GB5009.157-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品有機(jī)酸的測(cè)定.pdf

中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.1 5 72 0 1 6食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中有機(jī)酸的測(cè)定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 6 - 0 9 - 2 0實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)發(fā) 布G B5 0 0 9.1 5 72 0 1 6 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替G B/T5 0 0 9.1 5 72 0 0 3 食品中有機(jī)酸的測(cè)定 。本標(biāo)準(zhǔn)與G B/T5 0 0 9.1 5 72 0 0 3 食品中有機(jī)酸的測(cè)定 相比, 主要變化如下: 標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“ 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中有機(jī)酸的測(cè)定” ; 將適用范圍擴(kuò)充至果凍、 固體飲料以及水果罐頭等食品; 增加了乳酸、 富馬酸和己二酸等被測(cè)物。G B5 0 0 9.1 5 72 0 1 61 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中有機(jī)酸的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中酒石酸、 乳酸、 蘋果酸、 檸檬酸、 丁二酸、 富馬酸和己二酸的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于果汁及果汁飲料、 碳酸飲料、 固體飲料、 膠基糖果、 餅干、 糕點(diǎn)、 果凍、 水果罐頭、 生濕面制品和烘焙食品餡料中7種有機(jī)酸的測(cè)定。2 原理試樣直接用水稀釋或用水提取后, 經(jīng)強(qiáng)陰離子交換固相萃取柱凈化, 經(jīng)反相色譜柱分離, 以保留時(shí)間定性, 外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 甲醇(CH3OH) : 色譜純。3.1.2 無(wú)水乙醇(CH3CH2OH) : 色譜純。3.1.3 磷酸(H3P O4) 。3.2 試劑配制3.2.1 磷酸溶液(0.1%) : 量取磷酸0.1m L, 加水至1 0 0m L, 混勻。3.2.2 磷酸-甲醇溶液(2%) : 量取磷酸2m L, 加甲醇至1 0 0m L, 混勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 乳酸標(biāo)準(zhǔn)品(C3H6O3) , 純度9 9%。3.3.2 酒石酸標(biāo)準(zhǔn)品(C4H6O6) , 純度9 9%。3.3.3 蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品(C4H6O5) , 純度9 9%。3.3.4 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品(C6H8N7) , 純度9 8%。3.3.5 丁二酸標(biāo)準(zhǔn)品(C4H6N4) , 純度9 9%。3.3.6 富馬酸標(biāo)準(zhǔn)品(C4H4O4) , 純度9 9%。3.3.7 己二酸標(biāo)準(zhǔn)品(C6H1 0N4) , 純度9 9%。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 酒石酸、 蘋果酸、 乳酸、 檸檬酸、 丁二酸和富馬酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液: 分別稱取酒石酸1.2 5g、 蘋果酸2.5g、 乳酸2.5g、 檸檬酸2.5g、 丁二酸6.2 5g( 精確至0.0 1g) 和富馬酸2.5m g( 精確至0.0 1m g) 于G B5 0 0 9.1 5 72 0 1 62 5 0m L小燒杯中, 加水溶解, 用水轉(zhuǎn)移到5 0m L容量瓶中, 定容, 混勻, 于4保存, 其中酒石酸質(zhì)量濃度為25 0 0g/m L、 蘋果酸50 0 0g/m L、 乳酸50 0 0g/m L、 檸檬酸50 0 0g/m L、 丁二酸1 25 0 0g/m L和富馬酸1 2.5g/m L。3.4.2 酒石酸、 蘋果酸、 乳酸、 檸檬酸、 丁二酸、 富馬酸混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液: 分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(3.4.1)0.5 0m L、1.0 0m L、2.0 0m L、5.0 0m L、1 0.0 0m L于2 5m L容量瓶中, 用磷酸溶液(3.2.1) 定容至刻度, 混勻, 于4保存。3.4.3 己二酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5 0 0g/m L) : 準(zhǔn)確稱取按其純度折算為1 0 0%質(zhì)量的己二酸1 2.5m g, 置2 5m L容量瓶中, 加水到刻度, 混勻, 于4保存。