèi)容,原理 結果的判斷 臨床應用 評價,3,一、T-SPOT.TB的原理,結核分枝桿菌感染機體后被巨噬細胞吞噬，但不能完全將其清除，巨噬細胞凋亡后釋放出大量特異性抗原，并遞呈給特異性的CD4、CD8T細胞，使其激活并釋放大量-干擾素。 大量研究表明結核抗原特異分泌-干擾素的T 細胞可作為結核分枝桿菌感染的一種可靠標志物。,4,一、T-SPOT.TB的原理,外周血T-SPOT即利用酶聯(lián)免疫斑點技術（ELISPOT）通過檢測結核分枝桿菌特異性抗原刺激后外周血單個核細胞釋放的-干擾素來檢測抗原特異性 淋巴細胞的應答反應，從而判斷結核感染狀態(tài)。 每一個斑點代表一個分泌細胞因子的T細胞，記數(shù)斑點數(shù)量可以獲得外周血中結核致敏的T細胞數(shù)量。,5,一、 T-SPOT.TB的原理,結核特異性抗原早期分泌靶向抗原(ESAT-6)和培養(yǎng)濾過蛋白(CFP-10) 由結核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白，只存在于結核分枝桿菌群(包括人型、牛型和非洲型分枝桿菌)及其它幾種致病性分枝桿菌(如堪薩斯分枝桿菌，Szulgai 分枝桿菌，海分枝桿菌)中，是T 細胞的靶抗原，能誘導皮膚遲發(fā)型超敏反應并刺激外周血單核細胞產(chǎn)生-干擾素。,6,二、結果的判斷,試驗分四組：空白對照組、抗原組(ESAT-6和CFP-10)、陽性對照組(植物血凝素PHA)。 通常正常結果，空白對照孔沒有或有很少的斑點而PHA對照孔斑點數(shù)超過20個。 空白對照孔斑點數(shù)超過10個時結果被認為是“不確定”。 當PHA對照孔斑點數(shù)少于20個時，檢測結果被認為是“不確定”。 當空白對照孔斑點數(shù)為0-5個并且（抗原A或抗原B斑點數(shù)）減去（空白對照孔斑點數(shù)）等于5-7時，此結果被認為是“灰區(qū)”，應當利用所有可利用相關的的臨床信息進行判斷。必要時可進行復查。 T-SPOT.TB的實驗結果也有用每106 PBMCs中斑點形成細胞(SFCs)的數(shù)目來描述，即SFCs106PBMCs。,7,二、結果的判斷,如果抗原A和/或抗原B有應答，檢測結果為“有反應性”，參照以下標準： 空白對照孔斑點數(shù)為0-5個時且（抗原A或抗原B孔的斑點數(shù)）-（空白對照孔斑點數(shù)）6； 空白對照孔斑點數(shù)為6-10個時且（抗原A或抗原B孔的斑點數(shù)）2（空白對照孔斑點數(shù)）； 檢測結果為“無反應性”：不符合上述標準且PHA對照孔正常。 當PHA對照孔結果為“不確定”且抗原A和抗原B孔結果都為“無反應性”時，該實驗結果被認為是“并不確定”，應當復查。 “有反應性”結果表明樣本中存在針對結核桿菌特異的效應T細胞 “無反應性”結果表明樣本中可能不存在針對結核桿菌特異的效應T細胞,8,二、結果的判斷(影響因素分析),既往結核病史或影像學提示陳舊性肺結核、有結核密切接觸史或高潛伏性結核感染率可使其診斷活動性結核病的特異性降低。 只與外周血中結核特異性抗原刺激產(chǎn)生的效應T細胞有關，與感染部位無關。 與年齡、機體免疫狀態(tài)、HIV感染、營養(yǎng)不良的程度無關。 抗結核治療后效應T細胞消失，可使斑點數(shù)減少或使結果呈陰性。 與是否排菌無關。,9,三、臨床應用,活動性結核與潛伏性結核感染的鑒別 “菌陰”結核患者的輔助診斷 肺外結核的鑒別診斷 結核發(fā)病風險的預測 免疫力低下或受抑制患者的結核病診斷 區(qū)別結核感染者與BCG接種者 抗結核療效的監(jiān)測,10,四、評價（優(yōu)點）,敏感性及特異性高：不受卡介苗接種及環(huán)境分枝桿菌影響，不受機體免疫狀態(tài)影響。 應用廣泛：在活動性肺結核、肺外結核、結核性漿膜炎、潛伏性結核感染及免疫抑制的結核患者均能檢測。 診斷快速：24小時可報告結果。 可進行療效評估：治療有效則T-SPOT.TB斑點數(shù)減少甚至陰性。,11,四、評價（弊端）,目前尚無統(tǒng)一的界值用來鑒別潛伏結核感染及活動性肺結核。 在 5歲兒童、近期暴露于結核桿菌者、免疫功能低下者和需要二次檢測者中使用的證據(jù)不足。 對標本要求高：室溫保存和運輸血液樣本（18-25），不能冷凍或冷藏；血液樣本從采集到檢測不超過8小時。 結果需結合臨床和其它檢測進行判斷，陰性結果不能排除暴露或感染結核桿菌的可能性。 不能確定病變部位。,12,謝謝！,13,國外文獻報道應用ELISPOT方法檢測活動性肺結核的敏感性可達到 78% 100%, 特異性可達到80% 100%。 國內(nèi)學者研究應用ELISPOT方法檢測活動性肺結核的敏感性為83%98.8%，特異性65%100%，陰性預測值81.891.6%，陽性預測值45.367.9%。,14,有學者指出：,診斷活動性結核病患者外周血T-SPOT.TB斑點形成細胞中位數(shù)為442SFCs/106 PBMC 。 排除活動性結核病患者外周血T-SPOT.TB斑點形成細胞中位數(shù)為124SFCs/106 PBMC。 以72SFCs/106 PBMC為界值時,診斷活動性結核病的敏感性為71.9%,特異性76.4%,ROC曲線下面積為0.810。 以652SFCs/106PBMC為界值時,診斷活動性結核病的特異性達95%。,15,潛伏結核感染（LTBI）,宿主感染結核分枝桿菌后尚未發(fā)病、無活動性結核的臨床表現(xiàn)、影像學改變或細菌學證據(jù)的一種特殊狀態(tài)。 潛伏性感染者如不進行治療，約有5-10%會發(fā)展成活動性結核。 T-SPOT.TB陽性與密切接觸有更好的相關性，能更加準確地診斷LTBI。,16,潛伏性結核感染的斑點數(shù)有可能高于活動性結核，因此TSPOT.TB難以區(qū)分活動性結核和潛伏性結核感染。其原因可能有兩點： (1)潛伏性結核感染者的免疫功能良好，少量的抗原刺激就激發(fā)出活躍的保護性免疫； (2)活動性結核患者免疫功能低下，大量的抗原刺激也不足以激起有效