微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)_(經(jīng)典版).ppt

微生物的類(lèi)群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒:,如酵母菌,單細(xì)胞的動(dòng)植物,如草履蟲(chóng)、單細(xì)胞藻類(lèi)等,微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物,無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu),細(xì)菌、藍(lán)藻,原核細(xì)胞,課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),專(zhuān)題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,1.提供營(yíng)養(yǎng)和條件,2.防止污染,一.培養(yǎng)基：,微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),1.基本成分：,思考：微生物“吃”什么？,碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽,碳源,無(wú)機(jī)碳源：,有機(jī)碳源：,CO2、CO32-、HCO3-,牛肉膏、蛋白胨等,自養(yǎng)微生物,異養(yǎng)微生物,氮源,無(wú)機(jī)氮源：,有機(jī)氮源：,NH4、NO3-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：含CHON的有機(jī)物為異養(yǎng)型微生物提供碳源、氮源、能源,概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求， 配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。,一.培養(yǎng)基：,微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),1.基本成分：,碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽,2.特殊營(yíng)養(yǎng)：,維生素、堿基等,（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）,3.pH、氧氣的需求：,4.種類(lèi)：,固體培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基,有無(wú) 凝固劑瓊脂,分離 鑒定,工業(yè) 生產(chǎn),化學(xué)成分：,物理性質(zhì)：,天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。,分析營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？,5. 配制原則,目的明確：,營(yíng)養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng),適宜的pH值：,有機(jī)碳源,異養(yǎng)型：,根據(jù)微生物的種類(lèi)、培養(yǎng)目的選擇原料,自養(yǎng)型：,不加碳源,加入緩沖劑,細(xì)菌偏堿，真菌偏酸,（CO2碳源）,巴氏消毒法,耐高溫需保持干燥的 物品，160170 12小時(shí),接種環(huán)、接種針等 金屬用具,7075、30min 80、15min,100、56min,消毒,滅菌,定義,方法,較為溫和理化方法,殺死部分有害菌體,（不包括芽孢、孢子,強(qiáng)烈的理化方法，,殺死所有微生物,煮沸消毒法,化學(xué)藥劑,紫外線,灼燒滅菌,干熱滅菌,酒精、氯氣、石炭酸等,高壓蒸汽滅菌,培養(yǎng)基， 100KPa、 121、1530min,二.無(wú)菌技術(shù)：,防止外來(lái)雜菌的污染,1.消毒與滅菌：,請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。 （1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管 （3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手,思考,練習(xí):說(shuō)出無(wú)菌技術(shù)及相應(yīng)的具體方法,工作臺(tái),操作者的手、衣著,培養(yǎng)基,培養(yǎng)皿,玻棒、,試管,接種環(huán),牛奶,無(wú)菌水,飲用水,紗布,涂布器,2.無(wú)菌范圍：,實(shí)驗(yàn)操作空間消毒,操作者的手、衣著消毒,實(shí)驗(yàn)用具滅菌,實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程,酒精燈旁操作,超凈工作臺(tái),單個(gè) 或少數(shù)菌體,2.特征：,大小、形狀、光澤度、 顏色、透明度等。,3.功能：,1.定義：,三.菌落,鑒定菌種的重要依據(jù),固體培養(yǎng)基上,大量繁殖,子細(xì)胞群體,四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：,制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,1.計(jì)算：,培養(yǎng)基用量,依配方計(jì)算各成分的用量,2.稱(chēng)量：,3.溶化：,牛肉膏黏稠，用稱(chēng)量紙稱(chēng)取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋,牛肉膏、稱(chēng)量紙 、少量水加熱溶解,取紙,蛋白胨、NaCl,瓊脂,補(bǔ)水定容,4.調(diào)pH、分裝、封口：,5.滅菌：,6.倒平板：,培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿,分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落,倒平板,約50,防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染,灼燒滅菌， 防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基,四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：,制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,純化大腸桿菌：,平板劃線法：,菌種,劃3個(gè)平板,1個(gè)不劃線,1.接種：,接種環(huán),防止劃破培養(yǎng)基,（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）,（空白對(duì)照）,問(wèn)題討論,為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物,殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。,及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,6支試管，分別加入9ml無(wú)菌水,101,102,103,104,105,106,稀釋涂布平板法：,a.梯度稀釋菌液：,菌液,微量 移液器,稀釋涂布平板法：,a.梯度稀釋菌液：,b.涂布平板：,不超過(guò)0.1ml,各梯度分別涂布3個(gè)平板,1個(gè)不涂布作空白對(duì)照,滴,灼,試,涂,稀釋103倍,稀釋104倍,稀釋105倍,平板劃線法：,稀釋涂布平板法：,2.培養(yǎng)：,將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基,放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h后，,觀察并記錄,五.菌種的保藏：,1.臨時(shí)保藏：,試管固體斜面培養(yǎng)基上,4,2.長(zhǎng)期保存：,菌種易被污染、變異,甘油管藏,1ml甘油1ml菌液,20,一.培養(yǎng)基：,微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),1.基本成分：,碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽,2.特殊營(yíng)養(yǎng)：,維生素、堿基等,（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）,3.pH、氧氣的需求：,4.種類(lèi)：,固體培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基,有無(wú) 凝固劑瓊脂,分離 鑒定,工業(yè) 生產(chǎn),化學(xué)成分：,物理