3.4.4 己二酸標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液: 分別吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(3.4.3)0.5 0m L、1.0 0m L、2.0 0m L、5.0 0m L、1 0.0 0m L于2 5m L容量瓶中, 用磷酸溶液(3.2.1) 定容至刻度, 混勻, 于4保存。3.5 材料強(qiáng)陰離子固相萃取柱(S A X) :10 0 0m g,6m L。使用前依次用5m L甲醇、5m L水活化。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀, 帶二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。4.2 天平: 感量為0.0 1m g和0.0 1g。4.3 高速均質(zhì)器。4.4 高速粉碎機(jī)。4.5 固相萃取裝置。4.6 水相型微孔濾膜: 孔徑0.4 5m。5 分析步驟警告: 實(shí)驗(yàn)人員在使用液氮時(shí), 應(yīng)佩戴手套等防護(hù)工具, 防止意外灑濺, 造成凍傷。5.1 試樣制備及保存5.1.1 液體樣品將果汁及果汁飲料、 果味碳酸飲料等樣品搖勻分裝, 密閉常溫或冷藏保存。5.1.2 半固態(tài)樣品對(duì)果凍、 水果罐頭等樣品取可食部分勻漿后, 攪拌均勻, 分裝, 密閉冷藏或冷凍保存。5.1.3 固體樣品餅干、 糕點(diǎn)和生濕面制品等低含水量樣品, 經(jīng)高速粉碎機(jī)粉碎、 分裝, 于室溫下避光密閉保存; 對(duì)于固體飲料等呈均勻狀的粉狀樣品, 可直接分裝, 于室溫下避光密閉保存。5.1.4 特殊樣品對(duì)于膠基糖果類黏度較大的特殊樣品, 現(xiàn)將樣品用剪刀鉸成約2mm2mm大小的碎塊放入陶瓷研缽中, 再緩慢倒入液氮, 樣品迅速冷凍后采用研磨的方式獲取均勻的樣品, 分裝后密閉冷凍保存。G B5 0 0 9.1 5 72 0 1 63 5.2 試樣處理5.2.1 果汁飲料及果汁、 果味碳酸飲料稱取5g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣( 若試樣中含二氧化碳應(yīng)先加熱除去) , 放入2 5m L容量瓶中, 加水至刻度, 經(jīng)0.4 5m水相濾膜過(guò)濾, 注入高效液相色譜儀分析。5.2.2 果凍、 水果罐頭稱取1 0g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣, 放入5 0 m L塑料離心管中, 向其中加入2 0 m L水后在1 50 0 0r/m i n的轉(zhuǎn)速下均質(zhì)提取2m i n,40 0 0r/m i n離心5m i n, 取上層提取液至5 0m L容量瓶中, 殘留物再用2 0m L水重復(fù)提取一次, 合并提取液于同一容量瓶中, 并用水定容至刻度, 經(jīng)0.4 5m水相濾膜過(guò)濾, 注入高效液相色譜儀分析。5.2.3 膠基糖果稱取1g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣, 放入5 0m L具塞塑料離心管中, 加入2 0m L水后在旋混儀上振蕩提取5m i n, 在40 0 0r/m i n下離心3m i n后, 將上清液轉(zhuǎn)移至1 0 0m L容量瓶中, 向殘?jiān)尤? 0m L水重復(fù)提取1次, 合并提取液于同一容量瓶中, 用無(wú)水乙醇(3.1.2) 定容, 搖勻。準(zhǔn)確移取上清液1 0m L于1 0 0m L雞心瓶中, 向雞心瓶中加入1 0m L無(wú)水乙醇(3.1.2) , 在8 02下旋轉(zhuǎn)濃縮至近干時(shí), 再加入5m L無(wú)水乙醇(3.1.2) 繼續(xù)濃縮至徹底干燥后, 用1m L1m L水洗滌雞心瓶2次。將待凈化液全部轉(zhuǎn)移至經(jīng)過(guò)預(yù)活化的S A X固相萃取柱中, 控制流速在1m L/m i n2m L/m i n,棄去流出液。用5m L水淋洗凈化柱, 再用5m L磷酸-甲醇溶液(3.2.2) 洗脫, 控制流速在1m L/m i n 2m L/m i n,收集洗脫液于5 0m L雞心瓶中, 洗脫液在4 5下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后, 再加入5 m L無(wú)水乙醇(3.1.2) 繼續(xù)濃縮至徹底干燥后, 用1.0m L磷酸溶液(3.2.1) 振蕩溶解殘?jiān)筮^(guò)0.4 5m濾膜后, 注入高效液相色譜儀分析。5.2.4 固體飲料稱取5g( 精確至0.0 1g) 均勻試樣, 放入5 0m L燒杯中, 加入4 0m L水溶解并轉(zhuǎn)移至1 0 0m L容量瓶中, 用無(wú)水乙醇(3.1.2) 定容至刻度, 搖勻, 靜置1 0m i n。準(zhǔn)確移取上清液2 0m L于1 0 0m L雞心瓶中, 向雞心瓶中加入1 0m L無(wú)水乙醇(3.1.2) , 在8 02下旋轉(zhuǎn)濃縮至近干時(shí), 再加入5m L無(wú)水乙醇(3.1.2) 繼續(xù)濃縮至徹底干燥后, 用1m L1m L水洗滌雞心瓶2次。將待凈化液全部轉(zhuǎn)移至經(jīng)過(guò)預(yù)活化的S A X固相萃取柱中, 控制流速在1m L/m i n2m L/m i n,棄去流出液。用5m L水淋洗凈化柱, 再用5m L磷酸-甲醇溶液(3.2.2) 洗脫, 控制流速在1m L/m i n 2m L/m i n,收集洗脫液于5 0m L雞心瓶中, 洗脫液在4 5 下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后, 再加入5m L無(wú)水乙醇(3.1.2) 繼續(xù)濃縮至徹底干燥后, 用1.0m L磷酸溶液(3.2.1) 振蕩溶解殘?jiān)筮^(guò)0.4 5m濾膜后, 注入高效液相色譜儀分析。5.2.5 面包、 餅干、 糕點(diǎn)、 烘焙食品餡料和生濕面制品稱取5g( 精確至0. 0 1g) 均勻試樣, 放入5 0 m L塑料離 心管中, 向其 中加入2 0 m L水后在1 50 0 0r/m i n均質(zhì)提取2m i n, 在40 0 0r/m i n下離心3m i n后, 將上清液轉(zhuǎn)移至1 0 0m L容量瓶中, 向殘?jiān)尤? 0m L水重復(fù)提取1次, 合并提取液于同一容量瓶中, 用無(wú)水乙醇(3.1.2) 定容, 搖勻。準(zhǔn)確移取上清液1 0m L于1 0 0m L雞心瓶中, 向雞心瓶中加入1 0m L無(wú)水乙醇(3.1.2) , 在8 02下旋轉(zhuǎn)濃縮至近干時(shí), 再加入5m L無(wú)水乙醇(3.1.2) 繼續(xù)濃縮至徹底干燥后, 用1m L1m L水洗滌雞心瓶2次。將待凈化液全部轉(zhuǎn)移至經(jīng)過(guò)預(yù)活化的S A X固相萃取柱中, 控制流速在1m L/m i nG B5 0 0 9.1 5 72 0 1 64 2m L/m i n,棄去流出液。用5m L水淋洗凈化柱, 再用5m L磷酸-甲醇溶液(3.2.2) 洗脫, 控制流速在1m L/m i n 2m L/m i n,收集洗脫液于5 0m L雞心瓶中, 洗脫液在4 5下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后, 用5.0m L磷酸溶液(3.2.1) 振蕩溶解殘?jiān)筮^(guò)0.4 5m濾膜后, 注入高效液相色譜儀分析。5.3 儀器參考條件5.3.1 酒石酸、 蘋果酸、 乳酸、 檸檬酸、 丁二酸和富馬酸的測(cè)定5.3.1.1 色譜柱:C A P E C E L LP AK MGS 5C1 8柱,4.6mm2 5 0mm,5m, 或同等性能的色譜柱。5.3.1.2 流動(dòng)相: 用0.1%磷酸溶液-甲醇=9 7.5+2.5( 體積比) 比例的流動(dòng)相等度洗脫1 0m i n, 然后用較短的時(shí)間梯度讓甲醇相達(dá)到1 0 0%并平衡5m i n, 再將流動(dòng)相調(diào)整為0.1%磷酸溶液-甲醇=9 7.5+2.5( 體積比) 的比例, 平衡5m i n。5.3.1.3 柱溫:4 0。5.3.1.4 進(jìn)樣量:2 0L。5.3.1.5 檢測(cè)波長(zhǎng):2 1 0n m。5.3.2 己二酸的測(cè)定5.3.2.1 色譜柱:C A P E C E L LP AK MGS 5C1 8柱,4.6mm2 5 0mm,5m, 或同等性能的色譜柱。5.3.2.2 流動(dòng)相:0.1%磷酸溶液-甲醇=7 5+2 5( 體積比) 等度洗脫1 0m i n。5.3.2.3 柱溫:4 0。5.3.2.4 進(jìn)樣量:2 0L。5.3.2.5 檢測(cè)波長(zhǎng):2 1 0n m。5.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀中, 測(cè)定相應(yīng)的峰高或峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo), 以色譜峰高或峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。( 標(biāo)準(zhǔn)圖譜見(jiàn)附錄A)5.5 試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中, 得到峰高或峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中有機(jī)酸的濃度。6 分析結(jié)果的表述試樣中有機(jī)酸的含量按式(1) 計(jì)算:X=CV10 0 0m10 0 010 0 0(1) 式中:X 試樣中有機(jī)酸的含量, 單位為克每千克(g/k g) ;C 由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試樣溶液中某有機(jī)酸的濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;V 樣品溶液定容體積, 單位為(m L) ;m 最終樣液代表的試樣質(zhì)量, 單位為克(g) ;10 0 0 換算系數(shù)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示, 結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。G B5 0 0 9.1 5 72 0 1 65 7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的1 0%。8 其他檢出限與定量限均為:a) 果汁、 果汁飲料、 果凍和水果罐頭: 酒石酸2 5 0m g/k g、 蘋果酸5 0 0m g/k g、 乳酸2 5 0m g/k g、 檸檬酸2 5 0m g/k g、 丁二酸1 2 5 0m g/k g、 富馬酸1.2 5m g/k g、 己二酸2 5m g/k g;b) 膠基糖果、 面包、 糕點(diǎn)、 餅干和烘焙食品餡料: 酒石酸5 0 0m g/k g、 蘋果酸10 0 0m g/k g、 乳酸5 0 0m g/k g、 檸檬酸5 0 0m g/k g、 丁二酸25 0 0m g/k g、 富馬酸2.5m g/k g、 己二酸5 0m g/k g;c) 固體飲料: 酒石酸5 0m g/k g、 蘋果酸1 0 0m g/k g、 乳酸5 0m g/k g、 檸檬